復方薄荷腦苯酚搽劑質量標準研究*

陳燕霞，陳 潔，黃櫻華，丘振文，李得堂，黃月純，孫亦群

（廣州中醫藥大學第一附屬醫院，廣東 廣州 510405）

復方薄荷腦苯酚搽劑（原名止癢酒精）為我院的醫院制劑（粵藥制字Z20150062），由水楊酸、苯酚、薄荷腦、75%乙醇組成，具有抗炎、止癢、消毒功效［1?3］，臨床常用于治療皮膚瘙癢等癥。復方薄荷腦苯酚搽劑原質量標準中存在滴定法測定水楊酸含量不準確、無苯酚含量等問題。根據《廣東省醫療機構（化學藥）制劑質量標準制定的技術要求（試行）》文件精神，并參考《中國藥典（二部）》［4］及文獻［5?6］，本研究中建立了測定水楊酸含量的紫外?可見分光光度法，以及測定苯酚含量的高效液相色譜法，以進一步提高質量標準?，F報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Cary60型紫外?可見分光光度計、HP1200型高效液相色譜儀，購于安捷倫科技<中國>有限公司；XA105型電子天平（梅特勒?托利多儀器<上海>公司，精度為十萬分之一）。

1.2 試藥

復方薄荷腦苯酚搽劑（廣州中醫藥大學第一附屬醫院制劑中心，批號分別為S1，S2，S3）；水楊酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100106?2011104，純度為99.9%）；苯酚試劑（天津市大茂化學試劑廠，批號為20160701，純度為99.11%）；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 紫外-可見分光光度法測定水楊酸含量［5］

2.1.1 溶液制備

取水楊酸對照品13 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加入75%乙醇制成每1 mL含0.253 0 mg的對照品貯備液，精密吸取1 mL，置25 mL容量瓶中，加入75%乙醇稀釋成每1 mL含0.010 12 mg的水楊酸對照品溶液。精密吸取樣品2 mL，置100 mL容量瓶，加入75%乙醇稀釋并定容，精密吸取5 mL，置100 mL容量瓶中，加入75%乙醇稀釋，定容，即得供試品溶液。按處方稱取缺水楊酸的陰性樣適量，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

1.水楊酸A.對照品溶液B.供試品溶液C.陰性對照品溶液圖1紫外-可見分光光譜圖1.Salicylic acidA.Reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.1 UV-Vis spectograms

2.1.2 方法學考察

專屬性試驗：分別吸取2.1.1項下對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各適量，在200～400 nm波長范圍內掃描，記錄紫外?可見吸收光譜圖（見圖1）?？梢?，在295 nm波長處，對照品溶液與供試品溶液均有最大吸收峰，且陰性對照品溶液在此波長處無吸收峰，表明制劑中的其他成分對水楊酸的測定無干擾。

線性關系考察：精密吸取2.1.1項下對照品貯備液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，分別置25 mL容量瓶中，加入75%乙醇稀釋，并定容；以75%乙醇為空白，于300 nm波長處測定吸光度。以質量濃度（C，mg/mL）為橫坐標、吸光度（A）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程A=25.484 9C+0.009 47（r=0.999 2，n=6），表明水楊酸質量濃度在0.005 1～0.030 4 mg/mL范圍內與吸光度線性關系良好。

重復性試驗：精密吸取樣品（批號為S1）適量，平行6份，按2.1.1項下方法制備供試品溶液，依法測定吸光度。結果平均吸光度為0.523 8，RSD為0.10%（n=6），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：精密吸取重復性試驗項下供試品溶液適量，分別于0，1，2，3，6，8 h時依法測定吸光度。結果平均吸光度為0.537 5，RSD為0.09%（n=6），表明供試品溶液在室溫下8 h內穩定性良好。

加樣回收試驗：精密吸取已知含量的樣品（批號為S1）0.8，1.0，1.2 mL，分別精密加入80%，100%，120%水楊酸對照品，平行3份，依法測定吸光度，并計算加樣回收率。結果見表1。

表1 加樣回收試驗結果（n=9）Tab.1 Results of the recovery test（n=9）

2.1.3 樣品含量測定

取樣品（批號分別為S1，S2，S3），平行3份，按2.1.1項下方法制備供試品溶液，依法測定吸光度，代入回歸方程，計算得3批樣品的平均含量為2.02%，RSD為0.36%（n=9）。

