駝乳對2型糖尿病小鼠肝臟損傷的保護作用

何 靜 高婉婷 海 勒 劉東輝 吉日木圖，2*

（1 內蒙古農業大學 乳品生物技術與工程教育部重點實驗室 呼和浩特010018 2 內蒙古駱駝研究院 內蒙古阿拉善750306）

糖尿?。―iabetes mellitus，DM）是以高血糖為特征，并具有遺傳傾向的內分泌代謝綜合癥。常會伴隨多種并發癥，造成多種器官、多系統的損傷。糖尿病性肝病就是常見糖尿病的主要并發癥之一，該病主要是由于糖尿病肝臟組織和功能病變引起[1]。據報道，目前糖尿病性肝病的發病率正呈逐年上升的趨勢。肝臟作為機體主要的代謝器官之一，一旦受損，會直接導致肝細胞的抗氧化酶活性降低，產生大量的氧自由基（ROS），從而產生氧化應激，導致線粒體功能受損，脂質過氧化增強[2-3]。此外，大量試驗研究表明，胰島素抵抗也會導致機體糖代脂代謝的改變，從而導致肝細胞對TG 的攝取量增加，使大量TG 在肝臟內堆積[4-6]。

駝乳營養成分獨特，含有豐富的蛋白質、脂肪、乳糖以及磷、鈣、鉀等礦物質元素和維生素B、C、E 等營養成分，還富含乳鐵蛋白、免疫球蛋白、過氧化物酶和溶菌酶等保護性蛋白，具有很高的營養和保健價值[7-9]?，F代大量研究表明，駱駝乳具有治療自身免疫缺陷性疾病、水腫、黃疸、肺結核、糖尿病等疾病的作用[10-11]。早前研究顯示，駝乳對糖尿病患者和糖尿病模型動物均具有降血糖的作用[12-13]。此外，Korish 等[14]發現，駝乳具有降低空腹血糖水平、胰島素抵抗指數，并能有效提高胰島素分泌量?；谇叭说难芯炕A，本文旨在研究鮮駝乳對高糖高脂聯合鏈脲佐菌素（STZ）誘導的2 型糖尿病小鼠肝臟的保護作用，通過對空腹血糖、血脂、肝臟的抗氧化指標及肝臟病理組織切片的檢測，探討鮮駝乳對2 型糖尿病小鼠肝臟損傷的保護作用。

1 材料與方法

1.1 試驗材料及試劑

7 周齡雄性C57BL/6 小鼠24 只 （許可證編號：SCXK（京）2012-0001，SPF 級），北京維通利華實驗動物技術有限公司。自由進食、進水。

飼料：普通飼料、高脂飼料（67%基礎料+10%豬油+20%蔗糖+2.5%膽固醇+0.5%膽鹽），北京科澳協力公司。

駝乳，內蒙古阿拉善左旗。

STZ，美國Sigma 公司；血糖試紙條，三諾生物傳感股份有限公司；丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.2 儀器與設備

三諾安穩優加血糖儀，三諾生物傳感股份有限公司；酶標儀，南京華東電子；高速冷凍離心機，德國eppencbrf 公司；全自動生化分析儀，深圳邁瑞有限公司；Bio Tack 酶標儀，美國伯騰儀器有限公司；普析通用T6 新銳可見分光光度計、TU-1810 紫外分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 C57BL/6 小鼠糖尿病模型的構建與分組C57BL/6 實驗小鼠共24 只，飼養環境20～24 ℃，濕度為40%～50%，12 h 光照。隨機分為模型組與正常組，其中模型組喂高脂飼料，正常組喂普通飼料喂養。高糖高脂的飼料喂養4 周后，禁食12 h。正常組注射0.1 mol/L 檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，模型組以STZ（40 mg/kg）腹腔連續注射5 d。一周后測空腹血糖，以空腹血糖≥11.0 mmol/L 為模型的合格標準，繼續飼養4 周后處死。

