三種替抗產品對肉雛雞生長性能和免疫功能的影響

陳璟怡 孫弟芬 徐 丹 任少均 肖祥金 舒 剛*

（1.四川農業大學動物醫學院，四川成都611130；2.四川慶琳農業技術開發有限公司，四川內江641000）

臨床常用抗生素，是指由微生物培養液中提取物以及用化學方法合成或半合成得到的化合物。大量抗生素被作為添加劑廣泛應用于畜、禽、水產動物飼料，其顯著促進動物生長性能、提高飼料轉換效率、疾病控制與治療的積極作用等，為養殖業發展做出了重要貢獻[1-2]，但長期使用抗生素也帶來藥物殘留、耐藥菌產生、動物免疫功能下降等危害，甚至影響公共健康安全、威脅人類身體健康。2020年是我國邁向無抗養殖時代的關鍵時期，據農業農村部第194 號公告，按照《遏制細菌耐藥國家行動計劃（2016—2020 年）》和《全國遏制動物源細菌耐藥行動計劃（2017—2020年）》部署，將全面停止生產、進口、經營、使用促生長藥物飼料添加劑（中草藥類除外），抗生素的替代品研究逐漸成為熱點。

隨著禁抗進程深入，市場對安全、高效的飼用替抗產品需求度激增。自2006 年歐盟提出飼料禁抗后積累的飼用替抗經驗、飼用植物及其提取物是很重要的飼用替抗產品和技術來源[3]。本試驗所使用的甘草提取物、藿香正氣散，各成分均具有抗菌促生長、提高免疫性能的作用；同時，益生菌作為一種微生態制劑，能夠平衡動物腸道菌群并分泌活性物質提高機體免疫力，作為抗生素可能的替代物，益生菌也得到了廣泛的研究[2]，常用的枯草桿菌與地衣芽孢桿菌，能夠產生有利于動物消化吸收的酶來促進動物機體生長和保護機體的健康。因此為進一步闡明甘草提取物、益生菌及藿香正氣散提取物這三種替抗產品促進生長性能和免疫功能效果，試驗考察基礎日糧中添加替抗產品對肉雛雞生長性能和免疫功能的影響，以期為臨床合理運用提供科學依據。

1 材料

1.1 試驗動物

1 日齡健康科寶肉雞400 只，由成都林海禽業有限公司提供。

1.2 主要藥品

甘草提取物干粉（1∶20提?。?、益生菌組（干酪乳桿菌K1 含量為1.0×108CFU/g、枯草芽孢桿菌JS01 含量為1.0×108CFU/g）、藿香正氣散提取物（由藿香、白芷等中藥按1∶20提?。┯伤拇ㄓ乐Z生物科技有限公司提供。

1.3 主要疫苗和試劑

新支二聯疫苗（生產批號：20625），新流滅活疫苗(生產批號：200513），雞新城疫血凝抑制試驗抗原、陰性血清和陽性血清，禽流感病毒H9亞型血凝抑制試驗抗原、陰性血清和陽性血清，均由洛陽慧中生物技術有限公司提供。免疫因子白細胞介素-2（IL-2）、干擾素-γ（IFN-γ）檢測試劑盒，購自南京建成生物工程研究所。

1.4 主要儀器

電子天平、高速冷凍離心機，均購自美國Thermo Fisher 公司；多功能酶標儀，購自美國Varioskan Flash公司；恒溫培養箱，購自上海赫田科學儀器有限公司。

2 方法

2.1 試驗設計

將1 日齡健康科寶肉雞400 只隨機分成4 組，每組4 個重復，每個重復25 只。對照組飼喂基礎日糧；甘草提取物組在基礎日糧中添加0.1%甘草提取物；益生菌組在基礎日糧中添加0.1%的益生菌；藿香正氣散組在基礎日糧中添加0.1%的藿香正氣散提取物。試驗從雛雞1 日齡開始，觀察7 d 后開始添加以上產品，試驗期為28 d?；A日糧組成及營養水平見表1。

2.2 飼養管理

飼養方式采用三層重疊式籠養，雛雞自由采食和飲水。室內溫度為：1～3 日齡35～34 ℃；4～7 日齡34～32 ℃；8～14 日齡30～29 ℃；以后室內保持恒溫（28～25 ℃），每天清除糞便。

