瘦素/脂聯素基因多態性與痰濕質睡眠呼吸暫停相關性研究

嚴嫻婷 顧 亮 杜堅宗 吳文娟 吳海燕 李志軍

阻塞性睡眠呼吸暫停（obstructive sleep apnea，OSA）是由于患者睡眠時上氣道完全或部分阻塞，導致呼吸暫停和睡眠結構紊亂、引起夜間反復低氧血癥和高碳酸血癥。根據其臨床癥狀，歸屬于中醫“鼾癥”范疇。隋代巢元方《諸病源候論·鼾眠候》首次將鼾癥作為一個獨立病證，認為痰濕內生是其重要的發病因素。痰濕體質為常見的中醫體質類型，是產生“痰濕”這一病理產物的體質因素。迄今為止，瘦素及脂聯素同OSA 發生發展的關系已得到廣大學者肯定[1-2]。研究發現，OSA 患者血漿瘦素水平隨著病情嚴重而逐漸升高，并且同體質指數、呼吸暫停指數及夜間氧飽和度水平相關[3]。脂聯素具有調節糖脂代謝紊亂及改善胰島素抵抗等作用，目前尚無研究報道痰濕質OSA 患者同瘦素、脂聯素基因單核苷酸多態性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）的關系。本研究旨在探討痰濕質OSA 患者同瘦素及脂聯素基因SNPs 的關聯性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 所有患者均來自浙江省漢族人群，自2014 年12 月—2016 年12 月在浙江醫院呼吸睡眠研究中心進行多導睡眠儀（polysomnography，PSG）檢測診斷明確為OSA 患者。本研究經醫院倫理委員會審核通過。

1.2 OSA 診斷標準 根據《阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征診治指南（2011 年修訂版）》[4]，采用多導睡眠儀監測提示呼吸暫停低通氣指數（apnea hypopnea index，AHI）≥5，同時伴有典型的夜間睡眠打鼾伴呼吸暫停、日間嗜睡便可診斷OSA。OSA 病情嚴重程度判定標準：輕度（15＞AHI≥5 次/分）；中度（30＞AHI≥15 次/分）；重度（AHI≥30 次/分）。

1.3 中醫痰濕體質判斷標準 根據王琦制定的痰濕體質判定標準[5]：癥狀為體形肥胖，中脘痞滿，口甜黏，身重如裹，大便不實，口干不飲，胸滿昏眩，脈濡或滑，舌苔膩等。凡痰濕癥狀/體征累計積分≥9 分，診斷為痰濕體質；＜9 分者，為非痰濕體質。

1.4 納入標準 經多導睡眠監測診斷明確的OSA患者和根據中醫體質學判定為“痰濕質”、“非痰濕質”患者。所有患者均自愿簽署知情同意書后納入本研究。

1.5 排除標準 （1）未滿18 周歲；（2）嚴重的頜面畸形；（3）存在可能影響血氧飽和度的疾病，如慢性阻塞性肺病、心力衰竭、先天性心臟病等；（4）正在服用影響睡眠的藥物，如苯二氮卓類、巴比妥類、鎮靜劑等；（5）已接受針對OSA 的治療；（6）多導睡眠儀監測睡眠時間少于5h；（7）存在腫瘤、糖尿病、肝腎功能不全和自身免疫性疾病等。

1.6 指標檢測 指標檢測操作程序參照文獻[6]。所有患者經PSG 檢查后抽取靜脈血，采用AxyPrep 血液DNA 組提取試劑盒提取外周血DNA；PCR 反應引物由上海生工生物工程有限公司合成（見表1）。利用MassARRAY Assay Design 軟件設計出各SNPs的PCR 引物和單堿基延伸引物后，根據PCR 引物進行片段擴增，再進行蝦堿性磷酸酶（shrimp alkaline phosphatase，SAP）處理，單堿基延伸反應和產物純化，根據獲取的Tag SNPs 序列，使用Sequenom 公司的飛行時間質譜平臺對瘦素、脂聯素基因的SNPs 位點進行檢測。

1.7 統計學方法 應用SPSS 17.0 軟件對實驗數據進行統計分析，計算各個SNPs 位點的基因型和等位基因頻率，采用Hardy-Weinberg 平衡檢驗分析瘦素、脂聯素基因各位點基因型和等位基因的遺傳平衡狀態，采用卡方檢驗檢測各組間SNPs 位點基因型和等位基因組的差異性，P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 病例特點 本研究總共納入130 例OSA 患者，其中痰濕質組92 例，非痰濕質組38 例，兩組患者性別、年齡、OSA 病情嚴重程度等資料，差異無統計學意義（P＞0.05），組間具有可比性；痰濕質組體質量超重68 例，正常24 例；非痰濕質組體質量超重21 例，正常17 例，組間比較差異有統計學意義（P=0.023），見表2。

表1 瘦素、脂聯素各SNPs 引物序列

表2 兩組OSA 患者基本資料比較[例（%）]

