國產全自動化學發光測定儀檢測糖類抗原242和糖類抗原50的分析性能驗證

滿 霞，鄭 進

（1.華東療養院醫學檢驗中心，江蘇 無錫214065；2.新產業生物醫學工程股份有限公司，深圳518000）

胰腺癌是常見的消化系統腫瘤之一，由于胰腺癌早期診斷較困難，一旦發現多為晚期，切除率低，預后差，死亡率高，故通過腫瘤標志物檢測以獲得早期診斷，是目前臨床關注的焦點。糖類抗原242（CA242）是一種唾液酸化的糖鏈抗原，是一種新型的腫瘤標志物，其升高在惡性腫瘤患者中明顯高于良性病變患者及正常體檢者，而且以胰腺癌最高，其次為腸癌、胃癌［1］。糖類抗原50（CA50）是一種唾液酸脂和唾液酸糖蛋白為主的廣譜腫瘤相關抗原，主要用于胰腺癌、結腸癌、直腸癌、胃癌等的輔助診斷，其中胰腺癌患者升高最明顯［2］。CA50與CA242聯合檢測可使診斷胰腺癌的敏感性達到95.0%，CA50與CA242聯合檢測有助于增強對胰腺癌的診斷，可能在胰腺癌的早期診斷中具有重要的意義［3］。中國合格評定國家認可委員會（CNAS）將ISO 15189作為我國醫學實驗室的認可準則，并開始國內醫學實驗室的認可工作。其中，對儀器進行性能驗證是ISO 15189實驗室認可的要求之一，在本院檢驗科ISO 15189實驗室認可中，對深圳新產業生物醫學工程股份有限公司研發的原裝配套CA242、CA50檢測系統的主要分析性能進行了驗證。

材料與方法

1 樣本來源

來本院行健康體檢的體檢者血清樣本，外觀無溶血、黃疸和脂血?？崭轨o脈血采集后，室溫靜置，離心，分離血清立即用于分析，不能立即分析的血清樣本分裝后保存在-20℃冰箱。

2 儀器與試劑

深圳新產業生物醫學工程股份有限公司生產的全自動化學發光測定儀Maglumi 4000 Plus（以下簡稱深圳新產業“Maglumi 4000 Plus”），試劑、標準品及質控品均為本儀器原裝配套試劑、標準品及質控品，并全部使用同一批號，CA242檢測試劑、標準品及質控品批號均為06118073101，CA50檢測試劑、標準品及質控品批號均為03718062202。

2 方法

用深圳新產業Maglumi 4000 Plus原裝配套質控品進行常規室內質控檢測，室內質控在控后進行下列驗證實驗。

2.1 精密度驗證 批內精密度驗證：使用血清制備的低、高2個濃度樣本，連續重復測定每個樣本20次，記錄每個樣本20次測定結果，分別計算均值、標準差及變異系數（CV）；批間精密度驗證：使用血清制備的低、高2個濃度樣本，每天測試2批，每批測定1次，兩批間隔時間2小時以上，連續測定10天，記錄每個樣本20次測定結果，分別計算均值、標準差、變異系數（CV）。精密度以不超過廠家聲明為判斷標準。

2.2 正確度驗證 參考CLSI EP15-A［4］文件，以衛生部臨檢中心提供的室間質量評價控制品為定值參考物質，對衛生部臨床檢驗中心2019年6月發放的5個批號的室間質控品進行檢測，每個批號連續檢測2次，計算均值，測量均值與靶值和可接受限進行比對。

2.3 線性范圍驗證 按照CLSI EP6-A［5］文件要求，收集本院體檢者血清樣本，選取試劑說明書測量范圍低限附近樣本（CA242：2.00IU／mL，CA50：7.00IU／mL）為低值（L）樣本，選取試劑說明書測量范圍高限附近樣本（CA242：200.00IU／mL，CA50：500.00IU／mL）為高值（H）樣本，CA242、CA50低值樣本和高值樣本均使用原裝配套試劑自帶的標準品按照廠家說明書規定的方法定值，CA242標準品定標點1濃度為10.000 IU／mL，定標點2濃度為94.574IU／mL；CA50標準品定標點1濃度為7.955 IU／mL，定標點2濃度為250.752IU／mL。將高值（H）樣本和低值（L）樣本按照6L、5L＋1H、4L＋2H、3L＋3H、2L＋4H、1L＋5H、6H的比例進行混合配制，充分混勻形成系列驗證樣本，每個樣本作3次重復，計算均值和變異系數（CV）。每個均值即為各個濃度的實測值，將得到的實測值和預期值用直線回歸統計方法對數據進行處理，得到直線回歸方程Y＝b X＋a和相關系數R2，若0.97≤b≤1.03，a趨于0，且R2≥0.95，則可以接受。

