維藥多脂大戟治療白內障活性部位化學成分研究

廖東波　楊帆　朱智英　范淼崟　張亞梅

【摘 要】 目的：研究多脂大戟治療白內障活性部位化學成分。方法：利用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、高效液相色譜等分離技術，對多脂大戟樹脂抗白內障活性部位進行分離純化，并通過1H-、13C-NMR等波譜技術進行結構鑒定。結果：共鑒定6個萜類化合物，分別為eburicol （1）、羊毛甾醇（2）、ingol 7，8，12-triacetate 3-phenylacetate （3）、ingol 7，8，12-triacetate 3-（4-methoxyphenyl） acetate（4）、12-O-Acetyl-8-O-tigloylingol （5）、3，12-di-O-acetylingol （6）。結論：化合物1、4、6首次從本種分離得到。

【關鍵詞】 多脂大戟;大戟屬;白內障;物質基礎

【中圖分類號】R282.6 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2020）23-0032-04

Study on Material Basis of Anti-cataractogesis Activity of Euphorbia resinifera

LIAO Dongbo YANG Fan ZHU Zhiying FAN Miaoyin ZHANG Yamei*

Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine， Nanchang 330004，China

Abstract：Objective To study the material basis of anti-cataractogesis activity of Euphorbia resinifera. Methods The material basis of anti-cataractogesis activity of Euphorbia resinifera were isolated by different column chromatographic techniques. Their structures were identified by a comprehensive analysis of the spectroscopic data. Results six compounds were isolated from Euphorbia resinifera and identified as eburicol （1）， lanosterol （2）、ingol 7，8，12-triacetate 3-phenylacetate （3）、ingol 7，8，12-triacetate 3-（4-methoxyphenyl）acetate （4）、3-O-acetyl-8-O-tigloylingol （5）、8-O-tigloylingol（6）. Conclusion These compounds may relate to the anti-cataractogesis activity of Euphorbia resinifera.

Keywords：Euphorbia resinifera;Euphorbia;Material Basis;Anti-cataractogesis

多脂大戟Euphorbia resinifera Berg.隸屬于大戟科Euphorbiaceae，其樹脂狀分泌物大戟脂（Euphorbium）即維藥“排日非云”，具有散寒止痛、燥濕退腫、強筋健骨、消除白內障等功效，主治濕寒性或黏液質性疾病，如癱瘓、關節疼痛、腹水、白內障等疾病[1-2]。課題組前期通過硒性白內障大鼠動物模型篩選多脂大戟治療白內障活性部位，發現大戟脂95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位具有治療白內障活性?；诖?，本實驗對此部位進行化學成分研究，以探明多脂大戟治療白內障的物質基礎。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Shimazu LC-6AD制備液相色譜儀，Buchi C605中壓色譜儀，Agilent 1200液相色譜儀，Buchi R-220SE旋轉蒸發儀，TripleTOF5600 質譜儀 （ESI-MS），Bruker AVANCE III 600 核磁共振波譜儀。

1.2 材料 青島海洋硅膠G （100～200、200～300目），Sephadex LH-20凝膠，反相硅膠C18（50μ），MCI HP-20，色譜用甲醇、乙腈，其余試劑均為分析純。多脂大戟樹脂購于新疆和田藥材市場，經江西中醫藥大學鐘國躍研究員鑒定為大戟科 Euphorbiaceae 植物多脂大戟E. resinifera的樹脂狀分泌物。標本現存于江西中醫藥大學中藥資源與民族藥研究中心標本館。憑證標本（20180804）存放于江西中醫藥大學標本館。

2 提取分離

多脂大戟樹脂活性部位（95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位）62.5g，加甲醇溶解后，通過硅膠色譜柱進行初步分離，依次用石油醚-丙酮（50∶1，Fi1），石油醚-丙酮（30∶1，Fi2）、石油醚-丙酮（15∶1，Fi3），石油醚-丙酮（5∶1，Fi4）、石油醚-丙酮（1∶1，Fi5）、乙酸乙酯（Fi6）梯度洗脫，甲醇沖柱（Fi7）?；厥杖軇┑玫?個洗脫部分（Fi1-Fi7）。薄層色譜顯色石油醚-丙酮（30∶1），即Fi2部分化合物多，且與其它組分重疊斑點較少。 故將其進一步通過MCI柱層析、凝膠柱層析、中壓反相硅膠柱層析、制備反相硅膠柱層析分離，最終得到6個化合物。

