血清透明質酸、IV型膠原、單胺氧化酶及轉化生長因子β1聯合檢測對肝纖維化的診斷價值分析

李 斌，張 鵬

(安徽醫科大學附屬阜陽醫院消化內科，安徽 阜陽 236000)

肝硬化是由病毒性、酒精性、肝臟淤血等多種病因導致的彌漫型肝損害，慢性乙型肝炎是我國肝硬化的主要發病原因，早期癥狀不明顯，發病隱匿，病程進展緩慢，晚期可因消化道出血、合并感染、肝性腦病等嚴重并發癥致死[1]。方便高效的早期診斷對患者的救治及預后康復至關重要。肝纖維化是肝硬化的早期病理改變，主要表現為肝內結締組織增生、沉積，是一個動態的過程，疾病早期尚有逆轉可能[2]。既往多以肝活檢作為肝纖維化的診斷金標準，但無論是常規經皮肝穿刺活檢還是腹腔鏡下肝組織活檢，都屬于有創檢查，可重復性差，易受操作者水平及客觀條件限制，影響病情檢測及治療效果的觀察[3]。血清學指標一直是肝纖維化診斷研究的熱點，本研究結合相關文獻[4]，選擇血清透明質酸(HA)、IV型膠原(IV-C)、單胺氧化酶(MAO)及轉化生長因子β1(TGF-β1)對慢性乙型肝炎患者進行檢測，并對照病理學檢查結果，評價對肝纖維化的診斷價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2017年10月至2018年10月我院收治的120例慢性乙型肝炎患者。納入標準：①年齡<75歲；②符合《慢性乙型肝炎診斷標準(2015年版)》[5]診斷標準；③患者知情，簽署同意書。排除標準：①心、肺、腎等重要臟器病變；②合并其他病毒感染史；③患者或家屬拒絕參與研究。本組男72例，女48例，年齡23～65歲[(42.25±5.53)歲]。

1.2 檢測方法取清晨空腹靜脈血，分離血清，低溫-70 ℃冰箱保存。采用化學發光免疫法檢測血清HA、IV-C水平，試劑盒由深圳晶美提供；采用芐胺比色法檢測血清MAO水平，試劑盒由寧波美康提供；采用酶聯免疫吸附法檢測TGF-β1水平，試劑盒由美國Rapid Bio提供。

1.3 組織學檢查抽血后3 d內行肝穿刺，于肝臟邊緣或病變明顯處取肝組織(大小1 cm×1 cm×1 cm)，電凝止血。標本取出后使用甲醛溶液固定，經石蠟包埋、乙醇脫水、連續切片處理后，行HE染色，選擇2位高年資病理科醫師雙盲閱片，參照《慢性乙型肝炎診斷標準(2015年版)》[5]中的Metavir評分系統行纖維化程度分期，F0：無纖維化；F1：匯管內纖維性擴大，但并未形成纖維間隔；F2：匯管內纖維性擴大，已形成少量纖維間隔；F3：形成大量纖維間隔，但無硬化結節；F4：肝硬化。

1.4 統計學方法應用SPSS 19.0軟件處理數據。計量資料比較采用F檢驗及q檢驗；相關性分析采用Spearman相關分析；繪制受試者工作特性曲線(ROC曲線)分析血清學指標診斷肝纖維化的價值。P< 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清學指標檢測結果肝組織活檢纖維化程度分期顯示，F0期26例，F1期19例，F2期21例，F3期24例，54期30例。不同肝纖維化分期患者血清HA、IV-C、MAO及TGF-β1水平比較，差異均有統計學意義(P< 0.05)，見表1。

表1 不同肝纖維化分期患者血清HA、IV-C、MAO及TGF-β1水平比較

2.2 血清學指標與肝纖維化分期之間的相關性HA(r=0.32，P< 0.01)、IV-C(r=0.42，P< 0.01)、MAO(r=0.54，P< 0.01)及TGF-β1(r=0.61，P< 0.01)均與肝纖維分期呈顯著正相關。

2.3 血清學指標對肝纖維化的診斷價值以F≥2為肝纖維化，ROC曲線分析結果顯示，聯合診斷AUC可達0.84，高于HA、IV-C、MAO及TGF-β1單獨診斷(P< 0.05)。見表2，圖1。

