不同穩定劑修飾的槲皮素納米晶在大鼠體內注射藥動學及組織分布研究

胡 菲，車智慧，王 哲，李方琴，閆 巧，沈成英，申寶德，袁海龍*

? 藥理與臨床?

不同穩定劑修飾的槲皮素納米晶在大鼠體內注射藥動學及組織分布研究

胡 菲1, 2，車智慧2，王 哲2，李方琴1, 2，閆 巧2，沈成英3，申寶德1*，袁海龍2*

1.江西中醫藥大學現代中藥制劑教育部重點實驗室，江西 南昌 330004 2.空軍特色醫學中心藥學部，北京 100142 3.江西省人民醫院藥學部，江西南昌 330004

以普朗尼克F68（F68）、普朗尼克F127（F127）、甘草酸（glycyrrhizinic acid，GL）、維生素E聚乙二醇琥珀酸酯（TPGS）為穩定劑制備槲皮素納米晶（quercetin nanocrystals，QT-NCs），探討不同穩定劑種類對QT-NCs注射藥動學及組織分布的影響。采用HPLC法測定大鼠血漿和組織中的槲皮素質量濃度，并用DAS 2.0軟件計算其藥動學參數，進行比較。藥動學結果顯示，AUC0～t呈如下順序：QT-NCs/GL[（464.87±100.51）mg·L/h]＞QT-NCs/TPGS[（339.82±73.82）mg·L/h]＞QT-NCs/F68[（293.00±44.72）mg·L/h]＞QT-NCs/F127[（245.01±28.72）mg·L/h]。組織分布研究結果顯示，不同穩定劑修飾的QT-NCs具有不同的組織分布行為，肝臟的AUC0～t順序與血漿AUC0～t一致。此外，QT-NCs/GL在肝、脾、肺的分布最高（＜0.01）。穩定劑種類可以影響QT-NCs的注射藥動學及組織分布。

槲皮素；納米晶；穩定劑；藥動學；組織分布

近年來，納米晶（nanocrystals，NCs）作為克服難溶性藥物及天然產物生物利用度低下問題的主要方法之一受到廣泛關注。NCs是由少量穩定劑（表面活性劑和/或聚合物）穩定的純藥物結晶納米粒，平均粒徑小于1000 nm，通常為200～500 nm[1]。由于較小的粒徑與較大的比表面積，NCs在改善難溶性藥物溶出，提高生物利用度方面優勢突出[2-4]，具有載藥量高、毒副作用小、制備工藝簡單、應用廣泛等優點[5-6]。NCs早期主要用于改善難溶性藥物的口服生物利用度[7]，目前已拓展至注射、經皮、肺部、眼部等多種給藥途徑[8]，尤其注射給藥應用廣泛[9-10]。

NCs處方中的穩定劑用量雖然少，但對于維持NCs的物理穩定至關重要。在NCs的制備過程中，穩定劑可吸附在納米粒表面，通過靜電排斥和/或空間位阻作用防止納米粒的聚集與團聚，從而維持NCs的穩定[11-12]?；贜Cs的粒徑大小及物理穩定性篩選合適的穩定劑制備難溶性藥物納米晶一直是納米晶開發與研究的熱點之一。然而，一些穩定劑不僅能夠維持NCs的穩定，還可以通過與細胞相互作用而影響藥物的吸收分布行為[13-16]。具有P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）抑制作用的普朗尼克、維生素E聚乙二醇琥珀酸酯（TPGS）和具有較好生物膜黏附作用的羥丙甲纖維素可通過抑制藥物的外排或增加藥物的腸道滯留而促進藥物的吸收[12,17]。本課題組前期研究發現，這些穩定劑對難溶性藥物槲皮素納米晶（quercetin-nanocrystals，QT-NCs）的體外溶出和口服吸收也有影響[18]。

鑒于NCs在注射給藥方面的廣泛應用，本研究在前期基礎上，進一步探索穩定劑種類對QT-NCs注射藥動學及組織分布的影響。分別以普朗尼克F68（F68）、普朗尼克F127（F127）、甘草酸（glycyrrhizinic acid，GL）、TPGS為穩定劑制備相同粒徑的QT-NCs，SD大鼠尾iv給藥后測定血漿和各臟器組織（心、肝、脾、肺、腎）中QT的濃度，研究穩定劑種類對QT-NCs注射藥動學及組織分布的影響。