2.4 臨床可報告范圍驗證［6］選取分析測量上限附近血清樣本（CA242：172.60IU／mL，CA50：423.10IU／mL），使用生理鹽水進行倍比稀釋，如1∶2、1∶4、1∶8、1∶16，依據稀釋比例計算出各個稀釋濃度的預期值，測定稀釋樣本，每個樣本測定2次，以均值表示它們的檢測值，比較各個稀釋樣品的檢測值和預期值，分別計算比值R＝檢測值／預期值，如110%≥R≥90%，定為可接受限，低于90%或者高于110%相應的稀釋度則為不可接受稀釋度。

2.5 生物參考區間驗證 參考CLSI C28-A2［7］文件，選取合格參考個體20名，按實驗室操作程序，采集處理分析樣本，將20個樣本檢驗結果與參考區間比較，如超出參考區間比例小于5%，則通過驗證。

3 統計學處理

采用SPSS 16.0統計學軟件對實驗數據進行統計分析。

結 果

1 精密度驗證結果

CA242批內精密度和批間精密度CV均小于廠家聲明，CA50批內精密度和批間精密度CV均小于廠家聲明。驗證通過。見表1、表2。

表1 批內精密度驗證結果

表2批間精密度驗證結果

3 正確度驗證結果

CA242的5個不同批號的室間質控品測量值與靶值的偏倚為5.25%～11.74%，CA50的5個不同批號的室間質控品測量值與靶值的偏倚為6.53%～12.47%，兩個項目的偏倚均在CLIA′88規定的允許誤差范圍內。驗證通過。見表3。

表3 正確度驗證結果

4 線性范圍驗證結果

CA242濃度范圍在1.78～195.00IU／mL線性回歸方程為Y＝0.9854X-1.1027，相關系數R2為0.9995；CA50濃度范圍在7.09～498.27IU／mL線性回歸方程為Y＝1.002X-0.627，相關系數R2為0.9999。見表4、表5。

表4 線性范圍驗證實驗結果（CA242）

表5 線性范圍驗證實驗結果（CA50）

5 臨床可報告范圍驗證結果

CA242和CA50稀釋16倍的R值均在90%～110%之間，符合判斷要求；CA242的臨床可報告范圍上限可擴展至3120.00IU／mL，CA50的臨床可報告范圍上限可擴展至為7972.32IU／mL。見表6。｀

表6 CA242和CA50各個稀釋樣本的R（%）值

6 生物參考區間驗證結果

20名健康體檢者檢測CA242的濃度范圍為0.97～10.38IU／mL，100%的結果在廠家提供的生物參考區間（＜20 IU／mL）范圍內；20名健康體檢者檢測CA50的濃度范圍為0.50～18.62IU／mL，100%的結果在廠家提供的生物參考區間（＜25IU／mL）范圍內。

討 論

ISO 15189：2012［8］規定了中國合格評定國家認可委員會（CNAS）對醫學實驗室質量和能力進行認可的專用要求，包含了醫學實驗室為證明其按質量管理體系運行、具有相應技術能力并提供正確的技術結果所必須滿足的要求。其中5.5.1.2檢驗程序驗證要求未經修改而使用的已確認的檢驗程序在常規使用前，應經過實驗室的獨立驗證。實驗室應從制造商或方法開發處獲得相關信息，以確定檢驗程序的性能特征。實驗室進行的獨立驗證，應通過獲取客觀的證據（以性能特征形式）證實檢驗程序的性能與其聲明相符。驗證過程證實的檢驗程序的性能指標，應與檢驗結果的預期用途有關。檢驗程序的性能指標包括：測量正確度、測量準確度、測量精密度、測量不確定度、分析特異性、分析靈敏度、檢出限和定量限、測量區間、診斷特異性和診斷靈敏度。CNAS-CL38：2012［9］要求檢測方法和程序的分析性能驗證內容至少包括正確度、精密度和可報告范圍。美國臨床實驗室修正案（CLIA′88）文件中明確規定使用未經修改的完整檢測系統的實驗室只需完成4個驗證實驗，即準確度、精密度、可報告范圍及生物參考區間驗證實驗。在本科室申報ISO 15189實驗室認可中，對深圳新產業Maglumi 4000 Plus全部4個檢測項目進行了性能驗證，本文以CA242和CA50為例，闡述其精密度、正確度、線性范圍、臨床可報告范圍和生物參考區間的驗證過程。

