基質金屬蛋白酶抑制劑對口腔鱗癌細胞增殖和侵襲能力的影響

牛榮榮

[摘要]目的：探討分析采取MMP-9抑制劑作用于口腔鱗癌細胞后對其增殖與侵襲能力的研究。方法：提取口腔鱗癌細胞標本進行培養，不同濃度的MMP-9抑制劑作用對細胞進行RT-PCR檢測、劃痕實驗檢測增殖與侵襲能力的研究。結果：在OumolL濃度時增殖數據為1.0，在5umol/L時鱗的增殖數據為0.5，說明MMP-9抑制劑能夠明顯抑制細胞增殖。隨著MMP-9抑制劑不斷增加與細胞處理的時間不斷延長，細胞遷移距離逐漸縮小，并呈現相關性。結論：對口腔鱗狀細胞而評取MMP-9抑制劑進行干預后可明顯降低細胞增殖以及侵襲能力，為臨床研究提供重要理論依據。

[關鍵詞]：MMP-9抑制劑;口腔鱗癌細胞;增殖;侵襲

[中圖分類號]R73 [文獻標識碼]A [文章編號]2107-2306（2020）04-115-01

口腔癌為頭頸外科中最常見的惡性腫瘤之一，在我國的發病率逐年攀升。其發病原因多種多樣，大部分由口腔黏膜表層鱗狀細胞發生惡變而來。目前臨床上對于口腔癌患者通常采取手術干預以及放化療干預方式進行治療[1]，對于患者口腔原有結構的破壞較大，而在其他瘤種領域較為有效的靶向治療目前在口腔癌方面大多還停留在基礎和臨床試驗中?？谇话┲心[瘤細胞脫離原發灶向遠處侵襲轉移與其不良預后有密切關系，而其中基質金屬蛋白酶（Matrixmetalloproteinase，MMPs）作為降解細胞外基質的主要酶類，MMP-9的過度表達與口腔癌的浸潤和淋巴結轉移密切相關，在口腔癌發生發展過程中發揮關鍵作用[2]。因此本研究探討MMP-9抑制劑對于口腔癌細胞的增殖與侵襲能力是否能夠有效抑制，為臨床治療提供參考。

資料和方法

1.1鱗狀細胞的采集以及培養：選取我院口腔癌患者口腔上皮細胞中的鱗狀細胞株，在37C標準溫度下，放置于10%胎牛血清中進行增殖培養，并在培養皿中加人100U/ml單位劑量的青霉素進行保護，將配置好的培養皿放置在CO2孵化箱內進行細胞增殖，并保持孵化箱內CO2濃度水平保持在5%，并根據實驗所需對處于生長期內的細胞進行相應實驗操作。

1.2實驗方法干預：對口腔鱗狀細胞進行RT-PCR反應檢測，采取5umol/L的MMP-9抑制劑對培養皿中的對數期鱗狀細胞進行持續處理48h，將TRNzol加入培養皿中，按照相應提取細胞RNA的標準步驟進行相應細胞RNA的提取操作，并最后將所提取的RNA進行紫外分光光度計進行RNA濃度與純度進行相應測定工作，并采取SYBR熒光染色劑將對數期鱗狀細胞的mRNA進行相應分析表達處理。在采取遷移實驗中，首先操作人員選取馬克筆在檢測6孔板的背面均勾畫出相等長度的橫線，每條橫線間隔在lcm左右，并保證每條橫線橫穿過檢測板上的孔隙，將處于對數期的鱗狀細胞注入孔隙內并保持12h培養時間，每組實驗細胞設定3個復孔，在培養12h后采用規格為200ul的移液槍，將槍頭垂直在6孔板的板底并進行劃痕處理，并按照濃度不同分別加人到各個MMP-9抑制劑中，并選取陰性標準作為對照組。操作完畢后將其放人37C標準溫度下CO2濃度水平保持在5%下繼續進行細胞培養，每個孔隙選取5個不同的區域并按照時間0時、24時、48時對其進行拍照處理，采取專業分析移動軌跡的軟件對劃痕圖像進行綜合數據分析，根據測量圖像中劃痕的寬度數據來計算鱗狀細胞的遷移率。