1 儀器與材料

LC-20AD型高效液相色譜儀（含LC-20AD二元梯度泵、DGU-20A3脫氣機、SIL-20AC自動進樣器、CTO-20AC柱溫箱）購自日本島津公司；Winner 802型納米激光粒度儀購自濟南微納顆粒儀器股份有限公司；DF-101S型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器購自北京恒豐長偉科技有限公司；BT-125D型電子天平購自賽多利斯科學儀器有限公司；TGL-16G型臺式離心機購自上海安亭科學儀器廠；VORTEX-5型渦旋混合儀購自其林貝爾儀器公司；高通量組織研磨儀購自上海萬柏生物科技有限公司。

槲皮素原料藥（批號CY160517，質量分數≥95%）購自陜西慈緣生物技術公司；對照品槲皮素（批號16111201）、山柰酚（批號17092102）購自成都普菲德生物技術公司，質量分數均≥98%；甘草酸（批號190421，質量分數≥95.0%）購自北京世紀奧科生物技術有限公司；F127和F68購自北京鳳禮精求商貿有限責任公司；TPGS（批號BCBW9938）購自美國Sigma公司；磷酸購自天津福晨試劑廠；色譜甲醇購自Fisher Chemical公司。

SPF級雄性SD大鼠，體質量（200±20）g，由北京科宇動物養殖中心提供，動物許可證號SCXK（京）2018-0010。動物實驗倫理經空軍特色醫學中心批準，批準號為空特（科研）第2021-75-PJ01。

2 方法與結果

2.1 NCs的制備

采用介質研磨法制備QT-NCs[19-20]。稱取槲皮素原料藥40 mg及穩定劑（F68、F127、GL、TPGS）8 mg，置于10 mL西林瓶中，加入4 mL蒸餾水，加入攪拌子及4 mL氧化鋯珠子，將西林瓶置于磁力攪拌器上，1500 r/min攪拌研磨2 h，取出，濾過去除氧化鋯珠子，即得QT-NCs混懸液。

2.2 NCs的粒徑結果

按照“2.1”項制備3批樣品，取樣品適量，加蒸餾水稀釋到合適濃度，采用納米激光粒度儀測定平均粒徑及多分散指數（polydispersity index，PDI），采用馬爾文激光粒度儀測定Zeta電位，平行測定3次，取其平均值。結果見表1，顯示QT-NCs/F127、QT-NCs/GL、QT-NCs/F68和QT-NCs/TPGS粒徑均為200 nm，PDI約為0.2。QT-NCs/F127、QT-NCs/F68和QT-NCs/TPGS的電位基本一致，QT-NCs/GL電位絕對值相對較高。

表1 QT-NCs的粒徑和PDI(, n = 3)

Table 1 Particle size and PDI of QT-NCs (, n = 3)

樣品粒徑/nmPDIZeta電位/mV QT-NCs/F127201±100.19±0.02?(14.27±0.15) QT-NCs/GL199±120.20±0.02?(25.17±0.45) QT-NCs/F68194±100.20±0.01?(14.43±0.55) QT-NCs/TPGS205±130.20±0.01?(12.23±0.31)

2.3 大鼠體內注射藥動學研究

2.3.1 色譜條件 InterSustain C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（55∶45）；體積流量為1.0 mL/min；柱溫為30 ℃；檢測波長為375 nm；進樣量為20 μL。

2.3.2 對照品及內標溶液的制備 精密稱定槲皮素對照品適量，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得質量濃度為1.20 mg/mL的槲皮素對照品儲備液，備用。另取山柰酚對照品適量，精密稱定，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得質量濃度為488.00 μg/mL的內標儲備液，取適量，用甲醇稀釋為質量濃度為97.60 μg/mL的內標溶液，備用。

2.3.3 血漿樣品的處理[21]取大鼠血漿樣品200 μL，置1.5 mL離心管中，依次加入50 μL 97.60 μg/mL的山柰酚內標物溶液、25%鹽酸200 μL，渦旋90 s混勻，90 ℃水浴中反應15 min，冷卻后加無水乙醇350 μL，渦旋90 s混勻，8000 r/min離心10 min，取上清液20 μL按“2.3.1”項下色譜條件進樣分析。

2.3.4 專屬性考察 將大鼠空白血漿、空白血漿加適量槲皮素對照品、大鼠給藥后血漿樣品，參照“2.3.3”項下方法處理（空白血漿內標溶液以同體積甲醇替代），按“2.3.1”項下色譜條件分析，結果顯示空白血漿中的內源性物質對槲皮素的測定無干擾，其色譜圖見圖1。

