DH71CRP全血血細胞分析儀的性能評價

宿亞菲，孫雯雯，張樂，陳冬哲，王召寶，邢芳琳，王秀芹，劉玲玲

1. 濟寧醫學院 醫學信息工程學院 生物醫學工程專業 2015級，山東 日照 276826；2. 山東大學附屬省立醫院 臨床醫學檢驗部，山東 濟南 250021

引言

全血細胞分析儀目前是國內外全血血液分析最常用的篩檢儀器之一，DH71CRP（帝邁，深圳）是一款設置有微量末梢全血、靜脈全血、預稀釋三種檢測模式，具有雙通道白細胞五分類及異常細胞篩選功能和全血CRP定量檢測的全自動血液分析儀。末梢全血模式用血量僅20 μL即能完成血細胞計數、形態學五分類和全血CRP定量測定，用時1 min。因其用血量少、檢測時間短、采用HCT校正技術，能夠實現全血CRP結果的個體化校正，全血CRP結果與血清有很好的相關性，試劑成本低，現已成為兒童醫院、大型綜合醫院急診兒科化驗室不可或缺的設備之一，尤其適合標本量較大的、對TAT時間要求高、對檢驗結果準確度要求高的臨床檢驗醫學實驗室。根據ISO15189文件CNAS CL02醫學實驗室質量和能力認可準則（ISO15189:2012）的要求，參考衛生行業標準WS/T406-2012《臨床血液學檢驗常規項目分析質量要求》[1]，按照NCCLS EP5-A2[2]、EP15-A2[3]、EP6-P2[4]、EP9-A2[5]、EP10-A2[6]文件要求，參考全血血液分析儀性能驗證的文獻資料[7-14]，對本實驗室新安裝的DH71CRP全血血細胞分析儀檢測系統或方法的主要分析性能參數進行驗證和評價。

1 資料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 驗證儀器及參比儀器

驗證儀器為DH71CRP全血血細胞分析儀，參比儀器為Sysmex XE-2100全自動五分類血細胞分析儀（參加國家衛計委臨床檢驗中心室間質評，成績合格）。

1.1.2 試劑

原裝配套試劑（DIL-A稀釋液, 批號：20170624，有效期：20190623; LYA-1溶血劑,批號：20170415，有效期：20190414; LYA-2溶血劑,批號：20170221，有效期：20190220；LYA-3溶血劑，批號：20170418，有效期：20190417；校準品，CBC-CAL PLUS/DM-CAL PLUS，批號：PLUS0917，有效期：20171005；質控品為血液學五分類X非定值質控品PRETROL BLOOD（批號：662290；有效期：20170717）；Sysmex原裝配套試劑（在效期內）、質控品e-CHECK(XE)ASSAY（批號：71340800；有效期：20170806）。

1.2 標本來源

所有檢測標本選擇2017年6月20日至7月12日就診的門診，住院患者和健康體檢人員的EDTA抗凝全血標本。

1.3 方法

性能驗證指標：精密度（批內、批間）、準確度、可比性、線性范圍、臨床可報告范圍、攜帶污染率、不同進樣模式間比對、儀器白細胞五分類性能。

1.3.1 儀器校準

由資深的工程師按DH71CRP SOP、參考WS/T347-2011《血細胞分析的校準指南》，使用合格的全血校準品進行儀器血常規各參數的校準，校準結果符合廠家聲明和指南要求。

1.3.2 本底（空白）檢測

用儀器配套稀釋液作為標本，在儀器選定的檢測模式下計數3次，測得結果為該種檢測模式當前狀態下的空白計數結果。若開機本底未達到要求者，必須經廠家售后服務工程師檢修合格后才能做余下相關測試。

1.3.3 攜帶污染率測定

根據EP10-A2取高濃度全血標本，連續測定3次，測定值分別為 H1、H2、H3；再取低濃度全血標本，連續測定3次，測定值分別為L1、L2、L3。按公式計算攜帶污染率。

1.3.4 精密度驗證

根據WS/T406-2012和EP5-A2、EP15-A2文件，參照廠家聲明的CV進行驗證。

（1）批內精密度。取高、中、低3個水平的新鮮全血，連續重復測定21次，取后10次結果計算變異系數（CV）和標準差（S）；將實驗所得的CV值與儀器廠家聲明的CV值進行比較。

