GC-ECD-MS法檢測刺五加、板藍根中有機氯農藥殘留量

陳 祺，王梓煊，田國新，趙寒雪，繆文麗

(哈爾濱商業大學 藥學院，哈爾濱 150076)

刺五加，多年生木本植物，具鎮靜安神，補益脾氣之功[1-2]；板藍根，草本植物，具解毒辟疫、涼血消腫之功[3-4].二者均為東北道地藥材，具有悠久的歷史，廣闊的應用前景.有機氯農藥作為殺蟲劑，對多種蟲害均有顯著作用，曾普遍應用于中藥材種植，雖然已經明令禁止使用，但是因為半衰期長、難分解，殘留物仍可通過食物鏈傳遞至人體[5-6]，極易引起“三致效應”和遺傳毒性[7-8].因此，有必要對有機氯農藥在中藥材中的殘留量進行檢測.本實驗通過超聲提取、氣相色譜-電子捕獲-質譜檢測法對刺五加、板藍根中殘留有機氯農藥進行測定，以期為研究更快速、高效、安全的中藥有機氯農藥殘留檢測方法提供科學依據.

1 實驗儀器及材料

1.1 實驗儀器

質譜檢測器(MSD，美國Agilent)；鼓風干燥箱(DHG-9140A型電熱恒溫)；多用真空泵(SHB-Ⅲ型循環水式)；氣相色譜儀(6890N，美國Agilent).

1.2 實驗藥品與試劑

色譜純：正己烷；優級純：濃硫酸；分析純：無水硫酸鈉、丙酮、二氯甲烷、正己烷和氯化鈉.

標準品：六氯苯、γ-六六六、七氯、艾氏劑、p’,p-DDT質量濃度均為100 μg/mL、反式氯丹質量濃度為20 μg/mL，以上標準品購于國家標準物質研究中心.

藥材：刺五加、板藍根鮮藥材均購自東北種植基地.

2 實驗方法與結果

2.1 對照品儲備液制備

將6種標準品原液分別取1 mL，置于10 mL容量瓶中，用正己烷定容，得10 μg/mL對照品儲備液.

2.2 供試品溶液制備

取2.0 g供試粉末與10 g無水硫酸鈉于250 mL量瓶，取丙酮-二氯甲烷1∶1混合，60 mL浸泡12 h，超聲提取20 min.靜置過濾，固相加30 mL丙酮，反復操作3次，歸并濾液.在40 ℃水浴條件下，使易揮發組分分離，至近干，滴入5 mL正己烷，多次進行如上操作，到最終除凈萃取劑.加正己烷定容至5 mL.滴加優級純(濃硫酸)約1 mL，振搖1 min，3 000 r/min，離心10 min.將上層清液移出，即得.

2.3 色譜條件選擇

進樣口溫度：290 ℃；升溫程序：最初溫度維持1 min，然后以10 ℃/min的速度由100 ℃升至200 ℃，保持2 min，再以8 ℃/min的速度升至280 ℃，維持同等時間；檢測器：300 ℃；載氣：氮氣(高純度)，1.5 mL/min；外標法定量；采用不分流的方式進樣1.0 μL.上述混合對照品色譜圖如圖1所示.

1-六氯苯; 2-γ-六六六; 3-七氯;4-艾氏劑;5-反式氯丹; 6-p′,p-DDT

2.4 質譜條件

EI電離源液質；以70 eV作為電子的能量；以0.2 mA作為發射的電流；以350 V作為光電倍增器電壓；以200 ℃作為離子源溫度；以285 ℃作為接口溫度；以1sec/scan作為掃描的速度；掃描的質量處于50～450 amu之間；溶劑延遲的時間為4 min.

2.5 建立標準曲線

取對照品混合液，用正己烷稀釋至5個不同的質量濃度(六氯苯、七氯、反式氯丹、p′,p-DDT：5、50、100、200、1 000 μg/mL；γ-六六六、艾氏劑：5、50、100、200、250 μg/mL)，依“2.3”分析，進樣量：1.0 μL，把得到的峰面積值與已知物質的質量濃度進行線性回歸，相關系數r>0.993,符合線性關系.