2.3.5 標準曲線的繪制 取200 μL空白血漿，精密加入不同濃度的槲皮素對照品溶液適量，得到槲皮素質量濃度分別為0.25、1.25、12.50、25.00、50.00、100.00、150.00、300.00 μg/mL的血漿對照品系列溶液，按“2.3.3”項下方法處理后，再按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以槲皮素質量濃度（）為橫坐標、槲皮素的峰面積與內標山柰酚的峰面積比值（）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程為＝0.043 5－0.024 2（2＝0.999 8）。結果，表明槲皮素在0.25～300.00 μg/mL線性關系良好。

2.3.6 檢測限與定量限 取質量濃度為1.25 μg/mL的槲皮素血漿對照品溶液，梯度稀釋后，按“2.3.3”項下方法處理后，再按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，信噪比為10時所能檢測到的質量濃度為定量限，信噪比為3時所能檢測到的質量濃度為檢測限。結果表明，定量限為0.25 μg/mL，檢測限為0.12 μg/mL。

1-槲皮素 2-山柰酚，圖3～7同

2.3.7 精密度試驗 配制0.75、110.00、225.00 μg/mL的低、中、高質量濃度的血漿樣品，按“2.3.3”項下方法處理后，再按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，平行測定6次，計算日內精密度，連續測定3 d，計算日間精密度，結果表明日內精密度RSD分別為4.12%、1.19%、1.07%；日間精密度RSD分別為6.88%、1.01%、0.70%。表明精密度良好。

2.3.8 穩定性試驗 配制0.75、110.00、225.00 μg/mL的低、中、高質量濃度的血漿樣品，在?20 ℃反復凍融3次，按“2.3.3”項下方法處理后，再按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，考察其凍融穩定性；將處理后的樣品室溫放置24 h，按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，考察其室溫放置穩定性。結果顯示低、中、高質量濃度的槲皮素血漿樣品反復凍融后的RSD分別為3.69%、1.53%、0.95%；低、中、高質量濃度的槲皮素血漿樣品處理后室溫放置24 h后的RSD分別為5.75%、1.45%、1.87%，表明血漿樣品在反復凍融3次及處理后的生物樣品室溫放置24 h均穩定。

2.3.9 提取回收率試驗 配制0.75、110.00、225.00 μg/mL的低、中、高質量濃度的血漿樣品，每個質量濃度平行制備3份，按“2.3.3”項下方法處理后，按“2.3.1”項下色譜條件分析。取與3種質量濃度相同的槲皮素對照品溶液，按“2.3.1”項下色譜條件分析，以槲皮素對照品溶液的峰面積為標準，計算槲皮素在相應質量濃度的血漿樣品中的提取回收率。結果表明低、中、高3個質量濃度的血漿樣品中槲皮素的平均提取回收率分別為99.49%、95.67%、99.41%，且RSD符合要求。

2.3.10 藥動學研究 取雄性SD大鼠24只，分為QT-NCs/F127組、QT-NCs/F68組、QT-NCs/GL組和QT-NCs/TPGS組，每組6只，實驗前禁食不禁水12 h。測定載藥量[QT-NCs/F127：（86.81±1.02）%；QT-NCs/F68：（93.06±0.30）%；QT-NCs/GL：（91.89±0.60）%；QT-NCs/TPGS：（87.93±0.33）%]后，按照載藥量計算給藥劑量（100 mg/kg），分別尾椎iv QT-NCs/F127、QT-NCs/F68、QT-NCs/GL和QT-NCs/TPGS，然后分別于給藥后0.083、0.250、0.500、1.000、2.000、4.000、6.000、8.000、12.000、24.000 h眼眶取血0.5 mL，置于1.5 mL肝素鈉浸潤過的離心管內，5000 r/min離心10 min分離血漿，按照“2.3.3”項下方法處理后，再按“2.3.1”項下色譜條件分析，計算槲皮素的血藥濃度，繪制藥-時曲線，結果見圖2；采用DAS 2.0軟件計算藥動學參數，結果見表2。與QT-NCs/F127組比較，QT-NCs/GL、QT-NCs/F68和QT-NCs/TPGS的AUC0～均顯著增加（＜0.05、0.01），并呈現如下順序：QT-NCs/GL＞QT-NCs/TPGS＞QT-NCs/F68＞QT-NCs/F127。此外，QT-NCs/TPGS的AUC0～t、1/2z及max約為QT-NCs/F127的1.39、1.24和1.33倍（＜0.05、0.01）。

圖2 QT-NCs/F127、QT-NCs/GL、QT-NCs/TPGS和QT-NCs/F68的藥-時曲線(, n = 6)

表2 QT-NCs/F127、QT-NCs/GL、QT-NCs/TPGS和QT-NCs/F68的主要藥動學參數(, n = 6)