（2） 批間精密度。取高、低兩個水平質控品，每天測定3次，每次檢測之間相隔2 h，連續測定5 d，一共收集15個數據，如果因為質量控制程序或操作問題判斷一次為失控，應剔除數據，并增加執行一次檢測；計算CV和S。實驗所得的CV值應符合WS/T406-2012批內、批間精密度評價標準，CV小于或等于各指標精密度評價標準判為合格。

1.3.5 準確度驗證

本研究參考WS/T407-2012[15]《醫療機構內定量檢驗結果的可比性驗證指南》，按照EP9-A2文件驗證方案：用臨床標本通過系統間的比對進行偏倚評估來進行準確度驗證。選取10份當日采集的、各驗證指標結果分布在參考范圍內的的患者血液標本，同時在參比儀器和驗證儀器上進行2次檢測，取均值，同一標本在兩檢測系統之間的檢測時間之差不超過4 h。

偏倚符合WS/T406-2012對準確度驗證偏倚要求。

1.3.6 線性范圍驗證

參照WS/T408-2012[16]要求，參照EP6-A2文件，由于全血血液標本選取高值和低值樣本的不可混合性的特殊性，本試驗選取1份接近預期上限的高值全血標本，與儀器配套的稀釋液進行混合配制，分別按100%，80%，60%，40%，20%，10%（當需要時），5%（當需要時）的比例進行稀釋，每個稀釋度測定1次。將實測值與理論值作比較（偏離應小于10%），計算Y=aX+b，驗證線性范圍。判定標準：a值在1±0.05范圍內，相關系數r≥0.975或r2≥0.95為可接受。

1.3.7 儀器白細胞五分類的比對與驗證

（1）形態學正常的白細胞儀器五分類的結果比對與驗證。取20份非血液科非腫瘤科住院患者的EDTA-K2抗凝血，每份標本分別在兩臺比對儀器上重復測定2次，取五分類結果均值計算絕對偏差。同時每份標本制備血片2張，分別由2位具備資格的檢驗人員在油鏡下選擇體尾交界處，分類計數200個白細胞，共400個，取均值與DH71CRP儀器五分類均值結果進行比對[14]。

（2）形態學異常的白細胞儀器五分類驗證。取20份血液科或腫瘤科住院患者的EDTA-K2抗凝全血，驗證步驟同1.3.7中的步驟（1），取均值與DH71CRP儀器五分類均值結果進行符合度驗證[17]。

1.3.8 不同進樣模式間的比對結果驗證

儀器校準后，取5份臨床樣本分別使用兩種進樣模式檢測，每份樣本各檢測2次，分別計算兩種模式下檢測結果均值間的相對偏差，結果應符合衛生行業標準的判斷標準要求。

1.4 數據處理

采用Excel 2003軟件進行數據分析，對各指標的檢測結果分別計算算術平均值、S及相對偏差，可比性和線性驗證計算回歸方程Y=aX+b和r。

2 結果

2.1 本底計數

經過用稀釋液作為樣本連續檢測3次，WBC、RBC、HGB、PLT最大值均為0，滿足WS/T 406-2012。

2.2 攜帶污染率

DH71CRP全血血液分析儀測定WBC、RBC、PLT、Hb的攜帶污染率均遠低于判定標準的要求，見表1。

表1 攜帶污染率驗證結果

2.3 精密度驗證

WBC、RBC、PLT、Hb、MCV的批間、批內精密度驗證結果均低于判定標準，見表2，滿足WS/T406-2012的要求。

表2 批內以及批間精密度驗證結果（%）

2.4 準確度驗證

通過對比試驗，DH71CRP與參比儀器測定結果進行均值偏倚計算，符合行業標準要求的數據達到80%即判斷為合格。見表3。

表3 準確度驗證結果（%）

2.5 線性驗證

WBC、RBC、Hb、HCT和PLT線性方程及線性范圍，見表4，各檢測項目的線性驗證結果均符合合格的判定標準。

表4 線性驗證結果

2.6 儀器白細胞五分類的比對與驗證

（1）形態學正常的白細胞儀器五分類驗證結果，見表5。取20份非血液科非腫瘤科住院患者的EDTA-K2 抗凝血，每份標本分別在兩臺比對儀器上重復測定2次，取五分類結果均值計算絕對偏差。同時每份標本制備血片2張，分別由2位具備資格的檢驗人員在油鏡下選擇體尾交界處，分類計數200個白細胞，共400個，取均值與DH71CRP儀器五分類均值結果進行比對。儀器間結果比對，見表5，與人工顯微鏡檢分類有很好的一致性。

