噁唑酰草胺及其代謝物在水稻上的殘留檢測方法和儲藏穩定性研究

楊 靜，牛 艷，吳 燕，趙子丹，劉 霞，茍春林

（寧夏農產品質量標準與檢測技術研究所，寧夏 銀川 750002）

噁唑酰草胺為韓國化工技術研究院開發的新型芳氧苯氧丙酸酯類除草劑[1-3]，可極好地防除大多數一年生禾本科雜草，它的作用機理是通過抑制乙酰輔酶A羧化酶而發揮除草作用[4-6]。與大多數此類除草劑不同，噁唑酰草胺對水稻安全，是一種高效、低毒、環境友好、可廣泛使用的新型除草劑[7-11]。

目前，噁唑酰草胺的殘留檢測方法主要有高效液相色譜法、液相色譜質譜法等。張月[12]采用液相色譜質譜法測定水稻和水田中噁唑酰草胺殘留，但該方法只測定噁唑酰草胺的殘留量，未測定其代謝物的殘留情況。Barik等[13]測定了噁唑酰草胺及其代謝物N-（2-氟苯基）-2-羥基-N-甲基丙酰胺（HFMPA）在稻田生態系統中的持久性行為，但代謝物只測定了HFMPA。豆葉枝等[14]采用分散萃取-液相色譜質譜法測定了水稻和環境介質中的噁唑酰草胺及其代謝物，但儀器方法復雜，代謝物6-氯-2-苯噁唑啉酮（6-CBO）需與噁唑酰草胺及其余代謝物分別檢測。羅傲等[15]建立了水稻中噁唑酰草胺及其代謝物的液相色譜質譜方法，但其色譜圖未完全分離。

本文采用QuEChERS前處理方法，建立了水稻中噁唑酰草胺及其代謝物的超高效液相色譜-三重四極桿串聯質譜法，該方法簡單快捷，準確且靈敏度高?？疾炝藝f唑酰草胺及其代謝物在水稻基質中的穩定性，可為其他農作物中噁唑酰草胺及其代謝物的殘留檢測提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 材料與設備

1.1.1 材料與試劑

99.7 %噁唑酰草胺，天津阿爾塔科技有限公司；99.5%代謝物N-（2-氟苯基）-2-（4-羥基苯氧基）-N-甲基丙酰胺（HPMFPA）、HFMPA、6-CBO標準品，北京博雅開元科技有限公司；乙腈（色譜純），德國默克公司；氯化鈉（140℃烘烤4 h），N-丙基乙二胺（PSA）和C18，上海安譜實驗科技股份有限公司；試驗用水為Milli-Q超純水，美國Millipore公司。

1.1.2 儀器與設備

Ultimate 3000 TSQ Quantum Access液相色譜串聯質譜儀，美國Thermo公司；TDL-40C低速臺式大容量離心機，上海安亭科學儀器廠；THZ-82A水浴恒溫振蕩器，金壇榮華儀器公司；MS3 digital型渦旋混合器，德國IKA公司；PL202-L、XS205型電子天平，瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 標準溶液的配制

標準儲備溶液配制：準確稱取HPMFPA、HFMPA、6-CBO標準品（精確于0.000 1 g）于100 mL容量瓶，用乙腈定容至刻度，搖勻，配制成1 000 mg·L-1的標準儲備液，于-18℃冰箱冷凍保存。

標準工作溶液配制：用乙腈將上述標準儲備溶液配制成濃度為0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg·L-1的系列標準工作溶液。

1.2.2 樣品前處理

準確稱取稻殼、糙米樣品各5.00 g、稻桿2.00 g于50 mL離心管中，加入10.00 mL水浸泡30 min后加入20.0 mL乙腈，振蕩提取40 min，加入5.0 g氯化鈉，振搖約1 min，于4 000 r/min離心3 min。移取上清液1.00 mL于盛有100 mg PSA和50 mg C18的離心管中，渦旋1 min，于4 000 r/min離心5 min，上清液過0.22μm濾膜，待測。

1.2.3 穩定性試驗

稱取糙米和稻殼空白樣品5.00 g，稻桿空白樣品2.00 g于50 mL離心管中，按照0.5 mg·kg-1的添加水平直接在儲藏穩定試驗所需數量的空白樣品中添加噁唑酰草胺及代謝物標準溶液（注：標液為單獨添加），將所有離心管進行密封，放入-18℃冰箱中保存。

