病原微生物快速檢測的臨床研究進展概述

高靜 天津市武清區人民醫院檢驗科 （天津 301700）

內容提要：病原微生物快速檢測屬于臨床較為常用的檢測技術，伴隨多種類型微生物的出現，具備周期較長、操作較為繁雜、特異性較差特征的傳統微生物檢測方式，并不能夠滿足現代診斷治療的需求。在人們傳統檢測方式基礎之上，不斷地發展以及提高，能夠探索出多類新型微生物檢測方式，具備快速、準確且安全性較高的特征，從而促進微生物檢驗技術的不斷發展。本次研究傳統生物法培養鑒定技術與免疫學，而另一個方面對新型檢測方法進行分析。比如分子生物學、生物傳感器與生物芯片等等，對此進行綜合性概述。

隨著環境污染的不斷加重，感染性疾病呈現出逐年上升的趨勢，對人們的身體健康產生嚴重威脅[1]。導致感染病原微生物主要是霍亂弧菌、鼠疫耶爾森菌與分歧桿菌之類傳統病原微生物重新繁殖，并且病原微生物的種類不斷增多、耐藥性相對增強，增大臨床診斷與治療困難的程度。隨著人口的流動不斷增大，加大了傳染病疾病的感染[2]。因此，微生物檢驗技術要快速且準確，能夠早發現、早診斷與早隔離、治療，有助于減少感染性疾病的不斷傳播。本文主在探討病原微生物快速檢測屬于臨床較為常用的檢測技術的進展，現綜述如下。

1.采用生化方式對病原微生物實施檢測

生化方式對病原微生物進行檢測，實質上是對微生物特異性酶進行測定，因為各類微生物所具備酶系統并不完全相同，對多重物質分解的能力并不相同[3]。所以采用不同的底物所產生不同代謝產區能夠對微生物酶進行間接性檢測，至此達到檢測特定微生物目的。李春鳳[4]等人的研究顯示，沙門氏菌可以產生辛酯酶，這一種性能是除了沙門氏菌以外各類屬腸桿菌科的細菌所不具備的。按照這一種特征，對沙門氏菌采用快速檢測辛酯酶法，這種方式是通過4-甲基傘形酮辛酯作為底物，通過沙門氏菌酶降解之后，釋放出4MU，在紫外燈下對所發出藍色熒光進行觀察。這種方法簡單易行，從而將底物加入到紫外燈下進行觀察，結果則只要幾分鐘便能夠完成。檢測的靈敏度與特異度達到95%、90%。對底物與H2S反應為陽性的沙門氏菌則這類檢查方式更為靈敏，靈敏度與特異度接近100%。

2.血清免疫學檢測方法

免疫檢測學技術主要是采用特異性抗原抗體反應，對組織細胞、特定抗原定性與定量技術進行觀察。為顯示與觀察相應的抗原抗體反應，要將相應的標記物結合至相應的抗體上，借用標記物熒光或者酶有色性反應、放射性或者高電子密度，通過在光鏡、電鏡下實施定性、定位或者定量的研究[5]。各類形式免疫分析方式，例如放射性免疫分析法、酶免疫分析法、間接性酶聯免疫吸附法、熒光免疫分析方式、生物發光免疫分析法、化學發光免疫分析法，直接或者間接對微生物的成分進行檢測，這種檢測方式在臨床上得到廣泛運用。

2.1 熒光抗體技術法

熒光抗體技術主要是按照抗原抗體的反應具備較高特異性，將熒光素當做抗原標記物，通過在熒光顯微鏡下的檢查，顯示出熒光特異性抗原抗體的復合物與抗原抗體所存在的位置。熒光抗體技術主要特征是特異性較強、速度較快、靈敏度相對較高，同時也會存在較多缺點，若沒有特異染色問題，則需要按照完全解決、操作程序相對繁瑣、需要特殊昂貴儀器與染色標本不能夠長期的進行保存。采用快速檢測法對病原菌進行檢測多采取直接檢測法與間接檢測法。直接檢測法主要是在檢測的樣品上面直接獲得特異性的熒光抗血清，通過洗滌之后則可在熒光顯微鏡之下進行觀察[6]。間接檢測方法主要是在檢測樣品上滴加相應的細菌特異性抗體，等到出現作用后進行洗滌，加入熒光標記第二抗體。

2.2 酶聯免疫技術

酶聯免疫技術法主要是按照抗原-抗體免疫反應和酶高效催化作用的原理進行有機的結合，經酶催化底物，從而出現一系列化學性反應，讓溶液顯現顏色性變化，表明抗原抗體特異性反應明顯存在。隨著酶聯免疫技術不斷應用，可以大幅度提高檢測敏感度與特異度，并且被廣泛應用在多種病原微生物的檢測當中。唐俊妮[7]等人的研究顯示，MP膜結合蛋白抗原制備相應的MP單抗建立相應的雙抗體夾心酶聯免疫檢測肺炎支原體抗原的方式，和PCR檢測方式的符合度達到95%。

3.分子生物學檢測法

隨著分子生物學與分子遺傳學不斷發展，讓人們對于微生物認識逐漸由外部的結構特征轉向內部的基因結構，微生物檢測從生化與免疫的方式逐漸轉向到基因水平進行檢測[8]。

4.生物傳感器實施病原微生物檢測

生物傳感器屬于新興傳感器技術與分子診斷技術結合屬于新型的檢測技術。生物傳感器主要是分子識別器件與換能器。待測物質、識別器件與轉換器件之間通過生物、化學與生化、物理性作用之間相互聯系[9]。因為生物傳感器檢測相對準確、操作相對簡單，在相關的領域取得相對較大的進展。但是生物傳感器還是存在靈敏度不足、極易遭受干擾等缺陷，需要進一步改善[10]。

5.結論

綜上所述，病原檢測的方式相對較多，各類方式均存在優缺點，為彌補相應檢測方式的缺陷，需要進一步的提高靈敏度與特異度，需要采用多種方式聯合應用。在選擇檢測方式的時候需要考慮相應的條件，包括檢測所要求靈敏度，提高靈敏度與除去假陽性屬于檢測方式所發展的重要趨勢。伴隨計算機技術不斷發展，病原菌檢測會往高度自動化與開發簡便快速檢測技術方面發展。分子生物學技術經過自動化儀器應用，病原菌診斷、鑒定與耐藥基因檢測方面逐漸應用在臨床。而實現高效、高質與價格低廉統一，需要改變臨床病原菌檢測現狀與傳統的觀念。伴隨各學科交叉的發展，則會出現相對較多新型檢測技術。