桃膠多糖潤腸通便功能的實驗研究

劉晶 李若蘭 文君

摘 要：本文研究了桃膠多糖對便秘模型小鼠的潤腸通便功能的影響。通過對空白組、模型組和低、中、高3個劑量的昆明種小鼠灌胃給藥14 d后，檢測桃膠多糖對便秘模型小鼠的體質量、小腸推進率、首次排便時間、6 h內排便粒數、糞便總質量及糞便性狀的影響。結果表明，研究發現3個劑量組與模型組比較，各指標間有顯著性差異（P<0.05），表明桃膠多糖能明顯提高便秘模型小鼠的小腸墨汁推進率，縮短首次排黑便時間，增加6 h內排黑便粒數、質量及提高糞便含水量。桃膠多糖對便秘模型小鼠具有良好的潤腸通便作用。

關鍵詞：桃膠;多糖;便秘;潤腸通便

Abstract：The effect of peach gum polysaccharide on the bowel function of constipation model mice was studied. The effects of peach gum polysaccharide on the body weight， intestinal propulsion rate， first defecation time， number of defecation particles in 6 hours， total fecal mass and fecal properties of mice with constipation were detected after 14 days of gavage administration in blank group， model group and low， medium and high dose Kunming mice. The results showed that there were significant differences between the three dose groups and the model group （P<0.05）. The results showed that the peach gum polysaccharide could significantly improve the small intestine ink propulsion rate， shorten the first time of black stool excretion， increase the number and quality of black stool in 6 h， and increase the fecal water content. Conclusion： peach gum polysaccharide has a good effect of moistening and defecating on constipation model mice.

Key words：Peach gum; Polysaccharide; Constipation; Moistening and defecating

中圖分類號：R285.5

便秘是由多種原因引起的常見多發類疾病，會給人們身體和精神造成痛苦。隨著現代生活方式的改變，便秘的人群越來越多，且有逐年上升的趨勢。全世界便秘平均發病率16%，而我國發病率20%～30%，成為近年來常見疾病研究的熱點[1-2]。目前，防治便秘的產品主要以藥物、中草藥、膳食纖維和多糖類物質為主。但藥物和某些潤腸通便中草藥往往存在容易破壞腸道微生態環境，產生藥物依賴癥等副作用，不適合長期食用。合理調整飲食結構，攝入足量膳食纖維和多糖類物質是緩解和預防便秘的重要措施之一。

桃膠為桃或山桃等薔薇科植物樹干受機械損傷或致病后分泌的膠質物質[3]。桃膠產量高，一棵成年桃樹年產桃膠可達300～1 200 g，每667 m2果園年產桃膠25～55 kg[4]。桃膠由多糖及其衍生物、少量蛋白質及雜質組成，具有通便、降血糖、調節腸道微生物等生理活性[5]。丁婷在研究桃膠藥理學作用的實驗中證實桃膠具有一定的潤腸通便的功能[6]。夏毅偉的研究結果表明桃膠多糖具有降血糖的作用[7]。

本文以便秘小鼠為模型研究桃膠多糖的潤腸通便功能，為進一步揭示桃膠多糖的功效及應用提供理論和試驗依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

實驗小鼠：SPF級健康昆明種小鼠，雌雄各半，8周齡左右，體質量23～28 g，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司;桃膠，湖南省郴州市臨武舜珠紅心桃農業合作社，含水率5.6%;復方地芬諾酯，哈爾濱制藥總廠;墨汁，北京一得閣墨業有限責任公司;L-鼠李糖（Rha）、L-阿拉伯糖（Ara）、D-甘露糖（Man）、D-葡萄糖醛酸（Glu-UA）、D-葡萄糖（Glu）、D-半乳糖（Gal）、D-木糖（Xyl）購自德國Dr.Ehrenstorfer公司;所用試劑均為分析純。

1.2 儀器設備

GCMS ISQ LT氣相色譜質譜儀，美國Thermo Fisher Scientific公司;Epoch酶標儀，美國BioTek公司;FW80高速萬能粉碎機（天津市泰斯特儀器有限公司）;VFD-4500型冷凍干燥機，北京博醫康實驗儀器有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 桃膠多糖的提取

參考夏毅偉和蔡延渠的方法，稍有改進[7-8]。桃膠（水蜜桃）去雜物后粉碎過80目篩，然后按料液比1∶50加入純凈水浸泡過夜，接著加熱至80 ℃提取6 h，120目濾布過濾，除去不可溶的雜質。將收集的濾液減壓濃縮至體積約為原來的1/3，加入90%的乙醇靜置過夜，8 000 r·min-1離心20 min，得沉淀，然后采用Sevage法脫蛋白，獲得桃膠多糖。

