血液篩查實驗室核酸檢測試劑利用率探討

張卓新

焦作市中心血站，河南焦作 545000

核酸檢測（NAT）技術對獻血者血液標本進行篩查，是提高血液安全性的重要舉措。NAT 是使用物理、化學和生物學的方法，通過靶核酸擴增的方法，將極微量的核酸轉變成直觀的光電或可視信號，從而判斷是否存在病原體[1]。該方法敏感度極高，可檢測出極微量的核酸，大大縮短了“窗口期”，是血清學檢驗的一項必不可少的補充性檢測方法。但由于核酸檢測試劑較為昂貴，提高了血液檢測的成本，為血站正常運營增加了較大壓力，因此，只有科學合理地運用才能降低試劑的損耗，提高試劑利用率，降低檢測成本[2]。如何對實驗室進行質量監控，減少試劑的損耗，也是目前亟待解決的問題。

該站作為河南省無償獻血者核酸集中化檢測單位之一，承擔了濟源血站無償獻血者核酸標本的檢測，目前配置了浩源和華益美兩個廠家的核酸檢測系統，現就二者的試劑使用情況進行分析，對2018 年1 月—2019 年7 月焦作和濟源地區共104 981 份無償獻血者血液核酸標本進行研究，報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源

該站檢測焦作和濟源地區無償獻血者血液核酸標本共104 981 份，除了室間質評標本、部分單采血小板、環境監測、追蹤等標本進行單檢檢測，其余標本均采用8 混樣檢測，其中用浩源系統檢測65 739 份，用華益美系統檢測39 242 份。核酸標本采用無菌帶分離膠抗凝（EDTA-K2）核酸檢測專用真空試管，留取5 mL 全血標本供核酸檢測。

1.2 試劑

HBV-DNA、HCV RNA、HIV-1RNA 核酸檢測試劑盒（PCR 熒光法）（上海浩源生物科技有限公司）、HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-（1+2 型）RNA 核酸檢測試劑盒（蘇州華益美生物科技有限公司），兩家核酸試劑均有生產廠家提供的出廠質量檢驗報告合格證明試劑，均在有效期內使用。所有檢測操作嚴格參照儀器以及試劑盒說明書進行。

1.3 主要儀器

ChiTaS BSS1200 全自動核酸純化儀，Ampli STAR STD 全自動核酸提取純化儀，ABI7500 實時熒光定量PCR 系統，TDL5B 臺式大容量低溫離心機，生物安全柜BSC-1500ⅡB2-X，生物安全柜HR40-ⅡA2，全自動加蓋機APS-C，全自動開蓋機KG-12L 等。

1.4 方法

統計 2018 年 1 月—2019 年7 月份浩源與華益美核酸試劑各自檢測人份數、試劑使用量，將各自的實際檢測人份數與理論檢測人份數對比，可得出試劑利用率，分析兩套核酸檢測試劑的使用情況。

1.5 統計方法

采用SPSS 18.0 統計學軟件分析數據，計量資料用（±s）表示，采用 t 檢驗；計數資料用百分比（%）表示，采用 χ2檢驗，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 2018 年1 月—2019 年7 月浩源及華益美核酸試劑檢測人份數、試劑使用量、試劑利用率

兩家試劑的利用率大致相近，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 2018 年1 月—2019 年7 月浩源及華益美核酸試劑檢測情況

2.2 2018 年1 月—2019 年7 月室間質評、單采血小板、環境監測、追蹤的單檢用量及占總用量百分比

室間質評、單采血小板、環境監測、追蹤等標本直接單檢，所占試劑用量百分比較低，見表2。

表2 2018 年1 月—2019 年7 月兩家試劑用量及占總用量百分比

3 討論

傳統血液篩查方法有一定弊端，因傳統ELISA 方法不僅具有較長窗口期，同時靈敏度較低，且很大一部分是單試劑不合格，尤其是在HbsAg 與抗-HIV2 項不合格結果中，造成了血液安全性低與報廢率增加的不良結果[3]。歐美等發達國家與地區已經將核酸檢測當作常規的血液篩查，因其靈敏度和特異度均較高，血傳播疾病的傳播率大大降低。國內有關文獻也報道，通過NAT 檢測能縮短窗口期，進而降低HBV、HIV 以及HCV 傳播風險，提升血液安全性[4]。而自動化NAT 系統其試劑價格較高，如何在確保檢測質量的前提下降低檢測成本，提高試劑的利用率，是目前相關研究人員較為關注的問題。我國依據有關規定逐漸開展了核酸檢測，但受資金和人員等因素影響，暫未納入常規篩查方法，只有部分國內血站開始試點核酸篩查法，以進一步降低輸血風險。只有科學利用試劑，節約成本，提升檢測的利用率，才能確保核酸檢測更好地開展[5-6]。另外，由于NAT 檢測對試劑的存放條件和時間均有較高的要求，因此掌握試劑未能完全使用的原因，并提出相對的對策，在提高試劑利用率方面具有重要意義。

