TRIP6在胰腺上皮內瘤變及胰腺癌中的表達及臨床意義

葉渟渟 王雯 張曉蘭

1福建醫科大學福州總醫院臨床醫學院，福州 350025；2福州總醫院消化內科，福州 350025

胰腺癌是一種早期確診率低、預后差、病死率極高的惡性疾病，其發病率在全球范圍內呈逐年上升趨勢。超過95%的胰腺癌是胰腺導管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma，PDAC)[1]，它通常由胰腺上皮內瘤變(pancreatic intraepithelial neoplasias，PanINs)發展而來[2]?；谛螒B學異型程度，PanINs又被進一步分為PanIN-1、PanlN-2和PanlN-3。甲狀腺激素受體相互作用蛋白6(thyroid hormone receptor interactor 6，TRIP6)是zyxin 家族成員之一，可參與多種蛋白的功能調節。它作為一個平臺可募集大量分子，通過調節肌動蛋白、信號轉導，參與肌動蛋白細胞骨架重組、細胞黏附、遷移、抗凋亡應答及轉錄調控。TRIP6結構的特異性和功能的多樣性使其在多種腫瘤的發生、發展中扮演著重要的角色[3]。本研究檢測TRIP6蛋白在正常胰腺組織、PanINs、PDAC中的表達，探討其在PDAC發生中的作用，以期為闡明PDAC的發病機制及臨床診療思路提供新的線索。

材料與方法

一、胰腺組織標本

收集2012年1月至2016年12月福州總醫院病理科存檔的胰腺組織石蠟標本111例。其中正常胰腺組織43例(胰腺外傷6例，癌旁組織32例，異位胰腺5例)、PanINs 18例(86個病灶，其中25個病灶為PanIN-1，33個為PanIN-2，28個為PanIN-3)、PDAC 50例。PanlNs的分級參照常曉燕等[4]報道的PanINs分類系統。病例入選標準：(1)術前未行輔助放化療；(2)所有標本均經術后病理證實。50例PDAC患者臨床病理資料完整。

二、方法

所有標本常規石蠟包埋，4 μm厚連續切片，以兔抗人TRIP6多克隆抗體進行SP法染色。檢測步驟嚴格按試劑盒說明書進行。兔抗人TRIP6多克隆抗體購自美國Abcam公司，工作濃度為1∶100，非免疫胎牛血清、PBS緩沖液、內源性過氧化酶阻斷劑、第二代即用型免疫組織化學EliVisionTMplus廣譜試劑盒、DAB顯色試劑盒等均購自福州邁新生物技術開發有限公司。以細胞質和(或)胞核內觀察到棕黃色顆粒為陽性。由兩名病理科醫師獨立閱片，每例組織切片隨機采取5個視野拍攝圖片，應用IPP(Image-Pro Plus 6.0)專業圖像分析軟件進行圖像分析，每張圖片獲取陽性區域的吸光度值(IOD)，除以陽性區域面積(Area)，獲取AOD值表示免疫組織化學評分(immunohistochemistry score，IHCS)[5]，取5個視野的AOD均值作為每例標本的IHCS。根據王偉等[6]方法，取IHCS第75百分位數(P75)作為TRIP6表達高低的臨界值。

三、統計學處理

結 果

一、不同胰腺組織TRIP6的表達量

TRIP6主要表達在癌細胞的胞質，少數在胞核表達。正常胰腺組織TRIP6陰性表達或僅有極少量表達(圖1A)；PanINs組織TRIP6表達隨著組織異型程度增加由弱陽性表達逐漸增強(圖1B～1D)；PDAC組織TRIP6強陽性表達(圖1E)。正常胰腺組織及PanIN-1、PanIN-2、PanIN-3、PDAC組織TRIP6表達的IHCS分別為(0.010±0.003)、(0.029±0.003)、(0.055±0.014)、(0.090±0.025)、(0.094±0.030)分，各組間的差異有統計學意義(P<0.01)。組間兩兩比較結果顯示，正常胰腺組TRIP6表達量均顯著低于其他4組，PanIN-1組表達量均顯著低于除正常胰腺組外的其他3組，PanIN-2組表達量顯著低于PanIN-3組和PDAC組，差異均有統計學意義(P值均<0.05)；PanIN-3組表達量雖然低于PDAC組，但差異無統計學意義(P=0.13)。

圖1 正常胰腺組織(1A)及PanIN-1(1B)、PanIN-2(1C)、PanIN-3(1D)、PDAC (1E)組織TRIP6的表達(免疫組化 ×100)

二、PDAC組織TRIP6表達與臨床病理特征的關系

以PDAC組織TRIP6表達量0.104分為界分為低表達和高表達兩組，結果顯示，PDAC組織TRIP6表達與術前血清CA19-9水平、胰腺癌分化程度、神經浸潤、淋巴結轉移、遠處轉移明顯相關，而與患者性別、年齡及腫瘤大小、腫瘤部位、血管浸潤、浸潤深度、TNM分期無關(表1)。

