結直腸癌組織中SM22α、TGF-β1的表達水平及其與腫瘤侵襲轉移的關系

張粉娟，董兵衛，沈江立，張渭波，羅小紅

咸陽市中心醫院病理科1、肛腸外科2，陜西 咸陽 712000

結直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，受遺傳、飲食等因素影響較大。近幾年，隨著人民生活水平的提高及飲食結構的改變，結直腸癌的發病率逐年增高[1]。目前，結直腸癌的治療仍以手術切除為首選，輔以放射治療、化療藥物治療及中醫藥治療等，雖然可在一定程度上延長患者生存期，但進展期結直腸癌患者仍有發生遠端侵襲轉移的風險，是導致患者預后較差的主要原因[2-3]。因此，探尋有效的檢測指標來監控患者腫瘤侵襲轉移情況對提高患者預后生存率至關重要。平滑肌22 alpha蛋白(SM22α)是鈣調蛋白家族的一種肌動蛋白結合蛋白，包含一個氨基末端CH結構域和一個羧基末端鈣調蛋白樣重復基序，可以通過與肌動蛋白微絲結構結合，而影響細胞骨架的重塑[4]。相關研究表明，SM22α與細胞增殖、遷移、氧化應激、炎癥反應等密切相關[5]，LIANG等[6]發現SM22α在結直腸癌患者中出現低表達，且低表達患者預后較高表達差。轉化生長因子-β1(TGF-β1)是轉化生長因子β超家族的多肽成員，可以以自分泌或旁分泌的方式通過細胞表面的受體信號途徑調節細胞的增殖、分化和凋亡[7]。相關文獻報道，TGF-β1在大腸癌組織中高表達，提示其可能與大腸癌的發生、發展、浸潤和轉移過程密切相關[8]，但目前關于SM22α和TGF-β1在結直腸癌組織中的表達水平及其與腫瘤侵襲轉移等方面研究較少?；诖?，本研究檢測了結直腸癌組織中SM22α和TGF-β1的表達水平，并探討其與腫瘤侵襲轉移的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析咸陽市中心醫院2018年4月至2019年5月期間收治的結直腸癌患者的臨床資料。納入標準：①均符合結直腸癌診斷標準[9]；②均經影像學和病理學檢查確診為良性或惡性腫瘤；③均經手術治療，且術前均未接受放化療者；④臨床病例資料完整者。排除標準：①合并其他惡性腫瘤患者；②伴有其他消化系統重大疾病者；③心、肝、腎功能不全者。依據納入和排除標準共納入104例結直腸癌患者，其中男性65例，女性39例；年齡42～63歲，平均(52.51±5.35)歲；高分化29例，中分化35例，低分化40例；Dukes分期：A期/B期46例，C期/D期46例。臨床隨訪過程中，31例出現侵襲轉移情況。以同期于本院接受治療的87例良性結直腸腫瘤患者作為對照組，其中男性56例，女性31例；年齡44～67歲，平均(55.42±5.91)歲。兩組患者的年齡、性別等一般資料比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究獲得醫院倫理委員會批準。

1.2 檢測方法 于術后30 min內采集所有患者標本，應用免疫組化S-P法檢測結直腸病變組織中SM22α和TGF-β1的表達。SM22α多克隆抗體購自美國AB-CAM公司，TGF-β1多克隆抗體購自上海雅吉生物科技有限公司，SM22α抗體濃度按照1∶150稀釋，TGF-β1抗體濃度按照1∶100稀釋。將組織切片置于pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖溶液中微波修復，自然冷卻后用磷酸鹽緩沖液(PBS)浸泡5 min×3次。DAB(北京中杉公司)顯色，蘇木精復染。實驗中均設陰性及陽性對照。

1.3 結果判定標準 TGF-β1染色標準以細胞核中出現清晰棕色或棕褐色棕黃色顆粒為陽性細胞，TGF-β1陽性細胞數大于10%為陽性表達；SM22α以細胞核中出現清晰棕色顆粒為陽性細胞，陽性細胞數大于10%為陽性表達[10-11]。

1.4 統計學方法 應用SPSS22.0統計學軟件進行數據分析。年齡等計量資料以均數±標準差(±s)表示，行t檢驗；性別、SM22α和TGF-β1陽性表達等計數資料比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Spearman秩相關分析；采用受試者特征曲線(ROC)評估SM22α和TGF-β1表達對結直腸癌患者腫瘤侵襲轉移的評估效能。以P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 研究組與對照組患者的SM22α和TGF-β1表達水平比較 研究組患者的SM22α陽性表達率明顯低于對照組，TGF-β1陽性表達率明顯高于對照組，差異均具有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 研究組與對照組患者的SM22α和TGF-β1表達水平比較[例(%)]

2.2 研究組不同Dukes分期患者的SM22α和TGF-β1表達水平比較 研究組A期/B期SM22α的陽性表達率明顯高于C期/D期，TGF-β1的陽性表達率明顯低于C期/D期，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 研究組不同Dukes分期患者的SM22α和TGF-β1表達水平比較[例(%)]

2.3 侵襲轉移組與非侵襲轉移組患者的SM22α和TGF-β1表達水平比較 侵襲轉移組的SM22α陽性表達率明顯低于非侵襲轉移組，TGF-β1陽性表達率明顯高于非侵襲轉移組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

表3 侵襲轉移組與非侵襲轉移組患者的SM22α和TGF-β1表達水平比較[例(%)]

