2021 年福建省龍巖市病死雞群中4 種病毒感染情況調查

陳長福

（龍巖市動物疫病預防控制中心，福建龍巖 364000）

雞細小病毒（chicken parvovirus，ChPV）是引起雞腸道疾病的主要病原體之一，主要侵害雛雞，既可水平傳播，也可垂直傳播[1-2]。1984 年，Kisary 等[3]首次鑒定出ChPV；1987 年，伍 荻滕[4]首次證實該病毒存在于國內10 日齡雛雞腸道中。該病在美國、匈牙利、波蘭、韓國、加拿大、英國等國家廣泛流行，在美國ChPV 感染率接近80%[5]。圓圈病毒3 型（gyrovirus 3，GyV3）由Chu 等[6]于2012 年首次從兒童糞便中鑒定出來；2018 年李根等[7]首次在患有傳染性腺胃炎的肉雞中鑒定出GyV3?，F已證實GyV3 是引起雞傳染性胃腸炎的病原體之一。國內除山東省外尚未見其他?。ㄗ灾螀^、直轄市）有關GyV3 流行的報道。禽白血?。╝vian leukosis，AL）是禽類多種腫瘤性疾病的總稱，其中J 亞群禽白血病病毒（avian leucosis virus subgroup J，ALV-J）主要引起肉雞的髓細胞瘤。我國于1999 年從肉雞中分離鑒定出該病毒，隨后國內多個?。ㄗ灾螀^、直轄市）有該病發生的報道。ALV 造成經濟損失主要表現在產生腫瘤，導致雞死亡及引起雞的免疫抑制[8-10]。雞傳染性貧血病毒（chicken infectious anemia virus，CIAV）是引起雞傳染性貧血?。╟hicken infectious anemia，CIA）的病原，主要感染2～4 周齡雞群。該病的報道最早可追溯到1959 年。1979 年日本學者Yuasa 等[11]首次分離鑒定到CIAV（Gifu-1 株）。崔現蘭等[12]1992 年首次在國內分離鑒定到CIAV，隨后山東、江蘇、廣東等多地相繼報道了CIAV 的流行[13-16]。

龍巖市是福建省畜牧業生產大市，2020 年牧業產值高達300 多億元，占農林牧漁業總產值的55.5%，肉蛋奶產量68.5 萬t，家禽出欄1.95 億羽，同比增長5.5%，主要家禽產值1.44 億元，同比增長5.2%，家禽業生產已成為龍巖市農牧業經濟中最具活力和最有潛力的主導產業之一。目前龍巖市尚無ChPV、GyV3、ALV-J 和CIAV 感染的相關報道。為探明龍巖市規?；u場是否存在這4 種病毒的感染，2021 年采集龍巖市各縣（市、區）雞場病死雞相關樣品進行PCR 或RT-PCR 檢測，以期為今后龍巖市以及周邊省市規?；u場主要疫病防控提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 相關發病雞場分布 32 個養雞場病死雞樣品，由7 個縣（市、區）動物疫病預防控制中心送檢，其中存欄量1 萬羽以下的主要是家庭農場，共有16 個，1 萬～5 萬羽的規?；u場共9 個，5 萬羽以上規?；u場共7 個（表1）

表1 不同規模發病雞場數量分布 單位：個

1.1.2 組織樣品來源及處理 2021 年1—11 月龍巖市7 個縣（市、區）32 個雞場共送檢病死雞肝、脾、腎等組織樣品297 份。組織樣品于生物安全柜內剪碎、研磨后，按1:5（m/m）加PBS 制成組織勻漿，-70 ℃保存備用。

1.1.3 主要試劑 病毒DNA/RNA 提取試劑盒、反轉錄試劑盒，均購自北京全式金生物技術有限公司；DL 2 000 DNA Marker，購自寶日醫生物技術（北京）有限公司；PCR 擴增相關酶，購自湖南艾科瑞生物工程有限公司。

1.2 方法

1.2.1 引物設計與合成 根據GyV3 SDAU-1 株（GenBank：mg366592.1）VP2基因、ChPV GXCH-PV-25 株（GenBank：MG602515.1）NS1基因設計特異性引物，參考文獻[17-18]設計ALV-J 和CIAV 引物，引物序列如表2 所示。所用引物均由福州鉑尚生物技術有限公司合成。

表2 4 種病毒檢測引物序列

1.2.2 樣品核酸提取及反轉錄 參照試劑盒說明書，分別提取組織樣品的總RNA/DNA，并將RNA 反轉錄成cDNA，-20 ℃保存備用。

1.3 RT-PCR 或PCR 檢測

采用20.0 μL PCR反應體系：PCR擴增酶10.0 μL，cDNA 或DNA 模版2.0 μL，上、下游引物各0.5 μL，無菌去離子水7.0 μL?；靹蚝蠓湃隤CR 擴增儀中進行擴增。反應條件：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，55～56 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，30 個循環；72 ℃ 5 min。待反應結束后取7.0 μL 反應終產物加入至1%瓊脂糖凝膠中，經125 V 電泳25 min 后置于紫外凝膠成像系統中觀察結果。