討 論

胰腺癌是目前世界范圍內惡性程度最高的腫瘤之一，其1年和5年生存率僅為25%和5%[7]。由于缺乏有效的早期檢測指標，胰腺癌被發現時往往已是晚期，即使行外科手術切除也不能獲得滿意的療效。目前用于協助診斷胰腺癌的主要有CT、MRI、EUS-FNA、ERCP以及腫瘤標志物CA19-9、CEA等，但早期診斷仍十分困難。研究已經證實，胰腺癌主要從PanINs進展而來，因此深入研究胰腺癌前病變的分子變化，有助于早診斷、早干預，防范于未然。

TRIP6是zyxin家族成員之一，主要定位于胞質或黏著斑(Fas)，并可穿梭至細胞核，充當轉錄輔助因子[2]。Zhao等[8]研究表明，TRIP6的過表達增加AKT的活化并抑制了FOXO3a的轉錄活性，從而促進肝癌細胞的增殖。Grunewald等[9]研究發現，TRIP6在原發性尤因肉瘤(ES)中為高度過表達，利用siRNA技術沉默ES細胞TRIP6表達可促進ES細胞的增殖和侵襲。Pavlíková等[10]報道，MCF-7乳腺癌細胞TRIP6表達上調，特異性沉默TRIP6表達可導致生長的抗性MCF-7細胞數量減少。Lin等[11]報道，膠質母細胞瘤TRIP6表達上調，且與臨床預后相關，沉默TRIP6表達可抑制核p27KIP1的表達，阻礙膠質母細胞瘤的增殖。此外TRIP6還介導了多種腫瘤細胞的遷移，包括鼻咽癌[12]、尤因肉瘤[13]、卵巢腫瘤[11]等。由此可見，TRIP6在改變癌細胞生物學特性、促進腫瘤進展中發揮重要的調節作用。

表1PDAC組織TRIP6蛋白表達與臨床病理特征的關系[例(%)]

臨床病理特征例數TRIP6蛋白低表達高表達P值性別0.747 男2719(70.4)8(29.6) 女2318(78.3)5(23.7)年齡(歲)0.521 <601913(68.4)6(31.6) ≥603124(77.4)7(22.6)CA19-9(KU/L)0.000 ≤373130(96.8)1(3.2) >37197(36.8)12(63.2)腫瘤大小(cm)0.734 <41411(78.6)3(21.4) ≥43626(72.2)10(27.8)腫瘤部位0.445 胰頭3930(76.9)9(23.1) 胰體尾117 (63.6)4(36.4)分化程度0.019 高2018(90.0)2(10.0) 中1713(76.5)4(23.5) 低136(46.2)7(53.8)神經浸潤0.000 有198(42.1)11(57.9) 無3129(93.5)2(64.5)血管浸潤0.332 有2718(66.7)9(33.3) 無2319(82.6)4(17.4)淋巴結轉移0.013 有72(28.6)5(71.4) 無4335(81.4)8(18.6)遠處轉移0.018 有51(25.0)4(75.0) 無4536(80.0)9(20.0)浸潤深度0.120 T2129(75.0)3(25.0) T33125(80.6)6(19.4) T473(42.9)4(57.1)TNM分期0.928 Ⅰ+Ⅱ3828(73.7)10(23.6) Ⅲ+Ⅳ129(75.0)3(25.0)

然而國內外對于TRIP6與胰腺癌的研究卻鮮有報道，且無有關于其在胰腺癌前病變中表達的研究。本研究結果顯示，正常胰腺組織無TRIP6表達或僅有少量表達；而各級別PanINs、PDAC中呈不同程度的陽性表達，且隨著組織異型程度增加，TRIP6的表達逐漸增強，組間差異具有統計學意義，表明TRIP6表達增加可能是PDAC發生的早期事件，且可能參與了PDAC的演進全過程。通過PDAC的TRIP6表達與臨床病理特征關系的分析，顯示TRIP6表達與PDAC神經浸潤、淋巴結轉移、遠處轉移、分化程度、血清CA19-9水平明顯相關。神經浸潤是胰腺癌的主要特征，發生率高達80%～100%[14-15]，可導致腫瘤擴散及產生癌性疼痛。本課題組既往研究已證實TRIP6在具有高神經浸潤能力的人胰腺癌Capan-2細胞株中表達強于低神經浸潤能力的PANC1細胞株[16]，表明TRIP6在胰腺癌神經浸潤的過程中發揮一定作用。CA19-9是目前公認且用于胰腺癌診斷及判斷預后的實驗室指標。本研究發現CA19-9升高的PDAC患者TRIP6的IHCS較高，CA19-9有望成為胰腺癌預后的評估指標。TRIP6表達與其他臨床病理特征無相關性，可能與病例選擇、病例數量及TRIP6高低表達的臨界值選擇等方面的因素有關。

利益沖突所有作者聲明不存在利益沖突