1.3研究方法：數據用SPSS20.0統計分析，計量資料采取正太分布的標準進行計算，實驗計量資料數據均采取均數、標準差進行標識。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1鱗狀細胞RT-PCR檢測結果數據：在MMP-9抑制劑0umol/L濃度時鱗狀細胞的增殖數據為1.0，在MMP-9抑制劑濃度為5umol/L時鱗狀細胞的增殖數據為0.5，說明MMP-9抑制劑能夠明顯抑制鱗狀細胞的增殖功能，統計學差異明顯（P<0.05）。

2.2鱗狀細胞的劃痕實驗數據：在增殖24hMMP-9抑制劑5umol/L濃度時鱗狀細胞的遷移率為16.48%、10umol/L濃度時遷移率為12.45%，對照組遷移率為32.81%。在48hMMP-9抑制劑濃度為10umol/L時鱗狀細胞的遷移率為19.88%、10umol/L濃度時遷移率為13.68%，對照組遷移率為42.22%。統計學差異明顯（P<0.05）。

3討論

口腔鱗癌頸淋巴結轉移是影響患者預后的重要因素[3]。腫瘤的轉移是一個包含多個階段的復雜進程，其中腫瘤細胞對基底膜的破壞從而允許其在組織之間移動是一個重要的因素，而基質金屬蛋白酶對細胞外基質的調節和重塑起著關鍵的作用[4]。既往研究中，通過對MMP-9的抑制可以有效降低乳腺癌、食道癌、喉頭癌等腫瘤細胞的增殖[5-8]。本實驗中在設定MMP9抑制劑Oumol/L濃度時鱗狀細胞的增殖數據為1.0，在MMP-9抑制劑濃度為5umol/L時鱗狀細胞的增殖數據為0.5，說明MMP-9抑制劑能夠明顯抑制鱗狀細胞的增殖功能。，且隨著MMP-9抑制劑不斷增加與細胞處理的時間不斷延長，細胞遷移距離逐漸縮小并呈現相關性。

說明MMP-9抑制劑可以明顯抑制增殖的腫瘤細胞擺脫基底膜的束縛、干預腫瘤細胞的增殖與侵襲能力，從而達到控制患者口腔腫瘤細胞增殖與侵襲的能力。

綜上所述，口腔鱗狀細胞經MMP-9抑制劑進行干預后可明顯降低細胞增殖能力和侵襲能力，為臨床研究提供重要理論依據。

參考文獻

[1].張桂蓮，宿穎，張辛燕.山竹醇對人口腔鱗癌細胞糖酵解代謝通路的影響.北京口腔醫學，2017，25（2）：6670-6670.

[2].李文薈，郭莉，譚耀文，etal.口腔癌及癌前病變組織中MMP-9基因表達的意義[J].臨床口腔醫學雜志，2007，23（1）：27-28.

[3].李曉明，邸斌，尚耀東，etal.ClinicopathologicFeaturesandPrognosticFactorsofCervicalLymphNodeMetastasisinOralSquamousCellCarcinoma%口腔鱗癌頸淋巴結轉移的臨床病理學特點及其對預后的影響[D].癌癥，2005，24（2）：208-212.

[4].Jacob A.The regulation of MMP targeting to invadopodia during cancer metastasis[J.Frontiers in cell and developmental biology，2015， 3：4.DOI：10.3389/fcell.2015.00004

[5].Hallett MA， Teng B， HasegawaH ，et al.Anti-matrixmetalloproteinase9 DNAzymedecreasestumorgrowthintheMMTVPyMT mousemodelelof breast cancer.Breast Cancer R esearchBcr， 2013， 15（1）：R12-R12.

[6].Ren F，Tang R，Zhang X，et al.Overexpression of MMP Family Members Functions as Prognostic Biomarker for Breast Cancer Patients：A Systematic Reviewand Meta-Analysis[J]. PloS one， 2015， 10（8）：e0135544.DOI：10.1371l/journal.pone.0135544

[7]. Palumbo A，Meireles Da Costa N，Pontes B，et al.Esophageal Cancer Development： Crucial Clues Arising from the Extracellular Matrix[J].Cells，2020，9（2）：.DOI： 10.3390/cells9020455

[8].Grzelczyk WL，Szemraj J.The matrix metalloproteinase in larynxcancer[J].Postepy higieny i medycynydos wiadczalnej （Online）， 2016，70（0）：1190-1197.