2.4 SM22α和TGF-β1與腫瘤侵襲轉移的相關性 經Spearman秩相關分析結果顯示，結直腸癌患者SM22α水平與腫瘤侵襲轉移呈負相關(r=-0.471，P＜0.05)，TGF-β1水平與腫瘤侵襲轉移呈正相關(r=0.543，P＜0.05)。

2.5 結直腸癌患者SM22α、TGF-β1單獨及聯合檢測對腫瘤侵襲轉移的評估價值 ROC分析結果顯示，SM22α、TGF-β1單獨及聯合檢測判斷腫瘤侵襲轉移的ROC曲線下面積分別為0.647、0.676、0.739，檢測靈敏度分別為68.2%、72.7%、84.1%，特異性分別為61.3%、62.5%、63.7%，見表4和圖1。

表4 SM22α、TGF-β1單獨及聯合檢測對腫瘤侵襲轉移的評估價值

圖1 SM22α、TGF-β1以及聯合檢測對腫瘤侵襲轉移的ROC曲線圖

3 討論

目前，臨床對于結直腸癌的治療手段較為成熟，以手術切除為主，輔以放、化療等手段，在臨床取得一定治療效果。但近年來，我國結直腸癌死亡率仍在持續上漲。調查研究發現，腫瘤侵襲轉移是導致預后不良的主要原因[12]，嚴重威脅著患者的生命健康。早在20世紀50年代，研究者們就指出腫瘤的發生發展是一個多環節、多步驟的復雜過程。因此，尋找與腫瘤侵襲轉移的相關因子，實現對結直腸癌患者預后的早期監測，對于延長患者生命周期具有重要的臨床指導意義。

SM22α是一種分子量為22 kDa的重要細胞骨架蛋白，又稱為轉凝蛋白，于1987年首次從雞胗中分離所得[13]。有研究表明，SM22α可與細胞骨架的肌動蛋白相結合，參與血管平滑肌細胞骨架結構重塑。故在正常血管壁的血管平滑肌細胞中呈現高表達，而當血管內皮受損時，SM22α表達水平會降低甚至消失[14]。腫瘤侵襲和轉移的首要條件是血管新生，而SM22α在血管平滑肌細胞分化、收縮和血管新生內膜形成過程中起著重要作用。相關研究表明，SM22α在某些腫瘤組織中表達下調，可能是導致腫瘤組織新生血管形成的重要原因，可為腫瘤的遠處轉移提供更多的途徑[15-16]。TGF-β1是一種多肽結構的細胞因子，能夠參與細胞生長、分化、遷移過程，在多種腫瘤組織中呈現高表達[17-18]。徐榮偉等[19]研究表明，TGF-β1在大腸癌組織中高表達，這提示TGF-β1在大腸癌的發生、發展、浸潤和轉移過程中起著十分重要的作用。TGF-β1、SM22α均在血管新生中發揮著重要的作用，但迄今為止關于SM22α和TGF-β1在結直腸癌腫瘤侵襲轉移等方面相關研究報道較少。本研究結果顯示，研究組患者SM22α陽性表達率明顯低于對照組，TGF-β1陽性表達率明顯高于對照組；隨Dukes分期的增加，SM22α陽性表達率降低，而TGF-β1陽性表達率升高。以上結果提示SM22α和TGF-β1可能在結直腸癌的發生、發展中發揮著重要作用。本研究結果還顯示，侵襲轉移組SM22α陽性表達率低于非侵襲轉移組，而TGF-β1陽性表達率高于非侵襲轉移組，提示SM22α和TGF-β1可能與結直腸癌腫瘤侵襲轉移密切相關。進一步相關性分析顯示，SM22α與腫瘤侵襲轉移呈負相關，TGF-β1與腫瘤侵襲轉移呈正相關，說明隨著腫瘤侵襲轉移，SM22α呈現低表達，TGF-β1呈現高表達。分析其原因，細胞內外環境失衡和細胞功能紊亂是腫瘤侵襲轉移的重要環節，SM22α低表達可能影響細胞骨架動力學和調控網絡，從而導致細胞內外環境失衡和細胞功能紊亂，所以在腫瘤侵襲轉移過程中，SM22α呈現出低表達。血管新生是腫瘤發展及轉移中不可缺少的過程，TGF-β1可能通過影響血管內皮生長因子的表達，促進腫瘤血管新生，從而更有利于腫瘤侵襲轉移。經ROC分析顯示，SM22α、TGF-β1以及聯合檢測腫瘤侵襲轉移的ROC曲線下面積分別為0.663、0.690、0.731，檢測靈敏度分別為80.3%、78.6%、84.5%，特異性分別為60.8%、60.0%、61.8%，并且聯合檢測的ROC曲線下面積高于單項檢測，檢測靈敏度和特異性亦高于單項檢測，提示SM22α、TGF-β1檢測可用于評估結直腸癌患者腫瘤侵襲轉移情況，且聯合檢測評估效果更佳。

綜上所述，SM22α、TGF-β1與結直腸癌發生發展及腫瘤侵襲轉移密切相關，結直腸癌組織中SM22α的低表達及TGF-β1的高表達可預測腫瘤侵襲轉移情況，且兩者聯合檢測預測效果更佳。但SM22α、TGF-β1在結直腸癌腫瘤細胞侵襲轉移過程中的具體作用機制尚不清楚，仍需要做大量更加深入的研究，以期為臨床提供更加精準的診療依據，提高結直腸癌患者預后生存率。