1.3.2 分組與給藥 2 型糖尿病小鼠模型建立成功后，將小鼠按血糖及體質量隨機分為3 組：糖尿病模型組、正常對照組、駝乳干預組，每組8 只。用駝乳干預4 周，期間各組大鼠給藥方法如下：

正常組（NC）：普通飼料，自由飲食飲水，每日灌胃同體積的生理鹽水；病理組（DC）：高脂飼料，自由飲食飲水，每日灌胃同體積的生理鹽水；駝乳組（CM）：高脂飼料，自由飲食飲水，每日灌胃駝乳0.3 mL/10 g。

1.3.3 血清甘油三脂（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-c）、低密度脂蛋白（LDL-c）的測定 采用全自動生化儀進行檢測。將所獲取的血標本，血液離心分離血清，-20 ℃保存，應用全自動生化分析儀檢測。

1.3.4 抗氧化指標的測定 測定血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的含量和肝臟中超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、丙二醛（MDA）的含量。

1.3.5 肝臟病理結構觀察 取10%甲醛固定肝臟進行石蠟包埋、切片，采用HE 染色，光學顯微鏡觀察肝臟組織結構的變化。

1.4 統計學分析

采用SPSS 19.0 統計軟件對各組數據及數據間差異顯著水平進行統計學分析，所有數據都以±s 表示，P＜0.05 為統計學上有顯著差異。

2 結果與分析

2.1 小鼠模型造模情況

實驗期間，正常組小鼠精神狀態良好、健壯、皮毛有光澤，自主活動正常，反應靈敏，無死亡。與正常組相比，模型組小鼠毛色無光澤，腥臭味重，大小便增加，需要經常更換墊料。STZ 造模1 周后，糖尿病小鼠與空白組小鼠比空腹血糖值明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.01）。同時模型組的小鼠出現多飲、多食、多尿的典型2 型糖尿病癥狀。綜上所述，表明2 型糖尿病小鼠模型造模成功。

2.2 對糖尿病小鼠空腹血糖水平的影響

實驗期間，與正常組相比，模型組小鼠毛色無光澤，腥臭味重，出現多飲、多食、多尿的2 型糖尿病癥狀。如圖1所示，灌胃0 周時，病理模型組（DC）的糖尿病小鼠，駝乳組（CM）的空腹血糖水平兩者均顯著高于正常組（NC）的空腹血糖水平（P＜0.05），表明糖尿病模型建立成功。灌胃4 周后，與病理組（DC）小鼠相比，駝乳治療后空腹血糖濃度顯著下降（P＜0.05），然而未能恢復到空白組的空腹血糖水平（P＜0.05）。表明駝乳雖具有降低血糖濃度的作用，但未能使小鼠已受損的糖代謝完全恢復至正常水平。

圖1 實驗前、后各組小鼠的空腹血糖比較Fig.1 Fasting blood glucose of rats before and after experiment

2.3 對糖尿病小鼠血脂的影響

結果見表1，病理組（DC）小鼠的血清TC、TG和LDL-c 均顯著高于正常組 （NC），HDL-c 水平顯著降低（P<0.05）；糖尿病小鼠經駝乳干預治療后，與病理組（DC），駝乳組（CM）血清TC、TG、LDL-c 水平均顯著降低，而HDL-c 的水平顯著升高（P<0.05）。表明駝乳具有改善血脂代謝的作用。

表1 駝乳對糖尿病小鼠血脂的影響Table 1 Effects of camel milk on lipids in diabetic mice

2.4 對糖尿病小鼠抗氧化指標的影響

病理組（DC）相對于正常組（NC）血清的MDA含量顯著升高，T-SOD 活力明顯下降，且有顯著差異（P<0.05），說明糖尿病小鼠體內氧化應激反應已明顯異常。灌胃4 周后，駝乳組（CM）各項指標均有所改善（P<0.05），具體數據見表2。