3 結構鑒定

各化合物通過TLC、HPLC、香草醛濃硫酸顯色、UV、以及MS、NMR等方法確定了結構。

化合物1 （246.9mg）： 白色粉末。HR-ESI-MS：分子量440，分子式C31H52O。1H-NMR （600 MHz， CDCl3） δ： 4.73 （1H， brs， H-28α）， 4.68 （1H， brs， H-28β）， 3.23 （1H， m， H-3）， 1.02 （3H， d，J= 7.1 Hz， H-26）， 1.01 （3H， d， J=7.1 Hz， H-27）， 0.99 （3H， s， H-29）， 0.94 （3H， s， H-19）， 0.96 （3H， d，J= 6.3 Hz， H-21）， 0.86 （6H， s， H-30， 31）， 0.74（3H， s， H-18）;13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 35.5 （C-1）， 27.6 （C-2）， 76.3 （C-3）， 39.2 （C-4）， 50.8 （C-5）， 17.6 （C-6）， 28.1 （C-7）， 133.5 （C-8）， 134.3 （C-9）， 36.6 （C-10）， 20.1 （C-11）， 25.7 （C-12）， 31.2 （C-13），49.6 （C-14）， 30.9 （C-15）， 30.7 （C-16）， 50.1 （C-17）， 15.6 （C-18）， 18.3 （C-19）， 34.9 （C-20）， 18.8 （C-21）， 33.9 （C-22）， 31.2 （C-23）， 157.1 （C-24）， 31.3 （C-25）， 21.6 （C-26）， 22.1 （C-27）， 106.1 （C-28）， 27.9 （C-29）， 15.4 （C-30）， 24.5 （C-31）上述數據與文獻報道一致[3]，故鑒定為eburicol。

化合物2（611.2mg）：白色粉末。HR-ESI-MS：分子量426，分子式C30H50O。1H-NMR （600 MHz， CDCl3） δ： 0.75 （3H， s， CH3-30）， 0.79 （3H， s， CH3-18）， 0.84 （3H， d，J =6.5Hz， CH3-21）， 0.87 （3H， s，CH3-28） ， 0.91 （3H， s， CH3-29） ， 1.59 （3H， s， CH3-26） ， 1.68 （3H， s， H-27）， 3.22 （1H， dd，J= 4.5， 2.3 Hz， H-3）， 5.09 （1H， m， H-24）;13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 35.9 （C-1）， 28.2 （C-2）， 79.0 （C-3）， 38.9 （C-4）， 50.1 （C-5）， 20.1 （C-6）， 28.2 （C-7）， 134.0 （C-8）， 133.4 （C-9）， 37.4 （C-10）， 28.2 （C-11）， 25.8 （C-12）， 44.1 （C-13），49.6 （C-14）， 30.9 （C-15）， 29.9 （C-16）， 50.0 （C-17）， 15.6 （C-18）， 18.7 （C-19）， 35.0 （C-20）， 18.8 （C-21）， 35.3 （C-22）， 24.8 （C-23）， 125.4 （C-24）， 130.8 （C-25）， 24.7 （C-26）， 17.7 （C-27）， 24.4 （C-28）， 27.8 （C-29）， 15.6 （C-30）。上述數據與文獻報道一致[4]，故鑒定為羊毛甾醇。

化合物3（52.2mg）：白色粉末。 HR-ESI-MS：分子量610，分子式C34H42O10。1H-NMR （600 MHz， CHCl3） δ： 2.78 （1H， dd，J= 14.8、9.0 Hz， H-1α）， 1.69 （1H， d， J=14.8 Hz， H-1β）， 2.51 （1H， m， H-2），5.15 （1H， brs， H-3）， 5.39 （1H， brs， H-5）， 5.12 （1H， d，J=1.6 Hz， H-7）， 4.52 （1H， dd，J= 10.4、1.6 Hz， H-8）， 1.09 （1H， dd，J=10.4， 9.3Hz， H-9）， 1.01 （1H， m， H-11）， 4.82 （1H， dd，J= 10.7、3.8 Hz， H-12）， 2.90 （1H， qd，J= 7.4、3.8 Hz， H-13）， 0.92 （3H， d，J= 7.4 Hz， H-16）， 2.05 （3H， 3， H-17）， 1.04 （3H， s， H-18）， 0.82 （3H， s， H-19）， 1.04 （3H， d，J= 7.0 Hz， H-20）， 3.72 （2H， br， H-2′）， 7.31 （1H， m， H-4′） ， 7.31 （1H， m，J= 8.6 Hz， H-5′）， 7.31 （1H， m， H-7′）， 7.31 （1H， d，J= 8.6 Hz， H-8′） ， 2.09 （3H， s， COCH3）， 2.05 （3H， s， COCH3）， 1.97 （3H， s，COCH3）。13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 31.4 （C-1）， 29.5 （C-2）， 76.3 （C-3）， 73.4（C-4）， 117.1 （C-5）， 139.3 （C-6）， 76.9 （C-7）， 71.1 （C-8）， 24.7 （C-9）， 19.2 （C-10）， 30.6 （C-11）， 70.6 （C-12） ， 43.0 （C-13）， 207.9（C-14）， 71.5 （C-15）， 16.9 （C-16）， 17.5 （C-17）， 29.1 （C-18）， 16.1 （C-19）， 13.4 （C-20）， 170.3 （C-1′）， 41.5 （C-2′）， 133.8 （C-3′）， 129.3 （C-4′）， 128.6 （C-5′）， 127.4 （C-6′）， 128.6 （C-7′）， 129.3 （C-8′）， 170.8 （COCH3）， 170.3（COCH3），170.4（COCH3），21.0 （COCH3）， 20.9 （COCH3）， 20.6 （COCH3）。以上數據與文獻報道一致[5]，確定為ingol 7，8，12-triacetate-3-phenylacetate。