Table 2 Main pharmacokinetic parameters of QT-NCs/F127, QT-NCs/GL, QT-NCs/TPGS and QT-NCs/F68 (, n = 6)

組別AUC0～t/(mg·h·L?1)MRT0～t/ht1/2z/hCmax/(mg·L?1) QT-NCs/F127245.01±28.725.89±0.487.73±1.40125.54±19.91 QT-NCs/GL464.87±100.51**6.01±0.696.36±3.4791.59±11.08 QT-NCs/F68293.00±44.72*##6.01±0.9810.70±3.42246.42±55.07**## QT-NCs/TPGS339.82±73.82*#6.04±0.519.55±1.00*197.62±41.29**##

與QT-NCs/F127組比較：*＜0.05**＜0.01；與QT-NCs/GL組比較：#＜0.05##＜0.01

*<0.05**<0.01QT-NCs/F127 group;#<0.05##<0.01QT-NCs/GL group

2.4 大鼠體內注射組織分布研究

2.4.1 色譜條件 InterSustain C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（56∶44）；體積流量為1.0 mL/min；柱溫為30 ℃；檢測波長為375 nm；進樣量為20 μL。

2.4.2 對照品及內標溶液的制備 精密稱定槲皮素對照品適量，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得質量濃度為1.34 mg/mL的槲皮素對照品儲備液，備用。另取山柰酚對照品適量，精密稱定，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，得質量濃度為488.00 μg/mL的內標儲備液，取適量，用甲醇稀釋為質量濃度為48.80 μg/mL的內標溶液，備用。

2.4.3 組織勻漿液的處理[21]取大鼠組織勻漿液200 μL，置1.5 mL離心管中，依次加入50 μL 48.80 μg/mL的山柰酚內標物溶液、25%鹽酸200 μL，渦旋90 s混勻，90 ℃水浴中反應15 min，冷卻后加無水乙醇350 μL，渦旋90 s混勻，8000 r/min離心10 min，取上清液20 μL，按“2.4.1”項下色譜條件進樣分析。

2.4.4 專屬性考察 將大鼠空白組織勻漿、空白組織勻漿適量槲皮素對照品、大鼠給藥后勻漿樣品，參照“2.4.3”項下方法處理（空白血漿內標溶液以同體積甲醇替代），按“2.4.1”項下色譜條件分析，結果顯示空白勻漿中的內源性物質對槲皮素的測定無干擾，其色譜圖見圖3～7。

2.4.5 標準曲線的制備 取200 μL空白組織勻漿，加入不同濃度的槲皮素對照品溶液適量，得到質量濃度為0.33、1.67、16.70、33.40、66.80、133.60 μg/mL的心、肺、腎組織樣品標準液以及質量濃度為0.33、1.67、16.70、33.40、66.80、133.60、334.00 μg/mL的肝、脾組織樣品標準液，按“2.4.3”項下方法處理后，再按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以槲皮素質量濃度（）為橫坐標、槲皮素的峰面積與內標山柰酚的峰面積比值（）為縱坐標進行線性回歸，求得回歸方程。各組織標準曲線方程見表3。取質量濃度為1.67 μg/mL的槲皮素組織樣品標準品溶液，梯度稀釋后，按“2.4.3”項下方法處理后，再按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定定量限和檢測限，結果見表3。

圖3 空白心臟(A)、空白心臟＋槲皮素對照品 (B) 和含藥心臟 (C) 的HPLC色譜圖

圖4 空白肝臟(A)、空白肝臟＋槲皮素對照品 (B) 和含藥肝臟 (C)的HPLC色譜圖

圖5 空白脾臟(A)、空白脾臟＋槲皮素對照品 (B) 和含藥脾臟 (C)的HPLC色譜圖

圖6 空白肺臟(A)、空白肺臟＋槲皮素對照品 (B) 和含藥肺臟 (C)的考察HPLC色譜圖

圖7 空白腎臟(A)、空白腎臟＋槲皮素對照品 (B) 和含藥腎臟 (C)的HPLC色譜圖

2.4.6 精密度試驗 配制含1.00、50.00、100.00 μg/mL的低、中、高質量濃度的心、肺、腎組織勻漿樣品以及含1.00、125.00、250.00 μg/mL的低、中、高質量濃度的肝、脾組織勻漿樣品，按“2.4.3”項下方法處理后，再按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，平行測定6次，計算日內精密度，連續測定3 d，計算日間精密度。日內精密度RSD為0.83%～3.63%，日間RSD為0.92%～4.69%，表明精密度良好。

