長春鳊的胚胎和仔魚早期發育特征

顧海龍，楊智景，盧 程，顧 明，馮亞明*

(1.江蘇省農業科學院 泰州農科所，江蘇 泰州 225300； 2.泰州市水產技術指導站，江蘇 泰州 225300； 3.興化市水產技術指導站，江蘇 興化 225700)

0 引言

【研究意義】魚類的早期發育是一個高度動態變化的復雜過程，盡管發育模式基本類似，但不同物種的受精卵在性質、規格、發育進程等方面存在著一定的差異[1]。因此，開展魚類的早期胚胎發育研究對于魚類的孵化與培育具有重要意義。長春鳊(Parabramispekinensis)隸屬鯉科(Cyprinidae)、鳊屬(Parabramis)，俗稱長身鳊、草鳊，廣泛分布于全國各大水系[2]。近年來由于野生資源逐年銳減，長春鳊越來越受到學者的關注[3]，已被列入《國家重點保護經濟水生動植物資源名錄(第一批)》，但其當前仍是少數未完全熟化推廣全人工繁殖技術的長江經濟魚類之一,開展長春鳊早期發育研究，對其實現人工繁育具有重要現實意義?！厩叭搜芯窟M展】關于魚類早期發育的研究已有很多。胡雪松等[4]研究黑龍江三角魴(Megalobramaterminalis)的胚胎和早期仔魚發育發現，在水溫(23.5±1.0)℃時,黑龍江三角魴胚胎從受精到出膜歷時30 h 10 min，歷經7個主要發育階段(卵裂前期、卵裂期、囊胚期、原腸胚期、神經胚期、器官形成期、出膜期), 25個發育時期。蔣國民等[5]以團頭魴滅活精子為誘導，采用熱休克染色體加倍處理方法進行錦鯉雌核發育，發現水溫(20±1)℃時，錦鯉受精卵50 min后開始卵裂，6 h后出現囊胚期，18 h后出現原腸胚期，30 h后出現神經胚期，39 h后器官開始形成，約3 d后可以脫膜孵化?！狙芯壳腥朦c】長春鳊作為鳊魴屬魚類中唯一的鳊屬魚，其早期發育研究鮮見報道?！緮M解決的關鍵問題】通過干法受精獲得受精卵，觀察并分析長春鳊從受精卵到晚期仔魚的全部發育時序，旨在為長春鳊的人工繁殖和苗種培育提供參考資料。

1 材料與方法

1.1 供試長春鳊

試驗在靖江市濱江水產良種場的長江名特優水產苗種繁育中心進行。供試親魚為該良種場自繁培育的長江第三代長春鳊。2020年5月22日，選擇體質健壯、規格相近且性腺發育至Ⅳ期末的長春鳊親本60尾(雌雄比=1︰1)，體長(37.5±1.3)cm，體重(1 110.2±80.4)g。采用一次注射法進行人工繁殖，雌魚按劑量HCG+DOM+LHRH-A2=(500 IU+2.5 mg+5 μg)/ kg注射催產激素，雄魚劑量減半。通過干法受精獲得受精卵，開展胚胎發育觀察。

1.2 胚胎發育觀察

體視顯微鏡下連續觀察胚胎發育時序，每個發育時期隨機抽取20～30個受精卵，以50%個體出現新特征作為發育時期的劃分標準，詳細記錄各期特征。

1.3 數據處理

利用Excel 2013進行數據處理，結果以平均數±標準差表示。

2 結果與分析

2.1 長春鳊成熟卵的形態

長春鳊成熟卵屬漂浮性，淡青色，光滑透明，卵圓形，卵無黏性，遇水吸水約30 min后膨脹至最大，卵黃囊徑平均(1.15±0.15) mm，卵膜徑平均(2.12±0.58) mm。

2.2 長春鳊胚胎發育各階段的歷期及形態特征

人工繁育的長春鳊胚胎發育期可概括為胚盤形成期、卵裂期、囊胚期、原腸胚期、神經胚期及器官分化期等6個階段，歷時35 h 10 min。各階段主要特征及在水溫(26±0.5)℃環境下所需的時間見表1，各階段形態特征見圖1。

2.2.1 胚盤期 長春鳊的卵受精后約42 min，卵內原生質移動集中到動物一極，并隆起形成小丘狀的胚盤(圖1-1)。

2.2.2 卵裂期 受精后55 min，隆起的胚盤中央凹陷，分裂形成2個大小相等的細胞，進入2細胞期(圖1-2)。10 min后，第二次分裂完成，分裂成2×2排列的4個細胞，進入4細胞期(圖1-3)。此后繼續分裂，先后經歷8細胞期(圖1-4)、16細胞期(圖1-5)、32細胞期(圖1-6)等。在進行第6次分裂后，分裂成的64個細胞大小不均一，排列也開始不甚整齊。細胞數繼續呈指數增加，受精后約2 h 25 min，分裂成的細胞越來越小，布滿動物極，形成類似桑葚的多細胞胚(圖1-7)。

2.2.3 囊胚期 隨著細胞的進一步分裂增加，受精后約3 h，卵的動物極高高隆起，類似一頂高帽，進入囊胚早期(圖1-8)。隨后的1 h 45 min內，囊胚細胞開始擴散至扁平，緊貼與卵上，進入囊胚晚期(圖1-9)。

2.2.4 原腸胚期 緊貼于卵上囊胚細胞開始下包，受精后6 h 15 min，內外胚層分化，下包的邊緣增厚形成胚環(圖1-10)，隨著下包的繼續，胚環的一側形成盾裝凸起的胚盾(圖1-11)，