精密度是指在規定條件下，對同一或類似被測對象重復測量所得示值或測量值間的一致程度［10］。精密度通常用不精密度程度以在規定測量條件下的標準偏差、方差或變異系數表示。精密度性能是檢測系統的基本分析性能之一，也是其他方法學評價的基礎，目前臨床醫學實驗室對樣本只做單次測量便發出報告，這種情況下精密度更是至關重要。本文參考CLSI EP5-A2［11］文件，進行了CA242和CA50批內精密度驗證實驗；批間精密度驗證不同于CLSI EP5-A2文件驗證方案，在考慮人力、物力、財力的基礎上，結合科室具體實際，采用2×1×10方案，在相對較短的時間內完成了實驗。精密度驗證結果顯示，CA242批內精密度和批間精密度CV均小于廠家聲明，CA50批內精密度和批間精密度CV均小于廠家聲明，表明廠家聲稱的精密度可靠。

正確度定義為無窮多次重復測量所得量值的平均值與一個參考量值間的一致程度［10］。正確度通常用偏倚表示。正確度性能是檢測系統或方法重要的分析性能之一，是分析測量范圍（線性范圍）及生物參考區間驗證等實驗的基礎。目前，關于正確度評價有很多種方案，本文參考CLSI EP15-A文件進行正確度驗證實驗，包括兩種方案：使用患者樣本和使用參考物質。本文采用衛生部臨床檢驗中心2019年6月發放的5個不同批號的室間質控品進行正確度驗證，結果顯示CA242的5個不同批號的室間質控品測量值與靶值的偏倚為5.25%～11.74%，CA50的5個不同批號的室間質控品測量值與靶值的偏倚為6.53%～12.47%，兩個項目的偏倚均在CLIA′88規定的允許誤差范圍內。

線性范圍即分析測量范圍，指樣本未經任何處理（稀釋、濃縮或其他預處理），由檢測系統直接測量得到的可靠結果范圍，在此范圍內一系列不同樣本分析物的測量值與其實際濃度（真值）呈線性比例關系［12］。線性范圍驗證實驗結果顯示，CA242的濃度范圍在1.78～195.00IU／mL的線性回歸方程為Y＝0.9854X-1.1027，相關系數r2為0.9995，說明組成回歸線的所有數據點緊密貼近回歸線，預測值和實測值之間相關性極好（0.97≤b≤1.03且R2≥0.950）；CA50的濃度范圍在7.09～498.27IU／mL的線性回歸方程為Y＝1.002X-0.627，相關系數r2為0.9999，說明組成回歸線的所有數據點緊密貼近回歸線，預測值和實測值之間相關性極好（0.97≤b≤1.03且R2≥0.950）。表明采用深圳新產業Maglumi 4000 Plus檢測CA242的濃度范圍在1.78～195.00IU／mL成線性，和廠家聲明的線性范圍（CA242：2.00～200IU／mL）基本一致；檢測CA50的濃度范圍在7.09～498.27IU／mL成線性，和廠家聲明的線性范圍（CA50：10.00～500IU／mL）基本一致。

臨床可報告范圍是指定量檢測項目向臨床能報告的檢測范圍，患者樣本可經稀釋、濃縮或其他預處理［12］。本文研究結果顯示CA242和CA50稀釋16倍的R值均在90%～110%之間，符合判斷要求；CA242的臨床可報告范圍上限可擴展至3120.00IU／mL，CA50的臨床可報告范圍上限可擴展至為7972.32IU／mL。本院是健康體檢單位，CA242和CA50特別高濃度的檢測結果罕見，稀釋倍數只進行到1∶16，已能夠滿足臨床需求。

參考區間是兩參考限之間的區間，指參考下限到參考上限的區間，通常指中間95%區間［13］。由于地理、人種、性別及年齡差異，各實驗室應建立自己的生物參考區間。本文參考CLSI C28-A2文件，選取無系統疾病、表面健康的體檢者20名，其中男10名，年齡在25～72歲之間；女10名，年齡在27～62歲之間，對深圳新產業Maglumi 4000 Plus檢測CA242和CA50的生物參考區間進行驗證。研究結果顯示20名健康體檢者檢測CA242的濃度范圍為0.97～10.38IU／mL，100%的結果在廠家提供的生物參考區間（＜20 IU／mL）范圍內；20名健康體檢者檢測CA50的濃度范圍為0.50～18.62IU／mL，100%的結果在廠家提供的生物參考區間（＜25IU／mL）范圍內。說明廠家提供的CA242和CA50生物參考區間是可以接受的，可直接使用。

選擇性能良好的檢測系統是保證病人檢驗結果可靠性的前提。通過本文研究，深圳新產業Maglumi 4000 Plus檢測CA242和CA50的精密度、正確度、線性范圍、臨床可報告范圍、生物參考區間均和廠家聲明一致，能夠保證檢測結果的準確，滿足臨床檢驗的需要。同時，Maglumi 4000 Plus有144個樣本位，25個試劑位，每小時達到280個測試，并且樣本和試劑可連續加載，能夠隨機、批量測試，大大提高了檢測效率，而且國產試劑較進口試劑價格低廉，能夠降低醫療成本，可以在臨床實驗室推廣使用。