益原素配方茶對黃嘌呤氧化酶活性的影響

楊 銳，鄒小林，符宗林，羅 賽，官興麗

（云南省普洱茶發酵工程研究中心，昆明 650217）

尿酸是生物體內細胞代謝和食物中嘌呤代謝的最終產物，機體內尿酸水平長期升高會形成高尿酸血癥。高尿酸血癥是繼高血壓、高血脂和高血糖后又一影響人體健康的重要風險因子，近幾年高尿酸血癥的發病率在全世界范圍內逐年增加，尤其是在美國和中國地區，研究顯示5%～12%的高尿酸血癥會發展成為痛風［1］。

痛風的治療藥物主要分為抑制尿酸生成、促進尿酸排泄和抗炎等［2］，毒副作用較明顯，因此具有降尿酸功效的日常食品和藥食兩用食品逐漸成為目前研究的熱點［3］。黃嘌呤氧化酶是尿酸生成的關鍵，其催化反應動力學是當前研究的重點，通過抑制其對黃嘌呤和次黃嘌呤的催化轉化，進而降低尿酸水平，對高尿酸血癥和痛風防治具有重要意義［4］。為此，筆者對益原素普洱茶與不同藥食同源食材復配的4 個樣品的黃嘌呤氧化酶活性抑制強弱進行了檢測，結果顯示4 個組方樣品都具有較強的體外黃嘌呤氧化酶活性抑制效果，與堿性水相比有顯著差異。將具有降尿酸作用的普洱茶與藥食同源食材進行復配，是天然來源植物性成分在降尿酸功能性食品開發中的一個良好應用，可為高尿酸和痛風防治的天然降尿酸功能性食品開發提供參考。

1 材料和方法

1.1 試劑

益原素與不同藥食同源食材復配樣提取物S1-S4（復配組方見表1）（云南大益微生物技術有限公司）、市售某堿性水（pH 9.3±0.6）、黃嘌呤氧化酶（XOD）和次黃嘌呤（HXA）（上海源葉生物科技有限公司），其他試劑為分析純。

表1 益原素普洱茶與不同藥食同源食材復配組方

1.2 儀器

756 紫外可見分光光度計（上海菁華科技儀器有限公司）、微孔板恒溫振蕩器（杭州奧盛儀器有限公司）、超聲波清洗器（北京市六一儀器廠）、電子天平（賽多利斯科學儀器北京有限公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 試劑配制

磷酸鹽緩沖溶液（PBS）配制，取磷酸二氫鉀、十二水合磷酸氫二鈉，用超純水超聲溶解，配制成100 mM（pH 7.5）的磷酸鹽緩沖溶液；黃嘌呤氧化酶（XOD）溶液配制，用預冷的PBS 溶解，配制成2 U/ml 的酶工作液，分裝保存于-20 ℃；底物次黃嘌呤（HXA）溶液配制，底物用PBS 超聲溶解，配制成1 mM 的底物溶液；待測樣品溶液配制，樣品用1% DMSO 的PBS 溶解待用。

1.3.2 測定方法

尿酸在293 nm 波長處有特征吸收峰，通過測定293 nm 處尿酸的紫外吸光度值反映尿酸含量的變化，進而測定樣品對XOD 酶活性的影響。依據參考文獻［5-6］修改方法后檢測，依次將PBS 和1 mg/mL 的樣品溶液1.45 mL、2 U/mL 的XOD 溶液150 mL 加入24 孔板，37 ℃孵育3 min，加入1 mM的底物溶液啟動反應，37 ℃反應5 min 后，將反應體系轉入比色皿中，測定293 nm 波長處的吸光度值A293。樣品XOD 抑制率計算公式如下：

Ac：對照組，加入底物和XOD；Ab：空白組，加入底物和PBS；As：樣品組，加入底物、XOD 和樣品；Asb：樣品空白組，加入底物和樣品。

1.3.3 統計分析

酶活性抑制率以平均值±標準差（平均值±SD）表示，所有數據應用Prism Graphpad 6.0 軟件進行計算。

2 結果與分析

復配得到4 個組方樣品，檢測其對黃嘌呤氧化酶活性的影響，結果如表2、圖1 所示，4 個組方樣品均能有效地抑制黃嘌呤氧化酶的活性，且顯著強于堿性水，表明4 個組方樣品都具有抑制尿酸生成的作用。其中，組方2 樣品的抑制作用最強，組方3 樣品次之，組方4 樣品的抑制效果最弱，這可能與不同組方食材其內含成分不同有關。

表2 各組方樣品對黃嘌呤氧化酶活性的抑制率 %

4 個組方的主要成分是益原素，益原素是云南大益微生物技術有限公司通過菌方組合發酵而成的一款普洱熟茶，富含多種對人體有益的活性成分，如茶褐素、茶多酚、puerins，具有抗氧化、抗癌、降血糖、降血脂、改善代謝綜合征等多種生理活性。而益原素普洱熟茶富含的黃酮類、黃烷醇類、酚酸類、生物堿類等物質，在體外能有效抑制黃嘌呤氧化酶的活性［7］。此外，動物水平研究表明，普洱茶除降低酶活性外還能抑制腎尿酸相關轉運蛋白的表達，減少尿酸鹽的重吸收，顯著降低機體尿酸水平［8-10］。

組方2 中復配了菊苣，其中含有的菊苣酸、綠原酸等在體外和體內皆有較好降尿酸的作用［11］，此外還具有利尿作用能促進尿酸的排泄［12］；桑葉、梔子、葛根等食材中含有大量酚酸類、黃酮類、生物堿等化學成分［13-15］，能有效抑制黃嘌呤氧化酶的活性［7］。另外3 個組方中復配的食材，如蒲公英和玉米須，除能抑制尿酸的生成還能促進尿酸排泄［16-17］。將益原素普洱熟茶與具有降尿酸功效的藥食同源食材進行復配，經提取濃縮后組方樣品中的活性成分含量增加，富含黃酮類、酚酸類等能抑制黃嘌呤氧化酶活性的物質，還有生物堿和菊苣酸等物質具有利尿作用能促進尿酸的排泄。復配得到的組方樣品，作為具有更強降尿酸作用且能調節多種身體機能的功能性食品，通過日常食用可起到安全且有效的抗“高尿酸”的效果。

3 小結

隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變，“高尿酸”發病率逐年升高，開發高效、安全的天然降尿酸活性產品現已成為國內外學者研究的熱點。益原素普洱茶與不同藥食同源食材復配得到的4 個組方樣品都具有顯著的黃嘌呤氧化酶活性抑制效果，復配樣品兼具口感風味和功能效果，是天然來源植物性成分在降尿酸功能性食品開發中的一個良好應用，可為高尿酸和痛風防治的天然降尿酸功能性食品開發提供參考。