表2 血清學指標對肝纖維化(F≥2)的診斷價值

注：HA、IV-C、MAO、TGF-β1截斷值分別取89.15、80.70、18.15、14.80

圖1 血清學指標預測肝纖維化的ROC曲線分析

3 討論

當機體發生肝細胞損傷時，組織可進行自我修復，產生膠原蛋白促進肝細胞再生，但若未能及時得到有效治療，肝細胞損傷持續存在可導致細胞外基質合成與降解失衡，從無導致膠原纖維異常增生，這種病理改變即為肝纖維化。研究證實[6]，病毒性肝炎是導致肝纖維化的主要原因。我國作為肝炎大國，乙型肝炎患者數量可達3000萬。肝纖維化持續進展，正常肝小葉被增生纖維組織分割，包繞成大小不等的肝細胞團，特征性假小葉結構出現是肝纖維化進入肝硬化階段的重要標志。以往研究認為[7]，肝纖維化不可逆，而近年來研究進一步深入及各類抗病毒藥物的應用，有學者發現[8]，肝纖維化并非不可逆轉。肝星狀細胞在肝纖維化過程中具重要核心作用，可通過清除肝星狀細胞起到逆轉肝纖維化的作用?，F已逐步證實肝纖維化的可逆性，因此針對肝纖維的治療之法越來越多，若能通過實驗尋找到一種可被患者普遍接受的檢測方法，指導肝纖維化的早期診斷，區別不同程度的肝纖維化，實時監測肝纖維化病情進展恢復情況，對提高肝纖維化患者治療效果，改善患者預后，提高其生存質量具重要意義。

目前已證實可用于評價肝纖維化程度的血清學指標較多，主要為細胞為基質成分、膠原酶類、細胞因子三大類?？捎糜谠\斷肝纖維的理想血清學指標需具備以下要求：①特異性高，不易受其他因素干擾；②可反映細胞外基質沉積和去除的動力學平衡情況；③可用于指導肝纖維化的早期診斷，并檢測其病情進展；④操作簡單方便，成本低廉，重復性良好。本研究選擇HA、IV-C、MAO及TGF-β1對慢性乙型肝炎患者進行檢測。HA屬大分子氨基多糖，由肝星狀細胞合成，經血液循環至肝血竇內皮細胞降解，而肝纖維化患者由于肝星狀細胞大量合成導致HA合成隨之增加，再加之肝臟內皮細胞損傷導致攝取及分解HA作用減弱，從而使得血清HA水平顯著升高。陳麗等[9]研究發現HA水平與肝纖維化程度顯著相關。本研究中不同肝纖維化分期患者血清HA水平比較，差異有統計學意義，進一步分析發現，HA與肝纖維分期顯著正相關。正常肝臟肝竇壁中無基底膜，而發生肝纖維化損傷后多種膠原成分異常增生沉積，聚集于竇軸間隙，從而形成基底膜。IV-C便是構成基底膜膠原的主要成分之一，可用于反映早期肝纖維化病變。焦運等[10]研究發現IV-C水平與慢性乙型肝炎后肝纖維化程度顯著相關。本研究中不同肝纖維化分期患者血清IV-C水平比較，差異有統計學意義，進一步分析發現，IV-C與肝纖維分期顯著正相關。MAO是催化單胺氧化脫氧反映的酶，在人體肝、腎、腦組織細胞線粒體膜外廣泛分布，且肝臟MAO參與膠原合成過程，并在膠原纖維完全成熟后逸出。正常情況下膠原合成與分解處于動態平衡狀態，MAO水平相對穩定。但肝纖維化患者膠原合成增加，可導致血清MAO活性提高。許琳等[11]研究發現肝硬化患者血清MAO水平顯著高于正常對照組，且MAO水平還可反映肝纖維化程度。本研究中不同肝纖維化分期患者血清MAO水平比較，差異有統計學意義，進一步分析發現，MAO與肝纖維分期顯著正相關。TGF-β1具調節細胞生長和分化的作用，可改變成纖維細胞生長特性，喪失生長、生理抑制作用。肝臟內多種細胞均可生成TGF-β1，但正常情況下，TGF-β1多分布于枯否細胞和肝星狀細胞內，較少表達于肝細胞。而發生肝損傷后，TGF-β1水平顯著升高可刺激肝星狀細胞活化，促進細胞外基質的合成，抑制其分解，并誘導纖維增生，從而出現肝纖維化。李東等[12]研究發現隨干纖維化程度增加，TGF-β1水平逐漸升高。本研究中不同肝纖維化分期患者血清TGF-β1水平比較，差異有統計學意義，進一步分析發現，TGF-β1與肝纖維分期顯著正相關。另外經ROC曲線分析，HA、IV-C、MAO及TGF-β1四者聯合診斷可較好的診斷肝纖維化，AUC為0.84。

綜上所述，HA、IV-C、MAO及TGF-β1對肝纖維化的診斷均具一定價值，其血清水平的高低可用于反映肝纖維化程度。四者聯合用于對肝纖維化的診斷價值較高，優于單一指標，可考慮臨床推廣應用，監測肝纖維化病情進展。