1.2.4 儀器條件

1.2.4.1 色譜條件

色譜柱：Symmetry C18（100 mm×2.1 mm,3.5μm）；柱溫：45℃；流動相：乙腈-水；流速：0.4 mL/min；進樣量：2.0μL。洗脫方式為梯度洗脫，洗脫條件見表1。

表1 液動相梯度洗脫條件Table 1 Gradient elution conditions of UPLC

1.2.4.2 質譜條件

離子源：ESI+；噴霧電壓：3.5 kV；鞘氣：30 arb[5]；輔氣：10 arb；毛細管傳輸溫度：300℃；碰撞壓力：0.2 Pa；掃描模式：選擇離子監測（SIM），質譜條件見表2。

表2 質譜條件Table 2 MS parameters

1.2.5 數據處理

試驗數據采用Excel 2007軟件處理。

2 結果與分析

2.1 線性方程和方法定量限

配制0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg·L-1標準混合溶液，在上述確定的檢測條件下進樣，圖1為噁唑酰草胺及其代謝物的色譜圖。以標準溶液濃度為橫坐標，以定量離子對峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。由表3可知，噁唑酰草胺及其代謝物在此濃度范圍內均具有良好的線性關系，相關系數r值均大于0.99，方法定量限為0.01 mg·kg-1。

表3 噁唑酰草胺及其代謝物的標準曲線方程、相關系數和定量限Table 3 Standard curve equation,correlation coefficients and LOQ of metamifop and its metabolites

圖1 0.2 mg·L-1噁唑酰草胺及其代謝物的SIM色譜圖Fig.1 Chromatograms of metamifop and its metabolites（0.2 mg·L-1）

2.2 方法回收率和精密度

分別在糙米、稻殼、稻桿的空白樣品中按照0.01、0.05、0.5 mg·kg-13個質量濃度水平單獨添加噁唑酰草胺及其代謝物的標準溶液，每個濃度5次平行，進行添加回收試驗。由表4可知，在0.01～0.5 mg·kg-1添加水平范圍內，噁唑酰草胺及其代謝物在糙米中添加回收率為75.2%～108.8%，相對標準偏差（RSD）為2.8%～10.3%；在稻殼中添加回收率為70.1%～101.5%，相對標準偏差為1.8%～11.9%；在稻桿中添加回收率為73.4%～103.9%，相對標準偏差為1.8%～9.1%。因此該方法的回收率和精密度均較好，符合農藥殘留分析的要求[16-17]。

表4 噁唑酰草胺及其代謝物在水稻中的添加回收率和相對標準偏差（n=5）Table 4 Recoveries and relative standard deviations of metamifop and its metabolitest in rice(n=5)

2.3 噁唑酰草胺及其代謝物在水稻中的穩定性

由表5可見，分別在0、2、4、8、12、16、20、24、28、32周進行取樣，測得噁唑酰草胺在水稻基質中的降解率為2%～22%；噁唑酰草胺代謝物HFMPA在水稻基質中的降解率為4%～21%；噁唑酰草胺代謝物HPFMPA在水稻基質中的降解率為5%～25%；噁唑酰草胺代謝物6-CBO在水稻基質中的降解率為6%～27%。32周時噁唑酰草胺及其代謝物的降解率均小于30%，表明在儲藏溫度-18℃、儲藏時間為32周的試驗期間，噁唑酰草胺及其代謝物在水稻基質中均比較穩定。

表5 噁唑酰草胺及其代謝物在水稻中的降解率Table 5 The degradation rate of metamifop and its metabolitest in rice 單位：%

續表5 噁唑酰草胺及其代謝物在水稻中的降解率Continue table 5 The degradation rate of metamifop and its metabolitest in rice 單位：%

3 結論

本文建立了噁唑酰草胺及其代謝物在水稻上的超高效液相色譜-三重四極桿串聯質譜檢測方法，采用QuEChERS方法提取、凈化，前處理簡單快速，且噁唑酰草胺及其代謝物在水稻中的回收率70.1%～108.8%，相對標準偏差為1.8%～11.9%。在-18℃儲藏32周的試驗期間，噁唑酰草胺及其代謝物在水稻基質中比較穩定。因此該方法的回收率和精密度均較好，符合農藥殘留分析的要求，可為其他農作物中噁唑酰草胺及其代謝物的殘留檢測提供參考依據。