重慶地區高脂血癥人群ApoE/SLCO1B1基因多態性與他汀類藥物的相關性研究

陳 敏，段泰豪，李勤琴，鄧少麗，陳 鳴,唱 凱

(陸軍軍醫大學第三附屬醫院檢驗科，重慶 400042)

高脂血癥是指由于機體脂質代謝或運轉異常導致血漿內一種或多種脂質高于正常值的一類疾病，常見的有高三酰甘油血癥和高膽固醇血癥，主要危害為誘發和加重動脈粥樣硬化及并發各類動脈栓塞性疾病，包括冠心病、心肌梗死、腦栓塞、腎動脈栓賽等。冠狀動脈粥樣硬化性心血管病是一種具有高患病率、高致殘率和高病死率特性的疾病，是嚴重威脅人類健康的主要殺手之一[1-2]。他汀類藥物是目前最能有效降低低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平的降脂藥物，成為了世界上臨床使用最廣泛的降脂藥。但使用他汀類藥物同樣可能出現不良反應，常見的有肝功能異常、肌病及橫紋肌溶解、消化道反應等，最嚴重的不良反應當屬橫紋肌溶解。大量應用他汀類藥物后人們發現不同個體間在降脂效果及不良反應方面有相當大的差異，研究表明載脂蛋白E(ApoE)和SLCO1B1基因是影響他汀類藥物藥效動力學和藥代動力學的兩個重要因素[3-4]。本研究通過測定重慶地區高脂血癥人群ApoE和SLCO1B1基因型及分析兩種基因的分布和相互關系來解析本地區高脂血癥患者使用他汀類藥物的合理性，為重慶地區臨床使用他汀類藥物進行調脂療法的個體化治療方案提供一定的依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年7-12月來中國人民解放軍陸軍軍醫大學第三附屬醫院血脂異?；颊?97例，包括空腹血清總膽固醇(TC)>5.2 mmol/L；三酰甘油(TG)>1.7 mmol/L； LDL-C>3.4 mmol/L；高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)<1.0 mmol/L，男252例，女245例，平均年齡(66±11)歲。

1.2 儀器與試劑 人血基因組DNA提取試劑盒購自天根生化科技(北京)有限公司、人類SLCO1B1和ApoE基因檢測試劑盒購自武漢友芝友醫療科技有限公司及BIO-RAD CFX-96實時熒光定量PCR儀。

1.3 方法 提取DNA及位點檢測，按照說明書提取外周靜脈血基因組DNA，采用PCR-熒光探針法測定ApoE基因ApoE2(526C>T)、ApoE4(388T>C)位點和SLCO1B1基因SLCO1B1*1b(388A>G)、SLCO1B1*5(521T>C)位點多態性。

1.4 統計學處理 ApoE和SLCO1B1基因型和等位基因頻率均應用頻率計數法計算。按ApoE基因型分為療效良好組(E2/E2,E2/E3)、療效正常組(E2/E4,E3/E3)、療效不良組(E3/E4,E4/E4)，并計算3組基因型頻率；再將SLCO1B1按橫紋肌溶解癥和肌病風險分為正常風險組(*1a/*1a，*1a/*1b,*1b/*1b)、中度風險組(*1a/*5，*1a/*15，*1b/*15)、高度風險組(*5/*5，*5/*15，*15/*15)，計算出3個療效組間SLCO1B1基因型頻率和等位基因頻率并進行比較及分析。

2 結 果

2.1 ApoE和SLCO1B1基因型檢測結果 使用激發波長450～490 nm(FAM)和激發波長515～535 nm(VIC)通道采集多態性ApoE和SLCO1B1基因擴增熒光信號，使用激發波長560～590 nm(ROX)通道采集內標基因擴增的熒光信號，ApoE和SLCO1B1的各種基因型判讀見表1、2。

表1 ApoE基因型結果判讀

2.2 ApoE和SLCO1B1基因型和等位基因頻率 ApoE基因型和等位基因頻率：E2/E2型1.00%，E2/E3型12.47%，E3/E3型66.80%，E3/E4型16.50%，E2/E4型2.01%，E4/E4型1.21%；APOE等位基因頻率：E2型8.25%，E3型 81.29%,E4 型10.46%。見表3。

SLCO1B1基因型頻率：*1a/*1a型6.24%，*1a/*1b型30.18%，*1b/*1b型42.66%，*1a/*5型0.00%，*1a/*15型3.02%，*1b/*15型16.10%，*5/*5型0.00%，*5/*15型0.00%，*15/*15型1.81%；SLCO1B1等位基因頻率：*1b型65.79%，*1a型22.84%，*5型0.00%，*15型11.37%。見表4。

表2 SLCO1B1基因型結果判讀

表3 ApoE中526C>T與388T>C頻率分布

表4 SLCO1B1中388A>G與521T>C頻率分布

2.3 療效良好組、療效正常組和療效不良組中SLCO1B1基因型的分布情況 根據ApoE基因型的他汀類藥物療效不同將其分為3個組，分別為療效良好組(E2/E2、E2/E3)：*1a/*1a型10.45%，*1a/*1b型29.85%，*1b/*1b型41.79%，*1a/*5型0.00%，*1a/*15型2.99%，*1b/*15型14.93%，*5/*5型0.00%，*5/*15型0.00%，*15/*150.00%；療效正常組(E2/E4、E3/E3)：*1a/*1a型5.85%，*1a/*1b型29.24%，*1b/*1b型43.86%，*1a/*5型0.00%，*1a/*15型3.22%，*1b/*15型15.50%，*5/*5型0.00%，*5/*15型0.00%，*15/*152.34%；療效不良組(E3/E4、E4/E4)：*1a/*1a型4.55%，*1a/*1b型34.09%，*1b/*1b型36.36%，*1a/*5型0.00%，*1a/*15型4.55%，*1b/*15型19.32%，*5/*5型0.00%，*5/*15型0.00%，*15/*15 1.14%。見表5。