免疫程序如下：6日齡，用新支二聯苗二倍量對雛雞滴鼻點眼，用新流(H9N2)二聯滅活疫苗0.3 mL/只頸部皮下注射。

2.3 觀察指標

2.3.1 生長性能測定

表1 基礎日糧組成及營養水平

每天觀察、記錄各組雛雞的日?；顒?、飲水、采食等基本情況，記錄各組雛雞的死亡情況；在試驗第14、28 d 稱量雛雞體重。按照公式：平均日增重(g)=總增重(g)/(試驗天數×只數)，平均日采食量(g)=總采食量(g)/(試驗天數×只數) ，料重比=總采食量(g)/總增重(g)，計算平均日增重、平均日采食量，并計算料重比。

2.3.2 器官指數測定

于試驗結束時，每組每個重復隨機選取2 只雞，解剖并摘取主要實質器官，剝離周圍脂肪，用濾紙吸干水分后稱重并計算器官指數，按照公式計算胸肌率、腿肌率、腹脂率。

器官指數（g/kg）=器官重（g）/體重（kg）

全凈膛率(%)=(全凈膛重/活重)×100

胸肌率(%)=(胸肌重/全凈膛重)×100

腿肌率(%)=(大小腿凈肌肉重/全凈膛重)×100

腹脂率(%)=(腹脂重/全凈膛重)×100

2.3.3 抗體和免疫因子檢測

參考《新城疫診斷技術規范》(GB 16550—1996)、《高致病性禽流感診斷技術方法》(GB /T 18936—2003)進行新城疫和禽流感（H9N2 型）抗體效價的檢測。細胞因子IL-2、IFN-γ按照說明書進行檢測。

2.4 數據的統計分析

試驗數據利用SPSS 19.0 單因素方差分析(One-Way ANOVA)，用Duncan's 法多重檢驗分析組間差異顯著性，數據以“平均值±標準差”表示，P＜0.05作為差異顯著性判斷標準。

3 結果與分析

3.1 日常觀察

試驗過程中雛雞精神活躍，日常飲水、采食正常，生長良好，未發生傳染性疾病。

3.2 替抗產品對雛雞各階段生長性能的影響（見表2）

表2 替抗產品對雛雞生長性能的影響

由表2 可知，各試驗組在平均日采食量差異不顯著（P＞0.05）的情況下末重、平均日增重顯著提高（P＜0.05），說明3 種替抗產品對肉雛雞的生長性能影響顯著。且益生菌組、藿香正氣散組相比于對照組，料重比顯著降低（P＜0.05），其飼料報酬明顯提高。

3.3 替抗產品對雛雞主要實質器官指數的影響（見表3）

由表3可知，三種替抗產品對雛雞的主要實質器官指數并無顯著影響（P＞0.05）。

3.4 替抗產品對雛雞屠宰指標的影響（見表4）

表3 替抗產品對雛雞主要實質器官指數的影響（g/kg）

表4 替抗產品對雛雞部分屠宰指標的影響

由表4 可知，各組胴體重與對照組比較，各試驗組顯著高于對照組（P＜0.05）；各組全凈膛率與對照組比較，益生菌組、藿香正氣散組顯著高于對照組（P＜0.05），甘草提取物組與對照組差異不顯著（P＞0.05）；益生菌組、藿香正氣散組的胸肌率、腿肌率顯著高于對照組（P＜0.05）；甘草提取物組腹脂率與對照組差異不明顯（P＞0.05），益生菌組、藿香正氣散組顯著降低（P＜0.05）。

3.5 替抗產品對雛雞免疫器官指數、血清抗體效價和免疫因子的影響（見表5和表6）

表5 替抗產品對雛雞免疫器官指數的影響(g/kg)

表6 替抗產品對雛雞血清抗體效價和免疫因子水平影響（第28 d）

由表5可知，與對照組相比，胸腺指數甘草提取物組、藿香正氣散組顯著提高（P＜0.05），益生菌組影響不顯著（P＞0.05）；脾臟指數益生菌組、藿香正氣散組顯著提高（P＜0.05），甘草提取物組影響不顯著（P＞0.05），其中藿香正氣散組提高最明顯；對于法氏囊指數，除益生菌組無顯著差異（P＞0.05），甘草提取物組、藿香正氣散組均有顯著提高（P＜0.05）。胸腺、脾臟和法氏囊是肉雞最重要的三種免疫器官，其指數是可粗略估計免疫功能強弱和優質肉雞健康發育程度的重要指標[4]。