表5 形態學正常的白細胞儀器五分類結果的比對表（%）

（2）形態學異常的白細胞儀器五分類驗證結果，見表6。取20份血液科或腫瘤科住院患者的EDTA-K2抗凝全血，驗證步驟同（1），取均值與DH71CRP儀器五分類均值結果進行符合度驗證[17]。儀器間結果比對見表6，與人工顯微鏡檢分類有很好的符合性。20例樣本說明：有7份 （3、8、9、12、16、17、18號）鏡檢復合異型淋巴細胞占比分別為6.5%、11%、13%、5.7%、9%、10.5%、7%，兩儀器均有報警提示，散點圖上也發現有明顯的異常熒光區；有5例（1、2、11、13、15號）急性淋巴細胞白血病，鏡檢復合幼稚淋巴細胞占比12%，66.5%、15%、45%、23%，兩儀器均有報警提示，2號DH71CRP散點圖上顯示淋巴細胞群與單核細胞群分界不清，XE-2100散點圖上顯示淋巴細胞群與單核細胞群未分類；有3例（5、6、20號）急性髓系白血病鏡檢復合幼稚細胞占比為23%，45%、35%；3例（4、7、14號）為慢性粒細胞白血病，2例（10、19號）為慢性淋巴細胞白血病。

表6 形態學異常的白細胞儀器五分類結果比對表（%）

2.7 不同進樣模式間的結果驗證

儀器校準后，取5份臨床樣本分別使用兩種進樣模式檢測，每份樣本各檢測2次，分別計算兩種模式下檢測結果均值間的相對偏差，80%樣本WBC、RBC、PLT、Hb、MCV比對的偏差范圍結果符合WS/T406-2012的判斷標準要求。

3 討論

CNAS CL02醫學實驗室質量和能力認可準則（ISO15189:2012）、臨床醫學實驗室管理辦法、CAP實驗室認證體系、衛生行業標準，都闡述了檢測系統性能驗證是臨床實驗室質量管理的重要內容，系統性能良好是保證患者檢驗結果報告準確、可靠的前提。良好的實驗規范在最大程度上可以消除可能影響實驗結果的主觀和客觀因素，減少誤差，確保檢驗結果的準確可靠[18]。實驗室在新設備或新試劑在投入使用前必須對其性能包括精密度、準確度、線性及攜帶污染率等進行驗證和評價。

本研究中，DH71CRP全血血細胞分析儀在精密度、準確度、線性、攜帶污染率、不同模式間的比對、儀器白細胞五分類指標驗證均符合要求，線性范圍與廠家聲明一致，儀器檢測的線性范圍很寬，完全能滿足臨床上標本的準確定量分析。特別需要強調的是白細胞五分類驗證，無論是白細胞形態學正常還是異常的標本驗證中，與XE-2100儀器有很好的可比性，與顯微鏡人工分類相比，有良好的符合性；對于白細胞形態學異常的標本，儀器也都有報警提示，散點圖上也有異常改變。

綜上所述，DH71CRP全血血細胞分析儀準確度及精密度良好，攜帶污染率低，線性范圍覆蓋臨床可能遇到的水平，是一臺性能良好的血液分析儀，可用于檢驗科的日常工作，基本能滿足臨床患者血液標本分析的需要。但是由于比對的異常樣本例數較少，該結果會有偏差，需要在以后的使用中不斷豐富病例。但是白細胞五分類的金標準還是人工顯微鏡檢，要求檢驗人員在日常報告審核工作中，除了關注儀器計數的異常外，應根據本科室制定的復檢規則并結合儀器報警提示、散點圖等信息[19]，在必要時進行人工顯微鏡復檢[20]，確保發出的臨床報告準確可靠。給臨床醫師提供更多有價值的信息。