表5 療效良好組、療效正常組和療效不良組患者中

3 討 論

他汀類藥物是一線調脂用藥，如今得到廣泛應用，其降脂療效及其他效果顯著降低了心血管疾病的發生風險。他汀類藥物能有效抑制各類膽固醇的合成，特別對降低LDL-C水平有良好的效果，還具有改善血管內皮功能、抗血小板聚集、穩定粥樣硬化斑塊、抑制血栓形成和抑制平滑肌細胞增殖及遷移等其他多效性[2,5]。研究發現，ApoE基因多態性與他汀類藥物療效具有相關性[6-7]，ApoE4攜帶者患冠心病風險較高[8]，且他汀類藥物對此類患者往往療效不佳或無療效，而ApoE3攜帶者療效正常，對ApoE2攜帶者的降脂作用最強[9-12]；故本研究中按照ApoE基因型分為療效良好組(E2/E2,E2/E3)、療效正常組(E2/E4,E3/E3)、療效不良組(E3/E4,E4/E4)，3組的比例分別為療效良好組13.47%、療效正常組68.82%、療效不良組17.71%，ApoE等位基因頻率為E2 8.25%，E3 81.29%，E4 10.46%。ApoE4等位基因頻率為10.46%，療效不良組比例為17.71%，ApoE4等位基因頻率和療效不良組比例都比較低；ApoE2和ApoE3等位基因頻率共89.54%，療效良好組和療效正常組的人數占比82.29%，這說明重慶地區的高脂血癥人群適合使用他汀類藥物進行降脂治療。

近年來，隨著他汀類藥物的廣泛使用，其不良反應也引起了人們的關注[13]，患者服用他汀類藥物后部分會出現胃腸道反應、肝功能異常、肌損害等不良反應，肌損害常見表現為無力、肌痛、肌炎，更嚴重的是出現橫紋肌溶解征，這也是他汀類藥物的最嚴重的不良反應[14-15]。SLCO1C1基因具有遺傳多態性，其中388A>G，521T>C是兩種常見的單核苷酸多態性，可以形成四種多態性SLCO1B1*1a(388A-521T)、*1b(388G-521T)、*5(388A-521T)、*15(388G-521C)。

SLCO1B1基因的突變會導致其編碼的OATP1B1轉運蛋白活性減弱[16]，表現為肝臟攝取藥物能力降低，引起他汀類藥物血藥濃度上升，增加不良反應的發生風險，尤其521T>C和橫紋肌溶解和肌病不良反應密切相關[17-21]。*1a/*1a型、*1a/*1b型、*1b/*1b型3種基因型為正常風險，比例為79.08%；*1a/*5型、*1a/*15型、*1b/*15型3種基因型為中等風險，比例為19.12%；*5/*5型 、*5/*15型 、*15/*15 型三種基因型為高度風險，比例為1.80%；SLCO1B1等位基因頻率：*1b 65.79%，*1a 22.84%，*50.00%，*1511.37%。正常風險基因型占比很大且高度風險基因型只有1.80%，SLCO1B1*5和*15等位基因頻率僅為11.37%，可看出重慶地區大多數高脂血癥人群使用他汀類藥物風險正常，小部分會有中等風險，高等風險極少。

本研究結果表明療效良好組、正常組和不良組中SLCO1B1基因型分布整體均勻，沒有顯著差別。療效良好組中*1a/*1a型、*1a/*1b型、*1b/*1b型3種正常風險基因型占82.09%，*1a/*5型、*1a/*15型、*1b/*15型3種中等風險基因型占17.91%，*5/*5型 、*5/*15型 、*15/*15 型3種高度風險基因型占0%；療效正常組中正常風險基因型占78.95%，中等風險基因型占18.72%，高等風險基因型占2.33%；療效不良組中正常風險基因型占75.00%，中等風險基因型占23.87%，高等風險基因型僅有一例并占1.13%。上述研究結果表明重慶地區高脂血癥人群使用他汀類藥物療效良好或正常且不良反應正常風險的比例很高，療效不良且中等風險有21例，療效不良且高等風險僅有1例。綜上所述，他汀類藥物依然是重慶地區高脂血癥大多數人群降脂治療的合理藥物，但應綜合考慮患者的自身情況和個體化差異來調整用藥類型和劑量。

4 結 論

根據重慶地區高脂血癥人群中的APOE及SLCO1B1基因多態性的分布發現，該人群中對他汀類藥物代謝正常(E3攜帶者)且轉運正常(*1a 、*1b攜帶者)的人群占大部分比例；但是代謝慢(E4攜帶者)且轉運異常(*5、*15攜帶者)的人群也占了一定比例，表明重慶地區的高血脂人群適合使用他汀類藥物進行治療，可通過基因型別調整藥物劑量，以降低不良反應的發生，促進其合理利用。