c-Met 及MACC1 在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及臨床意義

鄭時玉，郭亞男

（寧波市臨床病理診斷中心組織病理科，浙江 寧波 315000）

甲狀腺癌（thyroid carcinoma）是臨床十分常見的惡性腫瘤，約占所有內分泌腫瘤的95%。甲狀腺癌的發病率呈逐年上升的趨勢，對人類健康構成了嚴重威脅。在甲狀腺癌的分型中，甲狀腺乳頭狀癌（PTC）約占所有甲狀腺癌的80%，其發病率遠高于其他病理類型。雖然大部分患者經手術、放射碘治療后預后較好，但仍有少數患者會發生遠處轉移。因此，有必要進一步深入研究甲狀腺癌的致病機理及其相關分子機制，為甲狀腺癌的治療提供新的靶點和方向。結腸癌轉移相關基因（metastasis-associated in colon cancer 1，MACC1）是2009 年Ulrike S等[1]用差異RT-PCR 的方法分析結腸黏膜、結腸癌原發灶、轉移灶之間基因表達的異同，進而發現了新基因MACC1。c-Met 是具有酪氨酸激酶活性的跨膜受體，它與HGF 結合后，胞內區發生自身磷酸化，從而激活下游信號通路，導致細胞發生增殖、侵襲等生物學行為。MACC1 在細胞核內與c-Met 的啟動子結合后可在轉錄水平上調節c-Met 的表達[1]。目前，c-Met 及MACC1 蛋白已被報道在胃癌[2]、肺癌[3]、結腸癌[4]、聲門癌[5]、骨肉瘤[6]等中存在高表達水平，并被證實與患者病理參數密切相關；然而在甲狀腺乳頭狀癌中表達較少，尤其是MACC1 在甲狀腺癌中的表達罕見報道。本研究通過檢測甲狀腺乳頭狀癌組織中c-Met 及MACC1 蛋白的表達，旨在探討其與甲狀腺乳頭狀癌臨床病理特征的相關性。

1 材料與方法

1.1 材料 收集2014 年1 月-2020 年6 月寧波市臨床病理診斷中心的甲狀腺石蠟標本90 例，其中甲狀腺乳頭狀癌60 例，良性甲狀腺疾病30 例（甲狀腺腺瘤15 例，結節性甲狀腺腫15 例）。甲狀腺癌患者年齡26～74 歲，其中男15 例，女45 例。所有抽取病例術前均未進行放化療及免疫治療。本研究已通過中心倫理委員會批準，取得患者知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 主要試劑 c-Met 兔抗人多克隆抗體及MACC1兔抗人多克隆抗體均為abcam 公司產品。SP 試劑及DAB 顯色試劑盒均為北京中杉金橋生物技術有限公司產品。

1.3 方法 所有石蠟以4 μm 厚度進行連續切片，經脫蠟至水。免疫組化染色采用EnVison 兩步法：檸檬酸鹽緩沖液高壓熱修復，PBS 浸洗2 次，各5 min，0.3%H2O2室溫孵育10 min，抗原熱修復，以1∶200 稀釋比例滴加c-Met 兔抗人多克隆抗體或MACC1 兔抗人多克隆抗體后4 ℃過夜，PBS 浸洗3 次，各5 min，滴加生物素標記二抗室溫孵育30 min，PBS 浸洗3 次，各5 min，DAB 顯色，蘇木精復染，常規脫水，用中性樹脂封片。分別以膀胱癌及結腸癌石蠟組織作為陽性對照，以PBS 代替一抗作為陰性對照。

1.4 結果判定 c-Met 及MACC1 蛋白的陽性染色呈棕黃色或棕褐色，c-Met 蛋白主要定位于細胞膜和細胞質，MACC1 蛋白主要定位于細胞質。染色強度計分：0 分為無染色，1 分為淡黃色，2 分為棕黃色，3分為棕褐色；染色范圍計分：無染色細胞為0 分，＜25%為1 分，25%～50%為2 分，＞50%為3 分；總分為兩者相加，0～2 分記為陰性（-），3～6 分記為陽性（+）。染色結果判讀由2 位病理醫師獨立完成。