化合物4（30.4mg）：白色粉末。 HR-ESI-MS：分子量 640，分子式C35H45O11。 1H-NMR （600 MHz， CHCl3） δ： 2.78 （1H， dd，J= 15.0、9.0 Hz， H-1α）， 1.68 （1H， d，J=15.0Hz， H-1β）， 2.51 （1H， m， H-2），5.16 （1H， d，J= 8.6 Hz， H-3）， 5.40 （1H， brs， H-5）， 5.14（1H， d，J=1.6 Hz， H-7）， 4.54 （1H， dd，J= 10.6、1.6 Hz， H-8）， 1.10 （1H， dd，J=10.6、9.1Hz， H-9）， 1.04 （1H， m， H-11）， 4.83 （1H， dd，J= 10.6、4.0 Hz， H-12）， 2.89 （1H， qd，J= 7.3、4.0 Hz， H-13）， 0.92 （3H， d，J= 7.3 Hz， H-16）， 2.06 （3H， 3， H-17）， 1.04 （3H， s， H-18）， 0.82 （3H， s， H-19）， 1.05 （3H，J=7.0Hz， H-20）， 3.80 （3H， s， OCH3）， 3.67 （2H， brs， H-2′）， 7.20 （1H， m， H-4′） ， 6.85 （1H， m， H-5′）， 6.85 （1H， m， H-7′）， 7.20 （1H， m， H-8′） ， 2.06 （3H， s， COCH3）， 2.09 （3H， s， COCH3）， 1.97 （3H， s，COCH3）。13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 31.5 （C-1）， 29.5 （C-2）， 76.9 （C-3）， 73.4（C-4）， 117.1 （C-5）， 139.4 （C-6）， 76.9 （C-7）， 71.5 （C-8）， 24.6 （C-9）， 19.3 （C-10）， 30.6 （C-11）， 70.6 （C-12） ， 43.0 （C-13）， 207.8 （C-14）， 71.1 （C-15）， 16.9 （C-16）， 17.4 （C-17）， 29.1 （C-18）， 16.0 （C-19）， 13.4 （C-20）， 170.4 （C-1′）， 40.6 （C-2′）， 113.9 （C-3′）， 130.4 （C-4′）， 125.7 （C-5′）， 158.4 （C-6′）， 125.7 （C-7′）， 130.4 （C-8′）， 55.4 （-OCH3）， 170.6（COCH3）， 20.6（COCH3）， 170.5 （COCH3）， 20.9 （COCH3）， 170.3（COCH3）， 21.0（COCH3）。以上數據與文獻報道一致[6]，確定為ingol 7，8，12-triacetate 3-（4-methoxyphenyl）acetate。