2.6 重現性實驗

取供試品5份，2.0 g/份，制得供試品溶液，按“2.3”測定，檢測出刺五加中六氯苯、七氯、p′,p-DDT的RSD值分別為1.1%、3.8%、2.1%，其他三種均未檢測出；板藍根中七氯、p′,p-DDT的RSD值分別為0.3%、2.0%，其他四種均未檢測出.

2.7 精密度實驗

取已知質量濃度對照品的混合溶液，于1日內分別不間斷進5次樣品，按“2.3”測定，檢測出六氯苯、γ-六六六、七氯、艾氏劑、反式氯丹、p′,p-DDT的RSD值分別為0.51%、0.55%、0.57%、1.3%、0.86%、1.4%.該方法的精密度良好.

2.8 回收率試驗

取供試品9份，2.0 g/份，按3個標準(15、30、60 μg/kg)添加已知質量濃度混合對照品溶液，平行樣品3份，制作的供試品溶液，按“2.3”測定，考察回收率，回收率>90%，1.7%

2.9 樣品測定

取等量供試品3份，制供試品溶液，按“2.3”測定，1 μg /mL的對照品混合液作隨機對照，進樣量1.0 μL，平行3次，取均值.外標法確定含量，得供試品中農藥的殘留含量，結果如下.見圖2、3，表1、2.

1-六氯苯;2-七氯；3-p′,p-DDT

1-七氯；2-p′,p-DDT2

表1 刺五加樣品質譜檢測報告

表2 板藍根樣品質譜報告

3 討 論

提取是農殘分析的重要步驟.目前，國內外主要采用加速溶劑萃取(ASE)、固相萃取(SPE)、微波輔助萃取(MAE)、分散液液微萃取(DLLME)等技術對樣品進行前處理[9-12].本實驗采用超聲波提取法，與其他方法相比具有穩定性好、操作簡單、提取效率高且清潔的特點.文獻報道[13]超聲提取氣相色譜測定，正己烷提取有機氯農藥的方法，加標回收率可達72.2%～125.3%之間.對于檢測方法，氣相色譜法與其他方法相比，具有高度的敏感性、高度的準確性.本實驗通過氣相色譜-電子捕獲(ECD)-質譜(MS)聯用的檢測手段，經過方法學考察，所測物質的加標回收率大于90%，回收率RSD均小于10%，六氯苯、七氯、反式氯丹及p′,p-DDT在5～1 000 μg/L呈線性關系；γ-六六六和艾氏劑在5～250 μg/L呈線性關系.儀器精密度RSD在0.51%～1.4%之間，滿足實驗要求.實驗檢測出刺五加中含的六氯苯量為610.73 μg/kg、p′,p-DDT 290.96 μg/kg、七氯80.32 μg/kg；板藍根中含的七氯量為431.38 μg/kg、p′,p-DDT 50.86 μg/kg.據2020年版中國藥典[14-15]農藥殘留限量標準：DDT0.1 mg/kg,六六六0.1 mg/kg, 艾氏劑0.05 mg/kg.表明本實驗刺五加DDT殘留量超標，其他有機氯農藥還需進一步完善標準.

4 結 語

由上述分析可知氣相色譜-電子捕獲(ECD)-質譜(MS)聯用(GC-ECD-MS)的檢測方法具有簡單、速率高、分離效率好、靈敏度較高及分析結果可靠的特點，該方法檢測出刺五加中六氯苯殘留量610.73 μg/kg、DDT 320.15 μg/kg、七氯80.32 μg/kg；板藍根中七氯殘留量431.38 μg/kg、DDT50.86 μg/kg，故這兩種藥材受到有機氯農藥的污染，且刺五加中DDT的污染水平超過2020年版中國藥典對農藥殘留限量的標準.