表3 各組織中槲皮素的回歸方程及線性范圍

Table 3 Regression equation and linear range of quercetin in each tissue

樣品回歸方程R2線性范圍/(μg·mL?1)定量限/(μg·mL?1)檢測限/(μg·mL?1) 心Y＝0.088 7 X＋0.073 70.999 40.33～133.600.330.16 肝Y＝0.084 9 X＋0.119 10.999 90.33～334.000.330.16 脾Y＝0.076 5 X＋0.070 50.999 20.33～334.000.330.16 肺Y＝0.082 3 X＋0.084 50.999 40.33～133.600.330.16 腎Y＝0.083 3 X－0.009 50.999 90.33～133.600.330.16

2.4.7 穩定性試驗 配制1.00、50.00、100.00 μg/mL的低、中、高質量濃度的心、肺、腎組織勻漿樣品以及含1.00、125.00、250.00 μg/mL的低、中、高質量濃度的肝、脾組織勻漿樣品，在?20 ℃反復凍融3次，按“2.4.3”項下方法處理后，再按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，考察其凍融穩定性；將處理后的樣品室溫放置24 h，按“2.4.1”項下色譜條件進樣測定，考察其室溫放置穩定性。結果顯示組織勻漿樣品反復凍融后的RSD為0.91%～3.78%；處理后室溫放置24 h后的RSD為0.88%～5.33%，表明組織樣品在反復凍融3次及處理后的生物樣品室溫放置24 h均穩定。

2.4.8 回收率試驗 配制1.00、50.00、100.00 μg/mL的低、中、高質量濃度的心、肺、腎組織勻漿樣品以及含1.00、125.00、250.00 μg/mL的低、中、高質量濃度的肝、脾組織勻漿樣品，每個質量濃度平行制備3份，按“2.4.3”項下方法處理后，按“2.4.1”項下色譜條件分析。取與上述3種質量濃度相同的槲皮素對照品溶液，按“2.4.1”項下色譜條件分析，以槲皮素對照品溶液的峰面積為標準，計算槲皮素在相應濃度的組織樣品中的提取回收率，結果見表4。各組織中槲皮素的提取回收率為85%～105%，RSD為1.31%～3.48%，符合要求。

2.4.9 組織分布研究 取雄性SD大鼠192只，分為QT-NCs/F127組、QT-NCs/F68組、QT-NCs/GL組和QT-NCs/TPGS組，實驗前禁食不禁水12 h。按照載藥量計算給藥劑量（100 mg/kg），分別尾椎iv QT-NCs/F127、QT-NCs/F68、QT-NCs/GL和QT-NCs/TPGS，然后分別于給藥后0.083、0.500、1.000、2.000、4.000、8.000、12.000、24.000 h時間點麻醉，依次取心、肝、脾、肺、腎組織置于生理鹽水中，洗凈，濾紙吸干。放入?20 ℃冰箱中進行冷凍保存，備用。分別稱取各組織約0.5 g（不足者取全部組織），按2.0 mL/g加入生理鹽水，制成組織勻漿。按照“2.4.3”項下方法處理后，再按“2.4.1”項下色譜條件分析，計算槲皮素的組織質量濃度，繪制藥-時曲線，結果見圖8；采用DAS 2.0軟件計算藥動學參數，結果見表5。由圖8可知，尾iv QT-NCs/GL、QT-NCs/F127、QT-NCs/F68和QT-NCs/TPGS后，QT-NCs/GL在肝、肺中的質量濃度高于QT-NCs/F127、QT-NCs/F68和QT-NCs/TPGS。由表5可知，在肝、脾中，與QT-NCs/F127、QT-NCs/F68和QT-NCs/TPGS 3組相比，QT-NCs/GL的AUC0～和MRT0～均存在顯著差異（＜0.01）；尤其在肝臟中，4組QT-NCs的AUC0～呈現如下順序：QT-NCs/GL＞QT-NCs/TPGS＞QT-NCs/F68＞QT-NCs/F127。在腎臟中，與QT-NCs/F127相比，QT-NCs/GL、QT-NCs/TPGS和QT-NCs/F68的AUC0～分別增加1.72、1.34和1.59倍（＜0.05）。在肺中，與QT-NCs/F127、QT-NCs/F68和QT-NCs/TPGS 3組相比，QT-NCs/GL的AUC0～顯著升高（＜0.01）。在心臟中，QT-NCs/GL與QT-NCs/F127、QT-NCs/F68、QT-NCs/TPGS的MRT0～均存在顯著差異（＜0.01）。