2.2 高效液相色譜法測定苯酚含量［6］

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Zobax SB?C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：甲醇?水（48∶52，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：270 nm；柱溫：25℃；進樣量：10μL。

(1)在下方也放置一個相同的小球，它與圓柱側面的公共點將也形成圓，把這兩個圓記作圓C1和圓C2.圓C1與圓C2所在平面有怎樣的位置關系？

2.2.2 溶液制備

取苯酚對照品1.3 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加水溶解并定容，即得對照品貯備液；精密吸取10 mL，置100 mL容量瓶中，加水稀釋并定容，過濾，取濾液，即得每1 mL含1.319 9 mg的苯酚對照品溶液。精密吸取樣品（批號為S1）1 mL，置100 mL容量瓶中，加水稀釋并定容；精密吸取稀釋液6 mL，置10 mL容量瓶中，加水稀釋并定容；過濾，取濾液，即得供試品溶液。精密吸取缺苯酚的陰性樣品1 mL，按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

1.苯酚A.對照品溶液B.供試品溶液C.陰性對照品溶液圖2高效液相色譜圖1.PhenolA.Reference solution B.Test solution C.Negative reference solutionFig.2 HPLC chromatograms

2.2.3 方法學考察

專屬性試驗：分別吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10μL，按2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖（見圖2）?？芍?，各峰分離良好，且陰性對照品溶液在相應位置無吸收峰，表明制劑中其他成分不干擾苯酚的測定。

線性關系考察：精密吸取2.2.2項下對照品溶液2，5，10，15，20，25 mL，分別置100 mL容量瓶中，加水稀釋并定容，濾過，取濾液，按2.2.1項下色譜條件進樣分析，記錄峰面積。以進樣量（X，μg）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=940.826X+4.005 1（r=0.999 9，n=6），表明苯酚進樣量在0.264 0～3.299 8μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：精密吸取2.2.2項下對照品溶液10 μL，按2.2.1項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果的RSD為0.46%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復性試驗：精密吸取樣品（批號為S1）適量，平行6份，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，按2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果的RSD為1.80%（n=6），表明方法重復性良好。

穩定性試驗：精密吸取重復性試驗項下供試品溶液10μL，分別于0，2，4，6，8，10，12，24 h時按2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果的RSD為1.11%（n=8），表明供試品溶液在常溫下放置24 h內穩定性良好。

加樣回收試驗：精密吸取已知含量的樣品（批號為S1）0.5 mL，分別精密加入80%，100%，120%對照品溶液，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，每組平行3份，按2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算回收率。結果見表1。

2.2.4 樣品含量測定

取樣品（批號分別為S1，S2，S3），按2.2.2項下方法制備供試品溶液，平行3份，按2.2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，代入回歸方程計算得3批樣品的平均含量為1.88%，RSD為1.98%（n=9）。

3 討論

前期預試驗中，按2020年版《中國藥典（二部）》收載方法，采用滴定法測定水楊酸和苯酚的含量，結果發現水楊酸陰性對照品溶液消耗氫氧化鈉滴定液較多，而苯酚陰性對照品溶液消耗溴滴定液較多，可能與苯酚與水楊酸存在相互干擾而導致結果誤差較大有關，故滴定法不適合用于復方薄荷腦苯酚搽劑中水楊酸和苯酚的含量測定。

在含量測定研究中，采用紫外?可見分光光度法測定樣品中水楊酸的含量，結果準確，操作便捷。采用高效液相色譜法測定苯酚含量，由于未能購買到苯酚對照品，故使用苯酚試劑（化學純），并按2020年版《中國藥典（二部）》收載方法測定其純度。結果天津市大茂化學試劑廠生產的苯酚試劑含量為99.11%，RSD為0.07%，純度高，可用作復方薄荷腦苯酚搽劑中苯酚含量測定的工作對照品。試驗結果表明，本方法測得樣品中苯酚平均含量為1.88%，RSD為1.98%，數據準確，方法可行。

綜上所述，本研究中建立的方法操作簡便快捷，結果準確可靠，靈敏度高，重復性和穩定性均較好，可用于復方薄荷腦苯酚搽劑的質量控制。