化合物5（21.1mg）：白色粉末。 HR-ESI-MS：分子量 490，分子式C27H38O8。 1H-NMR （600 MHz， CHCl3） δ： 1.64 （1H， dd，J=14.9、1.9 Hz， H-1β）， 2.76 （1H， dd，J=14.9、9.0 Hz， H-1α）， 2.40 （1H， m， H-2），4.36 （1H， d，J= 8.2 Hz， H-3）， 5.87 （1H， brs， H-5）， 4.28 （1H， brs， H-7）， 4.57 （1H， dd，J= 10.7， 1.4 Hz， H-8）， 1.43 （1H， dd，J= 10.7， 9.5 Hz， H-9）， 1.10 （1H， dd，J= 11.0， 9.5 Hz， H-11）， 4.87 （1H， dd，J=11.0， 3.9 Hz， H-12）， 2.92 （1H， dq，J=3.9， 7.3 Hz， H-13）， 1.07 （3H， d，J= 7.6 Hz， H-16）， 2.09 （3H， brs， H-17）， 1.09 （3H， s， H-18）， 0.82 （3H， s， H-19）， 1.04 （3H， d，J= 7.3 Hz， H-20）， 2.07（3H， s， OCH3）， 6.91 （1H， qq，J=6.0， 1.2 Hz， H-3′）， 1.81 （3H， dq，J=6.0， 1.6 Hz， H-4′） ， 1.84 （3H， dq，J=1.6， 1.6 Hz， H-5′）。13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 31.8 （C-1）， 29.1 （C-2）， 76.1（C-3）， 74.3（C-4）， 117.1 （C-5）， 141.7 （C-6）， 76.4 （C-7）， 76.3 （C-8）， 23.8 （C-9）， 19.1 （C-10）， 31.6 （C-11）， 70.9 （C-12） ， 43.2 （C-13）， 207.9 （C-14）， 72.8 （C-15）， 16.3 （C-16）， 17.5 （C-17）， 29.2 （C-18）， 16.3 （C-19）， 13.4 （C-20）， 170.7 （OCOCH3）， 21.0 （COCH3），167.7 （C-1′）， 138.2 （C-2′）， 128.7 （C-3′）， 12.0 （C-4′）， 14.5 （C-5′）。以上數據與文獻報道一致[7]，確定為12-O-acetyl-8-O-tigloylingol 。

化合物6（47.5mg）：白色固體。HR-ESI-MS：分子量450，分子式C24H34O8; 1H-NMR （600 MHz，? CDCl3） δ： 2.82 （1H， dd，J= 15.0、9.3 Hz， H-1α）， 1.66 （1H， d，J= 15.0， 1.9 Hz， H-1β）， 2.58 （1H， m， H-2），5.21 （1H， d，J= 8.4 Hz， H-3）， 5.75 （1H， s， H-5）， 4.21 （1H， s， H-7）， 3.46 （1H， dd，J= 10.3、1.9 Hz， H-8）， 1.25 （1H， m， H-9）， 1.06 （1H， m，? H-11）， 4.85 （1H， dd，J= 11.0、3.9 Hz， H-12）， 2.93 （1H， m， H-13）， 0.90 （3H， d，J= 7.4 Hz， H-16）， 1.97 （3H， s， H-17）， 1.09 （3H， s， H-18）， 1.08 （3H， s， H-19）， 1.04 （3H， d，J= 7.3 Hz， H-20）， 2.10 （6H， s， C12OCOCH3， C3OCOCH3）。13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 31.7 （C-1）， 29.6 （C-2）， 77.7（C-3）， 71.3 （C-4）， 116.6 （C-5）， 141.7 （C-6）， 78.2 （C-7）， 71.5 （C-8）， 27.5（C-9）， 18.4 （C-10）， 31.0 （C-11）， 70.9 （C-12） ， 43.1 （C-13）， 207.7 （C-14）， 73.9 （C-15）， 17.0 （C-16）， 17.9 （C-17）， 29.4 （C-18）， 16.5 （C-19）， 13.4 （C-20）， 20.8 （C3OCOCH3）， 21.1 （C12OCOCH3）， 170.9 （C3OCOCH3）， 17.07 （C12OCOCH3）。以上數據與文獻報道一致[8]，確定為3，12-di-O-acetylingol。

4 結 論

維藥“排日非云”在當地民間用于治療白內障，但尚未見有關其清除白內障的藥理和化學研究報道。本實驗前期通過硒性白內障大鼠動物模型篩選出多脂大戟樹脂治療白內障的活性部位，通過進一步分離得到6個單體化合物， 其中羊毛甾醇及其類似物eburicol 為主要成分。研究表明，羊毛甾醇可以降低兔白內障晶狀體白內障嚴重程度、提高透明度，并在體內試驗中減輕了狗白內障嚴重程度[9]。據此，初步推斷維藥“排日非云”用于治療白內障可能與所含大量的羊毛甾醇及類似物相關。

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（收稿日期：2020-06-05 編輯：劉斌）

基金項目：江西省衛生計生委中醫藥科研課題 （2017A300）。

作者簡介：廖東波（1994-），男，漢族，碩士研究生在讀，研究方向為中藥質量標準研究。 E-mail：2473776179@qq.com

通信作者：張亞梅（1982-），女，漢族，博士，副教授，研究方向為中藥資源與民族藥開發利用研究。E-mail：yameizhang01@126.com