表2 駝乳對糖尿病小鼠SOD 和MDA 的影響Table 2 Effects of camel milk on SOD and MDA content in the plasma of diabetic mice

由表3可見，與正常組（NC）比較，病理組（DC）MDA 顯著高于正常組（P<0.05），SOD、GSH、CAT 顯著低于正常組（P<0.05）。與病理組（DC）比較，駝乳組（CM） 的MDA 有所降低，SOD、GSH、CAT 的活力均不同程度得到恢復。結果說明，駝乳可以有效改善糖尿病小鼠肝臟抗氧化酶的活性，具體數據見表3。

表3 駝乳對糖尿病小鼠肝臟抗氧化酶活性和MDA 的影響Table 3 Effects of camel milk on antioxidant enzyme activities and MDA content in the liver of diabetic mice

2.5 對糖尿病小鼠肝臟組織病理學的影響

肝臟是胰島素的敏感器官之一。由圖2可見，正常組（NC）的肝臟肝小葉清晰，結構正常，肝組織的形態完整。而病理模型組（DC）的小鼠肝細胞大量壞死，細胞質內充有大小不等的圓形脂滴。灌胃駝乳后，與病理組相比，駝乳組（CM）小鼠的肝組織功能明顯變好，空泡數量明顯減少，肝核消失癥狀減弱，肝細胞形態較完整。實驗結果表明，與模型組小鼠相比，鮮駝乳組能改善2 型糖尿病小鼠的肝功能?？赡苡捎隈勅榫哂薪档脱枪δ?，調節肝臟的脂肪代謝，從而改善2 型糖尿病小鼠的肝臟功能。

圖2 駝乳對2 型糖尿病小鼠肝臟形態的影響（100X）Fig.2 Effects of camel milk on liver morphology in type 2 diabetic mice （100X）

3 討論

糖尿病是全球范圍內最常見的內分泌代謝疾病之一。在糖尿病患者中，2 型糖尿病患者的人數高達90%，并會出現多種器官的病變，尤其是肝臟[15-16]。研究發現氧化應激是糖尿病及其并發癥發生的主要原因[17-18]。給動物腹腔注射小劑量STZ 會造成胰島β 細胞選擇性的破壞，刺激機體產生大量的ROS，導致抗氧化酶SOD、CAT、GSH 活性下降，機體清除ROS 的能力下降，從而發生氧化應激[19]。本研究顯示，駝乳灌胃4 周后，駝乳組小鼠血清和肝臟MDA 均降低，且抗氧化酶活性均提高。表明鮮駝乳具有清除自由基和過氧化氫的作用，從而起到保護肝臟氧化損傷的能力。

2 型糖尿病常會伴隨血脂紊亂和脂肪肝的現象[20-21]?，F代大量研究發現，肝臟是胰島素分泌和合成的重要靶器官，在胰島素抵抗的狀態下，脂肪組織對胰島素的反應下降，會釋放出大量的未酯化的游離脂肪酸。過度的游離脂肪酸會形成大量的TG 沉積在肝臟中，導致肝臟內脂質沉積[22]。此外，研究發現肝臟在脂質的消化、吸收、運輸等過程中起著重要的作用，脂肪肝的形成與脂質代謝障礙有密切關系，其中血清中的TC、TG、HDL、LDL 水平均與脂肪肝關系密切[23]。目前調整脂質代謝紊亂是治療糖尿病的目的和評定療效的重要內容[24-25]。本實驗結果顯示，駝乳組（CM）血清TC、TG、LDL-c 水平均顯著降低，而HDL-c 水平顯著升高（P<0.05）。表明駝乳具有改善血脂代謝的作用。調節糖尿病小鼠血脂水平趨于正常值。并且通過肝臟切片結果顯示，駝乳對糖尿病引起的肝損傷有一定的保護作用。綜上所述，本研究結果顯示，駝乳具有降低血脂，改善肝臟細胞損傷，改善肝臟氧化應激的作用。