由表6可知，第28 d，與對照組相比，對于新城疫（ND）抗體效價指標，試驗組均有顯著提升（P＜0.05）；對于H9N2抗體效價，甘草提取物組、藿香正氣散組提升顯著（P＜0.05），益生菌組無明顯提升（P＞0.05）；對于IL-2 水平，試驗組均有顯著提高（P＜0.05）；對于IFN-γ水平，試驗組也都有顯著提高（P＜0.05）。

4 討論

4.1 替抗產品對雛雞生長性能的影響

雛雞在育雛階段生長性能良好將提高后期經濟效益，目前在雛雞階段常用金霉素、脫霉劑等來提高生長性能，但長期使用容易產生耐藥性和藥物的殘留，威脅人類健康[5-7]。據研究表明甘草具有增強機體免疫調節以及抗氧化等作用[8]，甘草的活性成分主要為三萜皂苷(由甘草酸、甘草次酸組成)、甘草多糖和黃酮。張曉靜等[9]研究表明，甘草可促進肉雞消化吸收營養物質的能力，提高其生長性能，發酵黃芪-甘草水提物可顯著提高肉雞平均日增重?？莶菅挎邨U菌、地衣芽孢桿菌是當前廣泛使用的益生菌，它們能夠產生有助于動物消化吸收的酶來促進動物機體生長和保護機體的健康，作為飼料替抗添加物在動物生產中具有重要意義。陸俊賢等[10]研究表明，在飼糧中添加枯草芽孢桿菌能明顯提高肉雞的平均日增重和飼料轉化效率。孫全友等[11]研究表明添加地衣芽孢桿菌可使肉雞生長性能明顯提高，且增加了肉雞胸肌持水性, 提高嫩度；目前關于甘草、藿香正氣散加入飼料作為替抗產品的研究還較少。本試驗在基礎日糧中加入0.1%甘草提取物、0.1%的益生菌和0.1%的藿香正氣散，雛雞生長各階段平均日增重、料重比、成活率都優于對照組。

4.2 替抗產品對雛雞實質器官器官指數和屠宰性能的影響

屠宰性能反映畜禽產肉性能，不僅可以直觀地看到家禽的產肉能力，還可以作為重要的指標衡量經濟性狀。文獻表明我國地方優質肉用雞的標準屠宰率為80%以上，標準全凈膛率為60%以上[12]，本試驗中，4組的全凈膛率均達到標準，益生菌組、藿香正氣散組使全凈膛率有明顯提高，但甘草提取物組無明顯影響；同樣的益生菌組、藿香正氣散組讓產肉性能明顯提高，其中藿香正氣散組胸肌率、腿肌率最高，甘草提取物組無明顯影響；益生菌組、藿香正氣散組的腹脂率顯著降低。三種替抗產品對雛雞的主要實質器官指數都無不良的影響。