當下包至卵黃的4/5處時，即受精后8 h 20 min時，出現胚體雛形(圖1-12)。

2.2.5 神經胚期 受精后9 h 58 min，囊胚下包至植物極時，形成卵黃栓(圖1-13)，胚體基本成型，隱約可見神經版雛形，進入神經胚期。受精后10 h 40 min，卵黃囊逐漸被全部包裹，胚孔閉合(圖1-14)。

2.2.6 器官分化期 受精后11 h 40 min，胚體形成，肌節初現，逐漸清晰，此后數量不斷增加(圖1-15)。受精后12 h 27 min，胚體頭部前端膨大略抬起，眼囊出現，橢圓形(圖1-16)。受精后14 h，胚體尾端慢慢形成尾芽，且出現一圈不太明顯的鰭褶，其為尾鰭原基(圖1-17)。約20 min后，胚體頭部出現小泡狀耳囊(圖1-18)。眼囊逐漸凹陷呈杯狀，受精后16 h 45 min，眼晶體形成(圖1-19)，受精后19 h 55 min，耳石也逐步形成(圖1-20)。受精后22 h 28 min，頭部前下方，緊貼卵黃的部位出現長葫蘆狀的心臟原基(圖1-21)。又經歷1 h 25 min，整個胚體出現頻率越來越高的間歇性顫動，進入肌肉效應期(圖1-22)。隨著胚胎的進一步發育，眼球內側出現深色色素，胚體由顫動變為在卵膜內的不停轉動，胚體體長增加至約4 mm，最終卵膜破裂，仔魚出膜(圖1-23)，受精后35 h 10 min，出膜率達50%。

2.3 長春鳊胚后發育過程及形態特征

長春鳊胚后發育過程可分為卵黃囊仔魚和晚期仔魚2個階段，發育期間由內源性營養逐漸轉化為外源性營養。

2.3.1 卵黃囊仔魚 出膜后到卵黃囊完全吸盡階段(圖2-a)，包括卵黃囊尚未耗盡但已開始依賴外源性營養的混合營養階段，歷時約2 d。卵黃囊仔魚體色透明，全長5.03～6.85 mm，肌節約42對。卵黃囊前半部橢圓，向后延伸變細變尖，從后端開始逐漸消耗消失。頭部逐漸脫離卵黃囊并伸直，眼徑約0.4 mm，眼上出現黃色素沉著，眼下黑點清晰。心臟逐漸發育完全，心房、心室清晰，心率160次/min。血液透明，顯微鏡下可見尾靜脈和主動脈間的血液流動。鰭褶出現并逐步分化發育。

2.3.2 晚期仔魚 該階段主要以鰾室的形成及各鰭的分化為標志(圖2-b)。自卵黃囊完全消失，完全依賴外源性營養開始，到鱗片出現為止，歷時約25 d。晚期仔魚全長10.25～14.70 mm，體色加深。已開口，頭部背面顏色進一步加深，出現呈“八”字形的色素帶。視覺發達，眼烏黑外突，耳囊明顯，耳石清晰可見。鰓蓋逐步遮蓋住鰓絲。鰾室形成，背鰭、尾鰭、臀鰭、腹鰭依次分化發育。腸管清晰可見，仔魚攝食行為強烈，腸道飽滿。

注：a為卵黃囊仔魚，b為晚期仔魚。

3 討論

研究表明，長春鳊的發育過程與其他常養魚類[6-8]類似，但長春鳊的卵無黏性，與團頭魴[9-10]、三角魴[4]及厚頜魴[11]均不同。長春鳊的孵化可直接采用草魚的孵化設備和方法，將收集好的受精卵直接倒入孵化環道中，充氧流水孵化即可。研究發現，鳊的卵黃囊直徑尤其是吸水膨脹后的卵膜直徑遠遠大于團頭魴[9]等其他魚類，且剛出膜的魚苗體長也大于團頭魴[10]。較大的卵黃囊和魚苗意味著前期親本需要更多的營養積累，前期的強化培育極為重要；同時，卵膜大、出膜時間短，造成鳊在孵化出膜期間，水質容易變差，需要更頻繁的換水和更大的換水量，防止因水質問題而降低出苗率。出膜后及時投喂輪蟲、枝角類等生物餌料。

受精卵的孵化是在孵化酶作用下發生的一系列生理生化過程[12-13]。孵化酶的活性直接影響魚類胚胎發育速度，而孵化酶的分泌和活性又受水溫主要調控，因此，水溫是魚類胚胎發育速度的主要影響因子之一[14]。在適宜的孵化溫度范圍內，溫度越高，孵化時間越短。與鰱鳙、團頭魴、草魚等大多數常見淡水魚類一樣，長春鳊的最適孵化水溫為22～26℃。在發育所需時間上，長春鳊從受精卵到出膜所需時間相對較短，一方面可能是品種間的差異性，另一方面是試驗期間的水溫較高，為(26±0.5)℃。值得注意的是，在胚胎發育進程上，長春鳊的胚體肌肉效應期出現在眼晶體形成之后，與鰱[15]、鳙[16]、刀鱭[17]等魚類一致，但與團頭魴[10]、厚頜魴[11]等不同。

4 結論

長春鳊的早期發育過程可概括為胚盤形成期、卵裂期、囊胚期、原腸胚期、神經胚期及器官分化期等6個階段，在水溫(26±0.5)℃環境下，歷時約35 h 10 min；胚后發育過程可分為卵黃囊仔魚和晚期仔魚2個階段，歷時約25 d。在發育時序上，與魴屬魚之間存在著一定的差異，肌肉效應期出現在眼晶體形成之后。