肢傷愈合劑中川芎、赤芍的薄層色譜探析

馬夢黎　文金隆　莊彥

【摘 要】 目的：建立肢傷愈合劑的薄層定性質量標準。方法：通過不同提取方法、不同展開劑、不同檢視方法等對比，采用薄層色譜法對肢傷愈合劑中的主藥藥味川芎、赤芍進行薄層鑒別，并對確定方法進行了驗證。結果：薄層色譜斑點清晰、專屬性強，陰性對照無干擾。結論：本方法簡便可靠，重復性好，可作為肢傷愈合劑的定性鑒別。

【關鍵詞】 肢傷愈合劑;薄層色譜法;質量標準

【中圖分類號】R285 【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2020）23-0044-03

The Thin Layer Chromatography Anslysis of Chuanxiong Rhizoma and Paeoniae Rubra Radix in the Zhishangyu Mixture

MA Mengli WEN Jinlong ZHUAN Yan

Yuxi Municipal Hospital of TCM，Yuxi? 653100，China

Abstract：Objective To estalblish the qualitative quality standard of the Zhishangyu mixture.Methods Different extraction methods， different developing solvent and different inspection methods were compared. TLC was used for TLC identification of Chuanxiong Rhizoma and Paeoniae Rubra.Results The determination method was verified Results TLC spots were clear and specific， and the negative control had no interference.Conclusion This method is simple， reliable and repeatable， which can be used as the qualitative identification of the Zhishangyu mixture.

Keywords：Zhishangyu Mixture; TLC; Quality Standard

肢傷愈合劑（肢傷1號合劑）是玉溪市中醫院在肢傷1號方的基礎上自主研發的新制劑，由川芎、赤芍等7味中藥組成，具有行氣活血、祛瘀止痛的功效，用于氣滯血瘀型骨折創傷早期。肢傷1號方是在經方“四物湯”的基礎上，結合骨折創作早期的病理特點，經臨床實踐加減化裁而來。處方分析全方主藥為川芎、赤芍。川芎活血行氣，祛風止痛，是血中氣藥;赤芍清熱涼血、散瘀止痛，善散邪行血?，F代藥理研究表明川芎中的阿魏酸是公認的活性成分，具有抗腫瘤、抗菌和舒張血管的作用，在很多制劑中作為質量標準的考察指標。赤芍抗炎的化學成分及作用機制研究主要集中在芍藥苷。為了更好地對該制劑進行質量控制，保證臨床用藥安全有效，本研究對其中的川芎、赤芍進行薄層色譜鑒別研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器 YXQ-28OSI手提式壓力蒸汽滅菌器（嘉興市中并報醫療儀器有限公司）;KH-50B型超聲波清洗器（昆山和創超聲儀器有限公司）;BSA224S型電子天平（賽多利斯科學儀器（北京）有限公司）;ZF-2型三用紫外儀（上海安亭電子儀器廠）;HH-S2電熱恒溫水浴鍋;ZBY149-83型電熱恒溫鼓風干燥箱;Canon PowerShot G15數碼照相機（Canon INC）;

1.2 材料 硅膠G板（MERCK、青島海洋化工、自制板）;試劑均為分析純。阿魏酸對照品（批號：110773-201012）、芍藥苷對照品（批號：11C736-201438）、川芎對照藥材（批號：120918-201411）、當歸對照藥材（批號：120927-201516）、赤芍對照藥材（批號：121092-201003）等均購自中國藥品生物制品檢定所，肢傷愈合劑（批號：20150807、20151016、20160526）由玉溪市中醫醫院制劑室生產。

2 方法與結果

2.1 川芎的薄層鑒別 取本品50mL，加乙醚振搖提取2次，每次25mL，合并乙醚液，濾過，濾液揮干，殘渣加乙酸乙酯1mL使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對照藥材1g，加水煎煮2次，每次50mL，煮沸，并保持微沸20min，脫脂棉濾過，合并濾液，濾液同法制成對照藥材溶液。再取阿魏酸對照品，加乙酸乙酯制成每1mL含1mg的溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015版四部通則0502）試驗，吸取供試品溶液、對照藥材溶液、對照品溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（4∶3∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外光（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點;在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性對照無此斑點。結果見圖1。

2.2 赤芍的薄層鑒別 取本品50mL，加入25mL經水飽和的正丁醇振搖提取，分取正丁醇層，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解（必要時加中性氧化鋁1g，攪拌，蒸至近干，殘渣用乙醇20mL分次洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解），作為供試品溶液。另取芍藥苷對照品，加甲醇制成每1mL含4mg的溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015版四部通則0502）試驗，吸取供試品溶液、對照品溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照無干擾。結果見圖2、圖3。