由表1 可以看出，兩家試劑的試劑利用率大致相近（P＞0.05），表2 顯示，室間質評、單采血小板、環境監測、追蹤等標本直接單檢，所占試劑用量百分比較低，除這些單檢造成的試劑用量之外，影響兩家試劑利用率的共同原因，分析主要有以下幾個方面：①實驗過程中，實驗人員的操作不夠嚴謹，如擺放耗材時觀察不細致，或耗材碰觸到污染區域，造成耗材的污染；手和胳膊從已開封的試劑上方經過，易污染試劑，導致混檢陽性率增高，拆分頻次及數量增加，試劑利用率下降。②實驗結束后的消毒滅菌工作不夠細致，消毒劑的配制偏少，對儀器表面、實驗室臺面、地面的擦拭消毒不夠徹底，75%酒精噴淋不夠密集，對空氣中的氣溶膠沉降效果差，造成氣溶膠的擴散、殘留、集聚，導致隨后的實驗混檢陽性率增高，從而造成試劑的浪費[7-8]。③設備儀器出現故障，造成試劑損耗量增加。

就浩源試劑單獨來講，影響試劑利用率的還有一個特殊的因素，就是浩源試劑已預分裝好，一盒試劑6 條，48 個測試，1 條8 個 POOL，實際工作中，很難做到每次標本檢測量恰好整條，為了保證血液標本的檢測報告及時發布，不可避免地會浪費幾個POOL 的試劑，導致試劑利用率下降。

華益美試劑是根據標本檢測量臨用前配制的，從理論上來講試劑有效使用率應該會高，但實際工作中發現試劑有效使用率并不是十分理想，分析原因可能為：①為了節約試劑，實驗后剩余的試劑是要回收的，試劑存在被污染的風險；②華益美檢測設備的加樣、磁珠的攪拌混勻、核酸模板提取以及反應液的添加都在同一區域中，節省了空間，但會導致局部氣溶膠濃度升高，氣溶膠污染的風險較高；③設備本身不帶紫外消毒燈，實驗結束后的殺菌消毒效果可能不是非常理想，難以對設備的各種縫隙進行有效的清潔消毒；④華益美核酸檢測系統是該站第二個核酸實驗室，空間相對狹小，空調出風口位于核酸檢測設備上方，空調出風可能對實驗室氣流有一定影響，干擾新風系統對實驗室空氣的循環凈化作用，從而造成混檢反應率增高，試劑利用率下降。

綜上所述，血站核酸檢測實驗室為了控制檢測成本，減少試劑損耗，在今后的工作過程中應在以下幾方面加以改進：①加強培訓，提高核酸實驗室工作人員的素質與技能，提高檢測人員操作的熟練度和標本管理能力。②嚴格按照消毒滅菌標準操作規程對實驗室清潔消毒，降低外部污染造成的試劑損耗。③對于浩源檢測系統，在不影響獻血者血液檢測進程的情況下，可以盡量湊足整條使用，減少試劑浪費損耗。④對于華益美檢測系統，實驗室溫濕度適宜的情況下，減少甚至不用空調，做好日常消毒的同時，每周用紫外燈消毒車對儀器內部進行照射消毒，降低設備內部的氣溶膠集聚粘附的概率。通過以上措施，盡可能避免環境、人為因素對檢測的影響，提高核酸試劑利用率，降低檢測成本，對于保障血站正常運行具有重要意義。⑤實驗室人員需做好儀器的日常維護工作，并做好試劑和標本的管理工作，例如嚴格保證標本的有效性，避免標本質量對檢測結果的影響，提高檢測成功率； 常規檢測壓力儀能提前預知到壓力泵問題，避免因壓力泵問題造成的實驗無效。定時儀器維護還能有效防止管道堵塞出現。此外，還能阻止灰塵進入到機器中，減少機器硬件故障出現，減緩儀器老化與各部件損耗[9-10]。⑥深入分析每次試劑損耗的原因，吸取經驗，并建立起防止類似問題出現的措施，經每次全面深入分析，不斷總結，不斷提高，獲取寶貴經驗。⑦因NAT檢測過程非常精密，在檢測過程中軟件、儀器、工作人員操作等因素均可能導致試劑的浪費，故實際檢測中還需優化工作流程，設計好檢測計劃，提高試劑的利用率。