表4 各組織中槲皮素的提取回收率

Table 4 Extraction recovery of quercetin in various tissues

樣品理論質量濃度/(μg·mL?1)提取回收率/%RSD/% 心1.0096.58±3.113.22 50.0096.86±2.082.14 100.0094.77±1.611.69 肝1.0098.63±2.512.55 125.0095.59±2.913.05 250.0094.92±1.661.75 脾1.0097.61±1.281.31 125.0087.85±1.321.50 250.0089.08±1.391.56 肺1.0095.95±2.742.86 50.0094.68±2.042.15 100.0087.34±1.591.82 腎1.0089.87±1.501.67 50.0088.45±2.022.28 100.0090.95±3.163.48

3 討論

本課題組前期已經研究了不同穩定劑對QT-NCs體外溶出及口服吸收的影響[18]。本研究在前期研究的基礎上，進一步探討不同穩定劑修飾的QT-NCs在大鼠體內注射藥動學及組織分布的影響。結果顯示，不同穩定劑修飾的QT-NCs藥動學及組織分布存在顯著差異，血漿及肝臟中的AUC0～t呈現如下順序：QT-NCs/GL＞QT-NCs/TPGS＞QT-NCs/F68＞QT-NCs/F127，表明穩定劑種類會影響QT-NCs的注射藥動學及組織分布。各給藥組均以肝臟中藥物分布最高，表明QT-NCs具有一定的被動肝靶向能力，而不同穩定劑修飾的QT-NCs在同一臟器中的分布不一致，則主要是因為QT-NCs注射后能以整體粒子形式分布至各個臟器[21]，而納米粒表面修飾的不同穩定劑具有不同的生理活性[12]，可能會影響臟器細胞對槲皮素的攝取及外排，進而影響槲皮素的分布。

圖8 QT-NCs/GL、QT-NCs/F127、QT-NCs/F68和QT-NCs/TPGS在肝、脾、心、肺、腎的藥-時曲線(, n = 6)

表5 QT-NCs/GL、QT-NCs/F127、QT-NCs/F68和QT-NCs/TPGS在各組織的主要藥動學參數(, n = 6)

Table 5 Main pharmacokinetic parameters of QT-NCs/GL, QT-NCs/F127, QT-NCs/F68 and QT-NCs/TPGS in each organization (, n = 6)

組織組別AUC0～t/(mg·h·L?1)MRT0～t/ht1/2z/hCmax/(mg·L?1) 肝QT-NCs/GL1 400.10±70.837.93±0.189.51±3.25273.08±24.69 QT-NCs/F127519.21±55.00**3.41±0.45**3.48±0.70*277.89±21.40 QT-NCs/F68559.67±30.25**4.42±0.33**6.55±3.01231.84±17.96*▲ QT-NCs/TPGS627.16±43.83**▲★4.93±0.08**▲▲★5.19±0.79*▲243.70±25.68 脾QT-NCs/GL286.45±11.384.06±0.365.02±0.65202.70±34.58 QT-NCs/F127154.37±26.75**0.86±0.07**2.23±0.69**239.80±43.81 QT-NCs/F68127.69±16.62**0.64±0.07**▲▲0.58±0.06**▲▲166.19±22.79▲ QT-NCs/TPGS164.44±15.94**★0.99±0.04**▲★★1.69±0.60**★217.39±41.18 腎QT-NCs/GL82.26±13.723.61±0.955.31±2.2259.73±3.83 QT-NCs/F12753.16±5.77*1.97±0.08*2.56±1.1255.88±9.42 QT-NCs/F6870.43±8.68▲2.55±0.875.60±2.4259.99±4.07 QT-NCs/TPGS61.59±6.93*2.00±0.25**3.95±0.7352.06±5.53 肺QT-NCs/GL173.73±15.885.10±0.596.31±0.6296.49±12.17 QT-NCs/F12752.03±7.18**3.57±0.49**9.94±7.5872.39±16.90 QT-NCs/F6857.67±15.21**1.36±0.34**▲▲4.00±0.98**100.13±17.28 QT-NCs/TPGS38.72±6.29**▲2.08±0.25**▲▲★3.76±1.79**50.52±11.85**★★ 心QT-NCs/GL10.97±3.622.12±0.535.59±3.8114.51±10.61 QT-NCs/F12712.85±3.960.88±0.40**3.38±2.6030.53±7.30* QT-NCs/F689.28±1.500.59±0.07**1.36±0.6322.52±4.19 QT-NCs/TPGS13.48±2.85★0.88±0.48**2.29±1.8728.61±6.65

