謝玲玲,李仁杰
山丹顆粒是臨床經驗方,由山楂、丹參、川芎等中藥組成,其功效為活血散瘀、行氣止痛,臨床用于治療胸痹心痛。臨床人擬用量為生藥45 g/d[生藥0.64 g/(kg·d),按70 kg體重計算]。本研究觀察山丹顆粒對垂體后葉素(Pit)致大鼠急性心肌缺血的影響,現報道如下。
1.1 實驗動物 無特定病原體(SPF)級SD大鼠60只,雌雄各半,體重180~220 g;購于廣東省醫學實驗動物中心,動物許可證號:SYXK(粵)2014-136。
1.2 藥物 山丹顆粒(規格:每袋5 g,1 g顆粒相當于4.5 g生藥,深圳市龍華區人民醫院提供,批號:20170421),口服,每次1袋,每日2次。硝酸異山梨酯片(規格:每片5 mg,北京恒生藥業有限公司,國藥準字:H11021331,批號:170803),口服,每日1~2片,每日2次或3次。
1.3 試劑 鹽酸異丙腎上腺素(上海禾豐制藥有限公司,國藥準字:H31021344,批號:41170612);戊巴比妥鈉(SIGMA,批號:127k1005);肝素注射液(南京新百藥業有限公司,國藥準字:H32025851,批號:170316);氯化鈉注射液(四川科倫藥業股份有限公司, 國藥準字:H20056626,批號:1509130223);大鼠肌鈣蛋白T(cTnT)檢測試劑盒(上??道噬锟萍加邢薰?。
1.4 儀器 生物機能實驗系統,成都泰盟科技有限公司生產;多導生理記錄儀,澳大利亞AD公司生產;BY-R4000型低速醫用離心機(北京白洋醫療器械有限公司生產);電熱恒溫培養箱(蘇州澳爾利烘箱電熱設備制造有限公司生產);ReadMax 1900型光吸收型全波長酶標儀(上海閃譜生物科技公司生產);Nikon130285型光電顯微鏡。
1.5 方法 將60只SPF級SD大鼠隨機分為6組,分別為空白對照組、模型對照組、山丹顆粒低劑量組(生藥4.05g/kg)、山丹顆粒中劑量組(生藥8.10 g/kg)、山丹顆粒高劑量組(生藥16.20 g/kg)、硝酸異山梨酯片組(2.70 mg/kg),每組10只。灌胃給藥,空白對照組、模型對照組給予等量蒸餾水,每日1次,連續給藥14 d,末次給藥60 min后,戊巴比妥鈉(55 mg/kg)腹腔注射麻醉后,分離頸總動脈,近頭端處結扎,左心室插管測心室內壓,分離右側股動脈,近足端結扎,測量動脈壓,Ⅱ導心電圖,以上連接于多道生理記錄儀。尾靜脈注射垂體后葉素注射液(0.4 U/kg)[1-3]造模,空白對照組注射等體積生理鹽水,描記造模前及造模后15 s、15 min、30 min的心電圖、股動脈壓及左心室內壓,監測動脈收縮壓(SAP)、左室收縮壓(LVSP)、左室舒張期末壓(LVEDP)。描記結束后大鼠腹主動脈采血,測cTnT。采血后取心臟,用福爾馬林溶液固定,取左心室,用于蘇木素-伊紅(HE)染色,觀察心肌組織結構的變化。
2.1 山丹顆粒對Pit致大鼠急性心肌缺血ST段的影響 與空白對照組比較,模型對照組大鼠注射Pit后15 min、30 min ST段顯著升高(P<0.01)。與模型對照組比較,山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit后15 min、30 min ST段均降低(P<0.05)。山丹顆粒低劑量組與山丹顆粒中劑量組雖然呈劑量依賴性降低ST段,但差異無統計學意義。詳見表1。
表1 山丹顆粒對Pit致大鼠急性心肌缺血ST段的影響(±s) 單位:mV
①與空白對照組比較,P<0.01;與模型對照組比較,②P<0.05。
2.2 山丹顆粒對Pit致大鼠急性心肌缺血T波的影響 與空白對照組比較,模型對照組大鼠注射Pit后15 min、30 min T波顯著降低(P<0.05)。與模型對照組比較,山丹顆粒中劑量組大鼠注射Pit后30 min T波顯著升高(P<0.05);山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit后15 min、30 min T波顯著升高(P<0.05)。詳見表2。
表2 山丹顆粒對Pit致大鼠急性心肌缺血T波的影響(±s) 單位:mV
①與空白對照組比較,P<0.05;與模型對照組比較,②P<0.05。
2.3 山丹顆粒對Pit致大鼠急性心肌缺血動脈收縮壓的影響 與空白對照組比較,模型對照組大鼠注射Pit后15 s、15 min動脈收縮壓均升高(P<0.05)。山丹顆粒各劑量組與模型對照組比較各時間點差異均無統計學意義(P>0.05)。詳見表3。
表3 山丹顆粒對Pit致大鼠急性心肌缺血動脈收縮壓的影響(±s) 單位:mmHg
注:1 mmHg=0.133 kPa;①與空白對照組比較,P<0.05。