1.3.2 桃膠多糖中單糖組成分析

稱取20 mg桃膠多糖，加入2 mL濃度為2 mol·L-1的H2SO4溶液，抽真空封管，110 ℃水解8 h。水解液以固體BaCO3中和，過濾去除沉淀，再用去離子水洗滌2次，合并濾液，真空干燥至無水。加入10 mg鹽酸羥胺和0.5 mL吡啶，置于90℃水浴中反應30 min取出，冷卻至室溫，再加入0.5 mL乙酸酐，在90 ℃條件下繼續反應30 min，進行乙?；?，反應物進行色譜分析。通過比較標準單糖和樣品的保留時間，確定樣品中的單糖種類，再根據峰面積計算單糖的摩爾比。

1.3.3 動物分組及給藥

將購買的80只健康昆明種小白鼠，隨機分成5組（空白對照組、模型對照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組），每組16只，雌雄各半。小鼠適應性喂養3～5 d后，空白對照組（CK）灌胃無菌生理鹽水，模型對照組和高、中、低實驗組給予10 mg·kg-1復方地芬諾酯以建立小鼠便秘模型。

便秘模型成功后，空白組和模型組均灌胃蒸餾水1.5 g/kg.d，3個給實驗組小鼠分別灌胃0.5、1.5、2.5 g/kg.d的低、中和高劑量的桃膠多糖。所有試驗小鼠均自由飲食。

1.3.4 小鼠小腸推進實驗

灌胃給予桃膠多糖14 d后，5組小鼠禁食不禁水20 h。模型對照組和桃膠多糖3個劑量組灌胃復方地芬諾酯（10 mg·kg-1），空白對照組灌胃等量的蒸餾水。30 min后，模型對照組和桃膠多糖3個劑量組灌胃含相應受試物的墨汁，空白對照組灌胃等量的墨汁。

25 min后立即脫頸椎處死動物，打開腹腔分離腸系膜，剪取上端自幽門、下端至回盲部的腸管，置于托盤上，輕輕將小腸拉成直線，測量腸管長度為小腸總長度，從幽門至墨汁前沿為墨汁推進長度。按下式計算墨汁推進率：

墨汁推進率（%）=墨汁推進長度（cm）/小腸總長度（cm）×100

1.3.5 小鼠排便試驗

按照小鼠小腸推進試驗中描述的方法灌胃，各組小鼠在灌胃墨汁后，正常飲食進水。記錄每只小鼠首次排出黑便的時間、6 h內排出黑便的粒數及質量，測定糞便含水量，同時觀察糞便的狀態。

1.4 數據統計與處理

所有試驗均重復3次，數據以平均值±標準偏差表示。采用Origin 2018軟件對數據作圖，SPSS 25軟件對數據進行顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 桃膠多糖的單糖組成

桃膠多糖中各種單糖的百分含量見圖1所示。桃膠多糖主要由阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、木糖、甘露糖和葡萄糖等7種單糖組成，其中以阿拉伯糖、半乳糖和木糖為主。這與丁成麗測定的桃膠多糖成分組合和含量基本接近[9]。

2.2 桃膠多糖對小鼠體質量的影響

灌胃給予桃膠多糖14 d，各組小鼠在試驗過程中均能正常飲食和活動，桃膠多糖對小鼠體質量的影響見表1。從表中可以看出，同組試驗小鼠灌胃14 d前后的體質量均呈現出極顯著增加（P<0.01），但灌胃14 d不同組別實驗小鼠之間體質量無顯著差異（P>0.05）。無論是小腸推進實驗，還是排便實驗，各組小鼠均正常生長發育，體重均在增加，但各組間并無顯著差異，為后續小鼠實驗提供前提保證。

2.3 桃膠多糖對便秘小鼠小腸蠕動的影響

不同劑量桃膠多糖對小鼠小腸墨汁推進率的影響見表2。從表2可以看出，各組間試驗小鼠的小腸總長度沒有顯著性差異（P>0.05）。與空白對照組相比，模型對照組的小腸墨汁推進長度和推進率極顯著減?。≒<0.01），表明小鼠小腸正常蠕動抑制模型建立成功。與模型對照組相比，高、中、低劑量組的小腸墨汁推進長度和推進率都得到了極顯著提高（P<0.01），因此，桃膠多糖對腸道蠕動抑制模型的小腸運動具有促進作用。

