薏苡仁油軟膠囊的急性毒性和亞急性毒性研究

黃樣增

(福建仙芝樓生物科技有限公司 藥用菌栽培與深加工國家地方聯合工程研究中心，福州 350002)

薏苡仁被國家衛生健康委員會列為藥食兼用品，具有健脾利濕、除痹止瀉、清熱排膿的功效，可以用于水腫、小便不利、腳氣、脾虛泄瀉、濕痹拘攣、腸癰、肺癰、扁平疣等的治療。作為一種藥食兩用的功能性食品原料，人們對薏苡仁的關注日益增加，開發薏苡仁類保健產品成為發展的必然趨勢。薏苡仁油是從禾本科植物薏苡(Coixlacryma-jobi. var.ma-yuan(Roman.)Stapf)的干燥成熟種仁[1]中提取的活性物質。薏苡仁含有2%～7%的薏苡仁油，薏苡仁油富含不飽和脂肪酸，主要成分為油酸[2-3]、亞油酸，具有抗腫瘤[4]、抗白血病[5]、鎮痛止血[6]的作用。薏苡仁油軟膠囊為增強機體免疫力的保健品[7],但是目前對于薏苡仁油軟膠囊的安全性報道較少。為科學評價其安全性,本文對薏苡仁油軟膠囊進行了急性毒性和亞急性毒性研究，以期為薏苡仁的進一步研究提供基礎數據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗樣品

薏苡仁，購買于福建省浦城縣，按照《中國藥典》(2015年版一部)檢測合格后，經超臨界CO2萃取分離，得薏苡仁油(密度為0.87 g/mL)，直接經壓丸后得到薏苡仁油軟膠囊。軟膠囊內容物組成是純薏苡仁油(99.5%)和0.5%維生素E，其中甘油三酯含量大于等于90%。薏苡仁油軟膠囊內容物，成人日推薦劑量為2.0 g，相當于0.033 3 g/kg(成人體重以60 kg計)，臨用前分別稱取樣品(薏苡仁油軟膠囊內容物)16.66、33.4、66.6 g加大豆油至100 mL，攪拌均勻，作為低、中、高劑量組受試物。

大豆油(非轉基因)，購于福州金滿福糧油貿易有限公司。

1.1.2 試驗動物

由上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供的清潔級ICR小鼠20只，體重18～22 g，雌雄各半；清潔級SD大鼠80只，體重67～85 g，雌雄各半。試驗動物許可證號為SCXK(滬)2012-0002。

1.1.3 飼養環境

福建省疾病預防控制中心SPF級動物實驗室，許可證號為SYXK(閩)2012-0008。

1.1.4 儀器與設備

日立7060C全自動生化分析儀，SHANDON EXCELSIOR全自動密封脫水機，美國雅培CELL-DUN3700血球分析儀，LEICA EG 1150石蠟包埋機，CS-IV攤片烤片機，SHANDON Finesse325石蠟切片機，電熱鼓風干燥箱，LEICA ST5020全自動染片機，OLYMPUS BX51顯微鏡，電子天平。

1.2 試驗方法

按照《保健食品檢驗與評價技術規范(2003版)》，進行小鼠經口急性毒性試驗和大鼠30 d喂養試驗，分別觀察薏苡仁油軟膠囊的急性毒性和亞急性毒性。

1.2.1 急性毒性試驗

急性毒性試驗若LD50大于或等于100倍者，則可以考慮進入下一階段毒理學試驗。選取18～22 g健康ICR小鼠20只，雌雄各半。試驗前小鼠隔夜禁食16 h，不禁水。取薏苡仁油軟膠囊內容物以經口方式灌胃，灌胃劑量為17.4 g/(kg·d)。成人日推薦劑量為2.0 g，相當于0.033 3 g/(kg·d)(成人體重以60 kg計)。則試驗倍數為17.4/0.033 3≈522，遠大于100倍。灌胃后，連續觀察14 d，每天觀察并記錄動物中毒的表現和死亡情況。室內保持溫度18～22℃，相對濕度50%～60%，噪聲60 dB以下，照明10～14 h，換氣8～20次/h；每3 d洗1次飲水瓶，每天下午加滿全價營養塊狀飼料和飲水。

1.2.2 大鼠30 d喂養試驗

1.2.2.1 分組及給予受試物

按照《保健食品檢驗與評價技術規范(2003版)》的要求，若30 d喂養試驗未觀察到有害作用的最大劑量大于或等于人的可能攝入量的100倍，綜合其他各項試驗結果可初步做出安全性評價。將雌雄大鼠按體重隨機分成4組，每組各10只。試驗按受試物成人日推薦量的25、50、100倍，設3個劑量組分別為0.833、1.67、3.33 g/(kg·d)，另設大豆油為對照組。按5 mL/(kg·d)經口灌胃給予不同濃度受試物及對照物1次。試驗期間動物單籠喂養，自由進食飲水，每天觀察動物形態，記錄飼料灑漏量，每周記錄1次體重和2次食物攝入量。喂養30 d禁食過夜后稱重，采血做血常規及生化指標測定，取出脾、肝、睪丸、腎稱重，并對胃腸、脾、肝、腎、睪丸、卵巢做病理學檢查。室內保持溫度18～22℃，相對濕度50%～60%，噪聲60 dB以下，照明10～14 h，換氣8～20次/h；每3 d洗1次飲水瓶，每天下午加滿全價營養塊狀飼料和飲水。