2.4 山丹顆粒對Pit致大鼠急性心肌缺血左室收縮壓的影響 與空白對照組比較,模型對照組大鼠注射Pit后15 s、15 min左室收縮壓顯著升高(P<0.05)。與模型對照組比較,山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit后15 min左室收縮壓顯著降低(P<0.05)。詳見表4。
表4 山丹顆粒對Pit致大鼠急性心肌缺血左室收縮壓的影響(±s) 單位:mmHg
①與空白對照組比較,P<0.05;與模型對照組比較,②P<0.05。
2.5 山丹顆粒對Pit致大鼠急性心肌缺血左室舒張期末壓的影響 與空白對照組比較,模型對照組大鼠注射Pit后15s、15min,左室舒張期末壓均顯著升高(P<0.01)。與模型對照組比較,山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit后15 s、15 min左室舒張期末壓顯著降低(P<0.05);山丹顆粒中劑量組大鼠注射Pit 15 min左室舒張期末壓降低(P<0.05)。詳見表5。
表5 山丹顆粒對Pit致大鼠急性心肌缺血左室舒張期末壓的影響(±s) 單位:mmHg
①與空白對照組比較,P<0.01;與模型對照組比較,②P<0.05。
2.6 山丹顆粒對Pit致大鼠急性心肌缺血血清cTnT的影響 與空白對照組比較,模型對照組血清cTnT顯著升高(P<0.01);與模型對照組比較,山丹顆粒高劑量組大鼠血清cTnT顯著降低(P<0.05)。詳見表6。
表6 山丹顆粒對Pit致大鼠急性心肌缺血 血清cTnT的影響(±s) 單位:μg/L
①與空白對照組比較,P<0.01;與模型對照組比較,②P<0.05。
2.7 大鼠左心室心肌組織HE染色 由HE染色可見,空白對照組大鼠心肌無病變,細胞排列緊密、層次清晰,細胞核圓形或橢圓形,核仁清晰,心肌細胞胞漿、核染色均勻。模型對照組大鼠心肌左心室片狀透壁壞死,多處局灶性損害,肌纖維腫脹和斷裂,心肌細胞溶解消失,呈片狀淋巴細胞浸潤。各給藥組心肌細胞出現局灶性的間質反應,肌纖維斷裂以及水腫,部分心肌細胞溶解消失,但與模型對照組病變程度相比均有所減輕。詳見圖1。
圖1 各組大鼠左心室心肌組織HE染色圖(×200倍)
(A為空白對照組;B為模型對照組;C為山丹顆粒低劑量組;
D為山丹顆粒中劑量組;E為山丹顆粒高劑量組;F為硝酸異山梨酯組)
心肌缺血是指心臟的血液灌注減少,心臟的供氧失衡,心肌能量代謝失常,不能支持心臟正常功能的病理狀態。Pit作用于加壓素受體,可引起冠狀動脈痙攣,心肌供血不足和心肌損傷,收縮全身小血管使心臟負荷加重,導致心肌缺血[4-6]。本研究中山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit 15 min后左室收縮壓顯著降低,可以降低心肌耗氧量。山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit 15 s、 15 min后左室舒張期末壓顯著降低,說明山丹顆??梢越档托呐K后負荷,進而降低心肌耗氧量,緩解由Pit造成的心肌缺血、缺氧。
ST段反映心室各部處于去極化狀態,故無電位差。正常接近于等電位線。當某部位的心肌出現缺血時,心室在除極后仍存在電位差,表現為ST段發生偏移[7-8]。山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit 15min、30 min后ST段升高幅度顯著降低。T波位于ST段之后,是心室復極所產生的,從基線開始緩慢上升后較快下降。T波方向和QRS波群的主波方向一致。T波低平或倒置,常見于心肌缺血[9-10]。山丹顆粒中劑量組大鼠注射Pit 后30 min T波高度顯著升高,山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit 后15 min和30 min T波高度顯著升高。從改變ST段升高幅度和T波降低幅度可以得出山丹顆??蓽p輕Pit造成的心肌缺血程度。肌鈣蛋白(Tn)是肌肉組織收縮的調節蛋白,cTnT是心肌細胞特有的抗原,當心肌細胞受到損傷時cTnT從心肌纖維上降解下來[11]。血清中cTnT升高表明心肌細胞受損,其特異性與敏感性均高于常用的心肌酶譜[12]。山丹顆粒高劑量組大鼠注射Pit后血清cTnT水平顯著降低,提示山丹顆粒具有減輕由Pit誘發心肌缺血而引起的心肌細胞損傷的作用。
山丹顆粒對Pit致大鼠急性心肌缺血模型具有保護作用,以上藥效學結果為山丹顆粒在臨床治療胸痹心痛提供了試驗依據。