與QT-NCs/GL組比較：P＜0.05 P＜0.01；與QT-NCs/F127組比較：P＜0.05 P＜0.01；與QT-NCs/F68組比較：★＜0.05★★＜0.01

*< 0.05**< 0.01QT-NCs/GL group;P< 0.05 P< 0.01QT-NCs/F127 group;★< 0.05★★< 0.01QT-NCs/F68 group

不同穩定劑修飾的QT-NCs中，以QT-NCs/GL組肝臟的藥物濃度最高，提示GL修飾的NCs具有一定的主動肝靶向能力，可用于開發肝靶向納米晶；這主要是因為肝臟細胞表面有GL的特異性結合位點[22]，能夠增強肝臟細胞對QT-NCs/GL的攝取。此外，GL能夠增強P-gp活性，QT-NCs被肝臟攝取后由于P-gp活性的增強而增加槲皮素的外排入血，導致其較高的血藥濃度。文獻報道[12,17]，TPGS、F68、F127均能夠抑制P-gp活性，3種穩定劑修飾的QT-NCs表現出不同的藥動學及組織分布行為，可能是因為它們對P-gp抑制作用不同，且F68修飾的NCs具有一定的長循環作用[23]。

綜上所述，本研究對QT-NCs/GL、QT-NCs/F127、QT-NCs/F68和QT-NCs/TPGS 4種QT-NCs進行了大鼠體內注射藥動學及組織分布研究，結果表明，不同穩定劑對于靶向組織分布能產生影響，表明穩定劑種類能影響QT-NCs注射藥動學及組織分布。后續可進一步研究不同穩定劑修飾的QT-NCs與臟器細胞的相互作用，以闡明導致其注射藥動學及組織分布差異的原因。同時，根據不同穩定劑修飾的QT-NCs的組織分布特點，開發靶向制劑。此外，未來還可以研究更多穩定劑對不同難溶性藥物NCs體內行為的影響，以探索穩定劑種類對難溶性藥物NCs體內行為影響的規律，為NCs靶向制劑的開發奠定基礎。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] Shen B D, Wu N, Shen C Y,.Hyperoside nanocrystals for HBV treatment: Process optimization,andevaluation [J]., 2016, 42(11): 1772-1781.

[2] Goel S, Sachdeva M, Agarwal V.Nanosuspension technology: Recent patents on drug delivery and their characterizations [J]., 2019, 13(2): 91-104.

[3] Jacob S, Nair A B, Shah J.Emerging role of nanosuspensions in drug delivery systems [J]., 2020, 24: 3.

[4] 申寶德, 沈成英, 徐玲霞, 等.難溶性中藥納米混懸劑的體內外行為研究進展 [J].中國中藥雜志, 2018, 43(19): 3828-3833.

[5] Qiu L, Zhao X H, Zu Y G,.Ursolic acid nanoparticles for oral delivery prepared by emulsion solvent evaporation method: Characterization,evaluation of radical scavenging activity and bioavailability [J]., 2019, 47(1): 610-621.

[6] Wang Y C, Zheng Y, Zhang L,.Stability of nanosuspensions in drug delivery [J]., 2013, 172(3): 1126-1141.

[7] Gao L, Liu G Y, Ma J L,.Application of drug nanocrystal technologies on oral drug delivery of poorly soluble drugs [J]., 2013, 30(2): 307-324.

[8] Mohammad I S, Hu H Y, Yin L F,.Drug nanocrystals: Fabrication methods and promising therapeutic applications [J]., 2019, 562: 187-202.

[9] Patel D, Zode S S, Bansal A K.Formulation aspects of intravenous nanosuspensions [J]., 2020, 586: 119555.

[10] Ahire E, Thakkar S, Darshanwad M,.Parenteral nanosuspensions: A brief review from solubility enhancement to more novel and specific applications [J]., 2018, 8(5): 733-755.

[11] Yang H, Kim H, Jung S,.Pharmaceutical strategies for stabilizing drug nanocrystals [J]., 2018, 24(21): 2362-2374.

[12] Tuomela A, Hirvonen J, Peltonen L.Stabilizing agents for drug nanocrystals: Effect on bioavailability [J]., 2016, 8(2): 16.

[13] Liu Q Y, Guan J, Sun Z,.Influence of stabilizer type and concentration on the lung deposition and retention of resveratrol nanosuspension-in-microparticles [J]., 2019, 569: 118562.

[14] Liu Y, Ma Y Q, Xu J N,.Apolipoproteins adsorption and brain-targeting evaluation of baicalin nanocrystals modified by combination of Tween 80 and TPGS [J]., 2017, 160: 619-627.