1.2.2.2 觀察指標

(1)動物的一般表現、體重、進食量、食物利用率。

(2)血常規及生化指標：紅細胞計數、白細胞計數、白細胞分類、血紅蛋白、谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、肌酐、尿素、甘油三酯、總膽固醇、血糖、總蛋白、白蛋白。

(3)病理解剖：臟體比、大體觀察及病理組織學檢查(胃腸、肝、脾、腎、睪丸和卵巢)。

1.2.3 數據統計

試驗數據以SPSS軟件進行單因素方差分析。經方差齊性檢驗，方差齊的試驗數據采用LSD法進行統計分析，方差不齊的試驗數據采用Tambane法進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 急性毒性試驗(見表1)

由表1可知，試驗期間動物未見異常；受試物屬無毒級。

表1 薏苡仁油急性經口毒性試驗

2.2 大鼠30 d喂養試驗

2.2.1 一般形態觀察

該樣品3個劑量組的大鼠毛質白、有光澤，外觀形態與對照組比較無區別，也無死亡現象。

2.2.2 動物體重增長與食物利用率(見表2～表4)

由表2～表4可見，試驗期間，各劑量組每周體重、進食量、食物利用率及試驗結束時各劑量組大鼠體重及體重增量、總進食量、總食物利用率與對照組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。

表2 薏苡仁油對大鼠體重的影響

表3 薏苡仁油對大鼠進食量的影響

表4 薏苡仁油對大鼠食物利用率的影響

2.2.3 血常規檢查結果(見表5)

由表5可見，各劑量組大鼠的血紅蛋白、紅細胞計數、白細胞計數和白細胞分類與對照組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。

表5 血常規檢查結果

2.2.4 血清生化檢驗結果(見表6)

由表6可見，與對照組比較，雄性高劑量組大鼠血清谷草轉氨酶、雌性低劑量組大鼠血清血糖差異有統計學意義(P<0.05)，但均在本實驗室正常值范圍內。其余各劑量組大鼠的血清谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、尿素、肌酐、血糖、總膽固醇、甘油三酯、總蛋白、白蛋白與對照組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。

表6 血清生化檢驗結果

2.2.5 對大鼠臟體比的影響(見表7)

由表7可見，各劑量組大鼠禁食后體重、臟體比與對照組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。

表7 薏苡仁油對大鼠臟體比的影響

續表7

2.2.6 病理組織學檢查

(1)各劑量組動物大體檢査未發現明顯病變，且生化指標未見異常，因此僅選高劑量組和對照組做組織病理學檢查。

(2)結果描述

肝：正常肝小葉結構存在，個別肝細胞輕度變性腫脹。個別肝細胞胞漿內出現少許細小的脂肪空泡，呈輕度脂變，這種脂變肝細胞范圍小，呈散在小灶分布。肝細胞無壞死改變。個別肝匯管區見淋巴細胞等炎癥細胞浸潤，膽管未見異常，無纖維組織增生。大鼠肝臟病理檢測結果見表8。

表8 大鼠肝臟病理檢測結果

腎：腎皮髓質結構清楚，個別腎小管輕度腫脹及空泡變性，個別腎間質中有灶性炎癥細胞浸潤，個別腎小管內可見管型，少數腎髓質部可見小囊腫。大鼠腎臟病理檢測結果見表9。

表9 大鼠腎臟病理檢測結果

胃和十二指腸：未見異常，黏膜完整，無明顯出血、糜爛、壞死、潰瘍及炎癥細胞浸潤，無明顯腺體增生萎縮改變。

脾：未見異常，脾白髓、紅髓結構清楚，紅髓、白髓無眀顯擴張或萎縮現象。

睪丸：未見異常，曲細精管正常，可見各級生精細胞及成熟精子。

卵巢：未見異常，發育正常，可見各級卵泡和成熟黃體。

總之，在胃、脾、睪丸、卵巢和十二指腸中未發現病理學改變，僅在個別大鼠的肝臟和腎臟中發生病理學改變，各組標本病理變化無明顯差異，因此認為被檢臟器未見與受試物有關的病理學改變。

3 結 論

急性毒性試驗結果提示薏苡仁油軟膠囊內容物按灌胃劑量17.4 g/(kg·d)灌胃小鼠未產生毒性，表明薏苡仁油的最大耐受量大于17.4 g/(kg·d)(相當于成人日推薦量的522倍)，根據急性毒性分級屬無毒級。

薏苡仁油軟膠囊內容物各劑量組給予大鼠喂養30 d，試驗期間，各組動物生長活動正常，各劑量組每周體重、進食量、食物利用率及試驗結束時各劑量組大鼠體重、體重增量、總進食量、總食物利用率、臟體比與對照組比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。雄性高劑量組谷草轉氨酶、雌性低劑量組血糖與對照組比較，差異有統計學意義(P<0.05)，但均在本實驗室正常值范圍內。其余各劑量組大鼠的血清谷丙轉氨酶、谷草轉氨酶、肌酐、尿素、血糖、甘油三酯、總膽固醇、白蛋白、總蛋白、血紅蛋白、紅細胞計數、白細胞計數和白細胞分類與對照組相比差異均無統計學意義(P>0.05)，對受檢臟器做組織病理學檢查，未見特異性病變。因此，可以認為薏苡仁油軟膠囊內容物30 d喂養大鼠，未出現毒性反應，即薏苡仁油軟膠囊無亞急性毒性。