2 結果與分析

2.1 總體情況

對2021 年龍巖市各地采集的297 份病死雞組織樣品進行檢測，結果4 種病原均有陽性檢出（圖1～2），分別檢出CIAV、GyV3、ChPV、ALV-J 陽性樣品102、85、56、39 份，陽性檢出率分別為34.34%、28.62%、18.86%、13.13%（表3）。從病原分布看，CIAV 分布最廣，除漳平市外其余6 個區縣均有檢出，各區縣檢出率介于12.00%～98.00%；其他3 種病原呈局限性分布，均只在4 個區縣有檢出，各區縣檢出率也有差異，但均在12.00%以上，其中武平縣GyV3 檢出率高達92.00%。

表3 龍巖市各縣（市、區）4 種病毒總體感染情況

2.2 單一感染情況

單一感染統計結果（表4）顯示：共檢出單一感染陽性樣品79 份，總單一感染陽性檢出率為26.60%（79/297），其中ChPV 的單一感染陽性檢出率最高，單一感染陽性檢出率從高到低依次為ChPV（14.81%）、CIAV（5.05%）、ALV-J（4.71%）、GyV3（2.02%）。

表4 龍巖市各縣（市、區）4 種病毒單一感染情況

2.3 病毒混合感染

混合感染統計結果（表5）顯 示：CIAV+ChPV雙重感染陽性檢出率為2.69%（8/297），CIAV+GyV3 為18.18%（54/297）；CIAV+ALV-J+GyV3三重感染陽性檢出率為7.07%（21/297），CIAV+ChPV+ALV-J+GyV3 四重感染為1.34%（4/297）。在混合感染類型中，CIAV 與其他病原的混合感染最普遍，雙重和多重感染均有，在102份CIAV 陽性樣品中，有87 份為混合感染，占85.29%。

表5 龍巖市各縣（市、區）4 種病毒混合感染情況

3 討論

對龍巖市各地雞場病死雞4 種病毒的感染檢測發現，2021 年龍巖市存在CIAV、GyV3、ChPV、ALV-J 4 種病原的感染，陽性檢出率為13.13%～34.34%，其中CIAV 分布較廣，陽性檢出率最高（34.34%），其他病原呈現一定的區域分布特征。ChPV 在漳平市、永定區、上杭縣和新羅區有檢測出，檢出率為22.00%～44.12%，與奉彬等[19]報道的廣西地區肉雞群ChPV 檢出率為16.67%（8/48）相比略高。2018 年，山東農業大學成子強團隊首次從患有傳染性腺胃炎的白羽肉雞中分離鑒定出GyV3，并從2014—2018 年采集的336份臨床樣品中檢測出42 份陽性，陽性檢出率為12.50%[20]，而國內其他省市暫無GyV3 流行的報道。在本調查發現，GyV3 在龍巖市4 個區縣有檢出，其中武平縣的檢出率高達92.00%，其他區縣檢出率也在20.00%以上，提示GyV3 在龍巖市部分地區可能廣泛流行。ALV-J 在連城縣、長汀縣、新羅區和武平縣均有檢出，檢出率分別為42.50%、28.00%、18.00%和12.00%，與國內其他地區的檢測結果相近，如鮑偉華等[21]對浙江省寧波市雞場進行ALV-J 抗體檢測的陽性率為21.50%，馬亞珍等[10]在新疆3 個縣均檢測出ALV-J 抗體，陽性率為26.00%，邢林林等[22]對山東省7 個種雞場進行ALV-J 抗體檢測，發現陽性率為19.80%。這表明龍巖市部分區縣的ALV-J 流行可能也較為嚴重，應引起重視。李岳等[23]于2016 年1 月—2019 年9月對我國13 個省市規?；B殖場開展了CIAV 流行病學調查，發現CIAV 感染普遍存在，感染率介于12.50%～25.69%。本調查發現，CIAV感染率最高，分布也最為廣泛，除漳平市外其余6 個區縣均有檢出，其中武平縣檢出率高達98.00%，其他區縣檢出率也普遍較高（12.00%～50.00%）。研究[14-16]表明，CIAV 與免疫抑制病毒混合感染時，可使CIAV 致病性增強，感染雞群病癥加劇，死亡率增加，這可能是導致CIAV 高陽性率的主要原因之一。

單一感染統計結果顯示，單一感染陽性檢出率為26.60%（79/297），其中ChPV 單一感染陽性檢出率最高，檢出率從高到低依次為ChPV（14.81%）、CIAV（5.05%）、ALV-J（4.71%）、GyV3（2.02%）。從混合感染統計結果來看，除漳平市外，龍巖市各區縣養殖場均存在兩種以上病毒混合感染，混合感染較為普遍，其中最普遍的表現為CIAV 與其他病原的混合感染，如CIAV+ChPV雙重感染陽性檢出率為2.69%（8/297），CIAV+GyV3 為18.18%（54/297）；CIAV+ALVJ+GyV3 三重感染陽性檢出率為7.07%（21/297），CIAV+ChPV+ALV-J+GyV3 四重感染為1.34%（4/297）。在102 份CIAV 陽性樣品中，有87 份為混合感染，占85.29%?；旌细腥臼菙[在當今養殖業面前的一道難題，需要系統研究開展綜合防控。

本調查的樣品全部來自病死雞，因而檢測結果并不能代表這些病原的真實流行情況，今后需要系統開展流行病學調查，為這4 種疫病的科學防控提供數據支撐。

綜上所述，龍巖市雞群中存在CIAV、ALV-J、ChPV 和GyV3 等4 種病原的感染，且部分地區感染較為嚴重，混合感染現象普遍，應引起養雞生產者的高度重視，積極開展疫病監測，加強雞場的生物安全綜合防控，以保障該地區家禽養殖業健康發展。