[15] Hong C, Dang Y, Lin G B,.Effects of stabilizing agents on the development of myricetin nanosuspension and its characterization: Anandevaluation [J]., 2014, 477(1/2): 251-260.

[16] Gao W, Chen Y, Thompson D H,.Impact of surfactant treatment of paclitaxel nanocrystals on biodistribution and tumor accumulation in tumor-bearing mice [J]., 2016, 237: 168-176.

[17] Fu Q, Li B, Zhang D,.Comparative studies of thedissolution andpharmacokinetics for different formulation strategies (solid dispersion, micronization, and nanocrystals) for poorly water-soluble drugs: A case study for lacidipine [J]., 2015, 132: 171-176.

[18] 胡菲, 沈成英, 申寶德, 等.不同穩定劑對槲皮素納米晶體外溶出及大鼠體內口服藥動學的影響 [J].中草藥, 2021, 52(21): 6485-6492.

[19] 申寶德, 連王權, 沈成英, 等.微型化介質研磨法制備難溶性黃酮類化合物納米混懸劑 [J].中草藥, 2017, 48(21): 4413-4418.

[20] 劉肖, 劉娟, 龐建云, 等.微型化介質研磨法制備槲皮素納米混懸劑[J].中國中藥雜志, 2017, 42(15): 2984-2988.

[21] Shen B D, Shen C Y, Zhu W F,.The contribution of absorption of integral nanocrystals to enhancement of oral bioavailability of quercetin [J]., 2021, 11(4): 978-988.

[22] Ishida S, Sakiya Y, Taira Z.Disposition of glycyrrhizin in the perfused liver of rats [J]., 1994, 17(7): 960-969.

[23] Wang T, Qi J P, Ding N,.Tracking translocation of self-discriminating curcumin hybrid nanocrystals following intravenous delivery [J]., 2018, 546: 10-19.

Pharmacokinetics and tissue distribution of quercetin nanocrystals modified with different stabilizers following intravenous delivery in rats

HU Fei1, 2, CHE Zhi-hui2, WANG Zhe2, LI Fang-qin1, 2, YAN Qiao2, SHEN Cheng-ying3, SHEN Bao-de1, YUAN Hai-long2

1.Key Laboratory of Modern Chinese Medicine Preparation of Ministry of Education, Jiangxi University of Chinese Medicine, Nanchang 330004, China 2.Department of Pharmacy, Air Force Medical Center, PLA, Beijing 100142, China 3.Department of Pharmacy, Jiangxi Provincial People’s Hospital, Nanchang 330004, China

To prepare quercetin nanocrystals (QT-NCs) with pluronic F68 (F68), pluronic F127 (F127), glycyrrhizic acid (GL), vitamin E polyethylene glycol succinate (TPGS) as stabilizers and explore the effects of stabilizers on pharmacokinetics and tissue distribution following intravenous delivery.High performance liquid chromatography (HPLC) was used to determine the concentration of quercetin in plasma and tissues of rats, and DAS 2.0 software was used to calculate its pharmacokinetic parameters for comparison.The pharmacokinetic results showed that AUC0～tof QT-NCs was in the following order: QT-NCs/GL [(464.87 ± 100.51) mg·L/h] > QT-NCs/TPGS [(339.82 ± 73.82) mg·L/h] > QT-NCs/F68 [293.00 ± 44.72] mg·L/h] > QT-NCs/F127 [(245.01 ± 28.72) mg·L/h).AUC0～tof QT-NCs in liver showed similar order to that of plasma.Furthermore, the distribution of QT-NCs/GL in liver, spleen and lung were the highest (< 0.01).The stabilizers’ types can influence the pharmacokinetics and tissue distribution of QT-NCs following intravenous delivery.

quercetin; nanocrystals; stabilizers; pharmacokinetics; tissue distribution

R285.61

A

0253 - 2670(2022)09 - 2697 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.09.012

2021-11-29

國家自然科學基金資助項目（81803741）；國家自然科學基金資助項目（81873092）；江西中醫藥大學博士科研啟動基金資助項目（2021BSZR025）

胡 菲（1997—），女，碩士研究生，研究方向為中藥新型給藥系統研究。Tel: 17779140130 E-mail: 1256719791@qq.com

通信作者：申寶德，博士，研究方向為中藥制劑新技術與新劑型研究。E-mail: shenbaode@163.com

袁海龍，研究員，博士生導師，研究方向為中藥新型給藥系統研究。Tel: (010)66928505 E-mail: yhlpharm@126.com

[責任編輯 李亞楠]