4.3 替抗產品對雛雞免疫器官、血清抗體效價和免疫因子的影響

在考察家禽免疫狀態時，可以用胸腺、脾臟及法氏囊指數來評價雞的免疫狀態[13]。胸腺、法氏囊和脾臟是禽類重要的免疫器官, 胸腺作為中樞器官反映細胞免疫指標，脾臟是禽類最大的外周免疫器官，法氏囊則是禽類特有的體液免疫器官, 脾臟會參與整個機體的細胞免疫和體液免疫。胸腺和脾臟免疫器官的發育狀態及機能強弱，直接決定著禽類全身的免疫水平[14]。這些免疫器官在正常范圍內增大說明功能增強，對維持機體的體液免疫功能有重要意義[15]。張瑞等[16]證明甘草殘渣能促進番鴨免疫器官的生長；黃文清[17]研究表明，甘草顆?？娠@著提高胸腺、脾臟和法氏囊的指數；馬璐等[18]證明日糧中添加甘草多糖可以促進肉雞免疫器官的發育，這可能與甘草多糖通過增強T 淋巴細胞表達、分泌和刺激細胞增殖，顯示出對免疫器官的免疫調節作用有關；林顯華等[19]證明芽孢桿菌能夠增強肉雞的免疫功能。目前有關藿香、白芷對免疫器官影響的報道較少。本試驗對肉雛雞使用替抗產品后，觀察免疫器官的生長發育情況，對于胸腺指數，甘草提取物組、藿香正氣散組明顯提高，益生菌組無明顯影響；脾臟指數，益生菌組、藿香正氣散提明顯提高，其中藿香正氣散提取物組提高最明顯，甘草提取物組無明顯影響；對于法氏囊指數，甘草提取物組、藿香正氣散組明顯提高，益生菌組無明顯影響。免疫器官重量的增加表明機體生長發育快，器官指數提高則意味著免疫系統成熟較快[20]，說明使用這三種替抗產品可促進肉雛雞免疫器官生長發育、迅速成熟，肉雛雞整體的免疫機能得到加強，使其抵抗病原微生物感染和各種應激的能力得到提高。

機體接受抗原產生抗體效價的高低就能體現雞特異性體液免疫功能的高低。甘草多糖通過增強雛雞的體液免疫功能，顯著提高抗體水平，輔助疫苗提高抗體效價，試驗表明甘草多糖能夠提高新城疫疫苗的抗體水平[18]；推測甘草粗提物主要通過提高機體免疫力，從而抑制受病毒侵染的胸腺、脾臟萎縮病變，而間接起到抵抗病毒的作用[21]，與本次試驗結果一致。藿香正氣散對禽流感[22]、新城疫[23]均具有一定的抵抗作用，因藿香的主要成分黃酮類化合物具有抑制病毒生長增殖的作用，同樣與本次試驗中藿香正氣散組對血清效價有較大提高的結果一致。芽孢桿菌已在多項試驗中被證實會促新城疫的抗體效價顯著提高，與本次試驗結果一致，而結果中益生菌制劑對禽流感抗體效價無明顯影響的結果與盧龍娣[24]的研究結果一致。

細胞因子包括了白細胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子超家族、集落刺激因子等。而白細胞介素是動物機體內一類重要的細胞因子，在機體的免疫應答過程中發揮著重要作用[25]。IL-2 和TNF-γ屬于Th1 細胞，其中IL-2 是機體免疫調節的核心物質，具有增強細胞免疫的作用；IFN-γ在機體體液免疫和細胞免疫中發揮重要作用，可以抑制炎癥反應的發生，提高機體的免疫機能[26]。

很多植物多糖都能促進細胞因子分泌從而提高機體的免疫功能。甘草提取物中的甘草多糖可作用于IFN-γ分泌細胞，促使細胞分泌IFN-γ增多或活性增強，或增強T細胞、B細胞、NK細胞和單核巨噬細胞對IFN-γ的合成、分泌與活性，進而通過IFN-γ發揮其增強免疫的作用，將機體免疫水平上調，推測是甘草多糖調節免疫系統的有效途徑[27-28]。藿香正氣散對免疫因子的調節機制暫無報道，從本試驗看，其對IL-2水平以及IFN-γ水平均呈現顯著提高。據研究表明益生芽孢桿菌能夠參與調節吞噬功能的一系列非特異性免疫細胞的活性和細胞因子的分泌，促進干擾素、補體成分等細胞因子的生成,從而增強機體的非特異性免疫機能[29]。Lee 等[30]發現在飼料中添加枯草芽孢桿菌能顯著提高肉雞的IL-1、IL-12 和IFN-γ水平，與本試驗結果一致。說明三種替抗產品均能促進IL-2、INF-γ分泌增加而提高雛雞的抗病能力，從而達到較高成活率。

5 結論

本試驗通過在對肉雛雞的基礎日糧中添加三種不同類型的替抗產品，結果顯示0.1%甘草提取物、0.1%的益生菌、0.1%的藿香正氣散，都可以提高肉雛雞生長性能，同時提高免疫器官指數和ND、H9N2 疫苗的抗體效價，促進IL-2 和INF-γ的分泌，可以在肉雞生產中進行推廣使用。