2.4 桃膠多糖對小鼠排便的影響

桃膠多糖對小鼠糞便性狀的影響結果見表3。從表3可知，與空白對照組相比，模型對照組的糞便含水量顯著減少（P<0.01），表明造模成功。與模型對照組相比，桃膠多糖各劑量組的糞便含水量顯著增加（P<0.01）。

在試驗過程中，3個劑量組小鼠的糞便基本上呈現出正常橢圓形粒狀糞便，各劑量組桃膠多糖未出現導致小鼠腹瀉的現象。便秘模型對照組小鼠排便困難，糞便形狀半球形，很多糞便顆粒成串狀連接。造模成功的3個劑量組在灌胃桃膠多糖后，小鼠排便狀態趨于正常，且糞便明顯變濕變軟，含水量明顯升高，形狀亦趨于正常，其中高劑量組的效果最明顯，糞便含水量接近空白對照組。這與Upendarrao和Kim的研究結論相類似[10-11]。

桃膠多糖對小鼠排便的影響結果見表4。從表4可以看出，模型對照組的首便時間顯著長于空白對照組（P<0.01），6 h排便數量和6 h的糞便重量均顯著小于空白對照組，表明便秘模型小鼠建立成功。

與模型對照組相比，3個劑量實驗組的首次排出黑便時間顯著減少（P<0.01），6 h排便數量和糞便重量顯著增加（P<0.01）。這表明桃膠多糖能對便秘模型小鼠產生促進排便的作用，并且能使首次排便時間減少，排便次數及排便量增多。產生這種結果的原因可能是桃膠多糖中含有一定量的低聚糖，或者在體內代謝過程中產生了類似物質，如圖1中表達的含有阿拉伯糖、半乳糖、木糖等7種糖類物質。桃膠多糖和低聚糖不能被小腸消化吸收從而到達大腸，在大腸中能夠被微生物利用分解產生短鏈脂肪酸，從而刺激腸道蠕動，從而加快小鼠排出糞便，緩解便秘癥狀。

3 結論

我國桃樹種植面積廣，桃膠資源非常豐富。灌胃桃膠多糖后，對復方地芬諾酯構建的便秘模型小鼠的正常生長發育沒有不良影響，小鼠均正常生長。灌胃桃膠多糖后，對便秘模型小鼠的小腸運動產生顯著的促進作用，能顯著提高墨汁推進率，同時能夠縮短首便時間，增加糞便粒數、重量和含水量。這說明桃膠多糖確實具有增加腸胃蠕動和潤腸通便的功能。桃膠是桃樹的重要副產物，提高桃膠的使用價值可以相應增加果農的收入。

參考文獻：

[1]鄭倩，徐華.便秘動物模型的研究進展[J].臨床消化病雜志，2012，24（3）：189-191.

[2]費改順，賈正平，孟慶常，等.潤腸通便顆粒對小鼠便秘及腸推進作用的實驗研究[J].解放軍藥學學報，2010，26（1）：37-38，41.

[3]馮紀南，李安平，周玉杰，等.商品桃膠溶液的流變學特性研究[J].食品科技，2016，41（5）：44-47.

[4]王立新，王森，郜愛玲.扁桃膠組分和多糖結構的研究[J].中國農業科學，2010，43（19）：4081-4087.

[5]徐燕，朱科學，錢海峰，等.桃膠多糖的提取分離及組成性質研究[J].食品工業科技，2008（1）：66-68，71.

[6]丁婷.桃膠藥理學作用的實驗研究[D].廣州：南方醫科大學，2010.

[7]夏毅偉.桃膠多糖降血糖機制研究[D].廣州：南方醫科大學，2013.

[8]蔡延渠，董碧蓮，王曉佳，等.響應面法優化桃膠多糖堿水提取工藝及抗氧化活性研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2019，30（12）：1516-1522.

[9]丁成麗，劉力，王強.柱前衍生高效液相色譜法分析新疆桃膠的多糖組成[J].分析科學學報，2012，28（3）：319-322.

[10]Upendarrao G，Praveen K G，Solomon S B.Evaluation of diuretic and laxative activity ofhydro-alcoholic extract of Desmostachya bipinnata （L.） Stapfin rats[J].Journal of Integrative Medicine，2014，12（4）：372-378.

[11]Kim J H，Nam S H，Rico C W，et al.A comparative study on the antioxidative and antiallergic activities of fresh and aged black garlic extracts[J].International Journal of Food Science & Technology，2012，47（6）：1176-1182.