2.2 瘦素和脂聯素基因各SNPs 位點基因型和等位基因分布情況比較 130 例浙江省漢族OSA 人群，共檢測瘦素基因4 個SNPs 位點和脂聯素基因5 個SNPs 位點。Hardy-Weinberg 平衡檢驗結果顯示，瘦素和脂聯素基因各SNPs 處于遺傳平衡狀態，無顯著偏倚。與非痰濕質OSA 患者比較，痰濕質OSA 患者瘦素基因4 個SNPs 位點和脂聯素基因5 個SNPs 位點基因型和等位基因分布差異無統計學意義（P 均＞0.05），見表3-4。由于兩組患者體質量分布差異有統計學意義，因此，本研究根據BMI 分層進行亞組分析，結果顯示，不論體質量超重亞組、還是正常亞組，痰濕質和非痰濕質OSA 患者瘦素和脂聯素基因各SNPs 位點基因型和等位基因分布均差異無統計學意義（P 均＞0.05），見表5-6。

3 討 論

本研究結果提示，痰濕質及非痰濕質OSA 患者瘦素基因4 個SNPs 位點和脂聯素基因5 個SNPs 位點基因型和等位基因分布差異無統計學意義，通過亞組分析也提示不同體質量的兩組患者素和脂聯素基因各SNPs 位點基因型和等位基因分布差異無統計學意義。

表3 兩組阻塞性睡眠呼吸暫?；颊呤菟?、脂聯素基因各SNPs 基因型分布比較[例（%）]

表4 兩組阻塞性睡眠呼吸暫?；颊呤菟?、脂聯素基因各SNPs 等位基因分布情況比較[例（%）]

表5 不同體質量痰濕質、非痰濕質OSA 患者瘦素及脂素素基因各SNPs 基因型分布比較[例（%）]

表5 不同體質量痰濕質、非痰濕質OSA 患者瘦素及脂素素基因各SNPs 基因型分布比較[例（%）]（續）

表6 不同體質量痰濕質、非痰濕質OSA 患者瘦素及脂素素基因各SNPs 等位基因分布比較[例（%）]

表6 不同體質量痰濕質、非痰濕質OSA 患者瘦素及脂素素基因各SNPs 等位基因分布比較[例（%）]（續）

痰濕體質是常見的中醫體質類型，是產生“痰濕”這一病理產物的體質因素，“痰”、“濕”是OSA 最常見的病理因素，痰濕壅盛，聚于上焦，阻塞氣道，致肺氣宣降失常，入夜更甚，故出現夜間打鼾、呼吸暫停及反復憋醒等臨床癥狀。本研究發現，痰濕質OSA 患者占總OSA 患者的70.8%（92/130），同付桂玲等[7]研究結果相類似，付氏等調查中醫體質與睡眠呼吸暫停發病的關系，發現痰濕體質的鼾癥患者可高達71.7%。

瘦素作為一種調節脂肪代謝的重要因子，目前大量研究證實，相對于正常人群，OSA 患者血漿瘦素水平隨著病情嚴重而逐漸升高，并且同體質指數、呼吸暫停指數及夜間氧飽和度水平相關，而當OSA 病情好轉而瘦素水平逐步降低[3]，提示OSA 能引起血漿瘦素水平升高和瘦素抵抗，使瘦素不能正常發揮調節體脂的生理功能，進而促進脂肪沉積于上氣道和內臟，并且引起神經功能失調，加重睡眠時呼吸道塌陷甚至閉塞，從而參與OSA 的發病過程，因此研究人員認為瘦素可能是呼吸睡眠紊亂是一種分子標記物[8]。Popko 等[9]研究報道，歐洲人群瘦素基因s1137101 位點多態性同OSA 發病相關。但是本研究提示瘦素基因各SNPs 位點基因型和等位基因在痰濕質和非痰濕質患者中分布差異無統計學意義，通過亞組分析提示兩組不同體質量患者瘦素基因各SNPs 位點差異無統計學意義，兩組研究得出不一樣的結果可能與種族差異有關。

脂聯素是一種含有244 個氨基酸的激素，具有調節糖脂代謝紊亂及改善胰島素抵抗等作用，近年來已成為OSA 的研究熱點之一。研究發現，OSA 患者血漿脂聯素水平降低，與疾病嚴重程度和預后相關，隨著病情的好轉而逐漸恢復正常[2，10]。Nakagawa等[10]發現，同野生型大鼠比較，敲除脂聯素基因大鼠肺動脈壁增厚及右心室肥厚更明顯，證實脂聯素參與OSA 導致的肺動脈重塑及肺動脈高壓等病理改變。Cao 等[11]研究發現，相對于脂聯素基因276 位點G/T、T/T 型，G/G 型具有更高的風險發展成為OSA。以上研究表明，脂聯素及脂聯素基因多態性同OSA發病及并發癥的發生密切相關。本研究提示，脂聯素基因各SNPs 位點基因型和等位基因在痰濕質和非痰濕質患者中分布差異無統計學意義，通過亞組分析提示兩組不同體質量患者脂聯素基因各SNPs 位點差異無統計學意義。

總之，中醫體質（痰濕質和非痰濕質）同瘦素基因及脂聯素基因SNPs 位點基因型和等位基因分布無顯著相關性。