3 討論

3.1 實驗優化 本實驗初期逐一對該制劑中的主要藥味進行提取對照，并制作了相應的陰性對照液一起實驗。綜合制劑的藥理作用和現代有效成份的研究，選擇主藥的主要藥理成分阿魏酸和芍藥苷作為最終對照。在實驗操作中對以下項目進行優化。

3.1.1 供試品溶液的提取和前處理對比 阿魏酸項采用酸性條件下乙醚萃取、乙醚直接萃取作比較，結果酸性條件下的乙醚萃取液在薄層色譜法中有一明顯灰色干擾斑點，與阿魏酸對照品的位置較接近。而乙醚直接萃取既減少操作，又可得到較好地結果。芍藥苷項采用醇提不能清晰地分離出來，改用正丁醇提取基本可以分離出來。但在某些批次的產品提取后所得供試液較濃，干擾大。加入中性氧化鋁處理后可得到較好結果。

3.1.2 展開系統優化 阿魏酸展開劑分別嘗試正己烷-乙酸乙酯（4∶1）（9∶1）、環己烷-二氯甲烷-乙酸乙酸-甲酸（4∶1∶1∶0.1）、甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5∶2∶0.1）（2∶1.5∶0.05）等多種展開劑進行展開對比，根據展開顯色效果最終確定展開劑甲苯-醋酸乙酯-甲酸（4∶3∶0.1）為展開劑。芍藥苷項薄層試驗的展開經驗，分別嘗試用三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液（8∶1∶4∶1）、三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）多次進行展開對比。在實際工作中，因濃氯試液在貯存過程因貯存時間、環境等原由，會導致濃氨試液的濃度下降導致影響結果。最終決定選擇后者作為展開劑。

3.1.3 檢視方法選擇 阿魏酸分別嘗試直接觀察、紫外觀察、顯色劑顯色觀察對所得的薄層板進行檢視。最為方便的是紫外燈下檢視，故最終確定為紫外365nm檢視。芍藥苷項分別嘗試5%香草醛硫酸液、10%硫酸乙醇液、5%硫酸乙醇液顯色。5%香草醛硫酸液需要現配現用，10%硫酸乙醇液對霧化器的要求較高。結合我院制劑實驗室的條件，最終選擇5%硫酸乙醇液。加熱顯色時選擇105℃烤箱加熱、電吹風熱風逐步加熱作對比。105℃烤箱加熱掌握不好時間，容易加熱過導致顯色斑點效果不好，不能看到斑點顯色變化。熱風吹則可人為控制加熱程度，更好更明顯地看到斑點的顯現及變化情況。

3.1.4 對照物質的選用 選用相應的對照藥材、對照品進行對照。川芎項陰性對照中阿魏酸對照品對應的位置顯相同顏色的對照斑點，所以保留了對照藥材與對照品兩項對照。赤芍項陰性無干擾，為方便實際生產檢驗控制，最終標準確定為芍藥苷項，不再保留赤芍對照藥材。

3.2 實驗驗證 在實際的質量標準應用中，產品批次、實驗條件、實驗器材、實驗人等均是標準應用的主要影響因素，為使所確定的專屬性薄層項在實際的應用質控時能較好地指控產品質量。選擇不同產品批次、不同薄層板、不同的操作者對該質量標準進行驗證。

3.2.1 薄層板驗證 不同薄層板對實驗的承載量等均有所不同，分離效果亦不相同，所以根據驗證結果對質量標準進行點樣量的范圍界定。對比三種薄層板，Merck板的分離度最高，承載量最小，青島板次之。自制板分離度最低，承載量最大，需要加大點樣量方可得到滿意的結果圖。故而在點樣量中取一個中間點樣量。

3.2.2 斑點顯色情況 斑點顯色與薄層板、顯色時間、加熱程度及放置時間等息息相關。一般初期的斑點顏色偏艷，放置空氣中較長時間后變淡。

綜上，通過實驗項目的優化與驗證，本文建立的肢傷愈合劑的川芎、赤芍的薄層鑒別項色譜斑點清晰，專屬性強，陰性對照無干擾。實際應用中簡單方便，重復性好，可作為肢傷愈合劑的定性鑒別。曾嘗試用高效液相對其阿魏酸和芍藥苷進行含量測定，因現實條件等問題暫不定為該制劑的質量標準項?？稍谝院蟮臉藴侍嵘性龠M一步確定。

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（收稿日期：2020-06-08 編輯：劉斌）

基金項目：云南省科技計劃項目（中醫聯合專項2017FF116-046）;中醫藥傳承與創新（歧黃工程）。

作者簡介：馬夢黎（1977-），女，漢族，本科，副主任中藥師，研究方向中藥制劑研究。E-mail：aline50@163.com