1.5 統計學處理 應用SPSS 19.0 統計軟件。免疫組化結果表達強度的比較及與臨床病理參數之間的關系采用χ2檢驗。表達結果的相關性分析采用Spearman 相關。以P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 c-Met 及MACC1 在甲狀腺乳頭狀癌中的表達c-Met 蛋白主要定位于甲狀腺濾泡上皮細胞的細胞膜及細胞質，見圖1。甲狀腺乳頭狀癌中c-Met 蛋白陽性率為51/60（85.00%），高于良性甲狀腺疾病中的6/30（20.00%），差異有統計學意義（χ2=36.388，P＜0.05）；MACC1 蛋白主要定位于甲狀腺濾泡上皮細胞的細胞質，見圖2。甲狀腺乳頭狀癌中MACC1 蛋白表達陽性率為40/60（66.67%），高于良性甲狀腺疾病中的2/30（6.67%），差異有統計學意義（χ2=28.929，P＜0.05）。

圖1 c-Met 在甲狀腺乳頭狀癌及良性甲狀腺組織中的表達（EnVision×100）

圖2 MACC1 在甲狀腺乳頭狀癌及良性甲狀腺組織中的表達（EnVision×100）

2.2 c-Met 蛋白及MACC1 蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中表達的相關性 Spearman 相關性檢驗顯示，在甲狀腺乳頭狀癌中c-Met 蛋白與MACC1 蛋白的表達呈正相關（r=0.394，P＜0.05），見表1。

表1 c-Met 和MACC1 表達的相關性

2.3 c-Met 蛋白及MACC1 蛋白與甲狀腺乳頭狀癌患者臨床病理特征的關系 MACC1 蛋白在有無淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌的陽性表達率比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；c-Met 蛋白在有無淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌的陽性表達率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；而不同年齡、性別、腫塊大小c-Met 蛋白及MACC1 蛋白陽性表達率比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 c-Met 和MACC1 在不同患者中的表達（n，%）

3 討論

c-Met 基因定位于人7 號染色體長臂（7q31），其編碼產物主要存在于上皮細胞膜和細胞質中，是受體酪氨酸蛋白激酶家族中的成員，包含7 個外顯子和6 個內含子。MACC1 作為HGF/c-Met 信號通路的一個關鍵調節因子，在細胞核內與c-Met 的啟動子結合后可在轉錄水平上調節c-Met 的表達[1]。近幾年國內外研究發現，MACC1、c-Met 蛋白在結腸癌[4]、胃癌[2]、肺癌[3]、骨肉瘤[6]等多種常見腫瘤中高表達，且與腫瘤的發生發展有相關性。另外最近幾年，針對c-Met 及MACC1 與疾病發生的具體機制也在做深入的研究[7-10]，胃癌及膽管癌中MACC1 可以通過TWIST1/VEGF-A 信號通路促使血管形成，從而誘導腫瘤的進展[11，12]；Zheng D 等[13]證實LncRNA MACC1-AS1/MACC1 通過調節新陳代謝活動促進膠質瘤的發展。還發現MACC1 除了之前發現的和HGF/MET 通路的關系外，還與SP1[14]等其他信號分子相關。Hohmann T 等[15]發現MACC1 還可以促進膠質母細胞瘤細胞運動的改變。還有學者探討了MACC1 的多態性對肝細胞肝癌的影響及臨床參數相關性[16]。國內也有報道證實c-Met 在甲狀腺乳頭狀癌中高表達[17，18]。馬澤忠等[19]發現在甲狀腺乳頭狀癌的血清中MACC1 高表達。也有文獻報道在乳腺癌中血清MACC1 是一個新的預測指標[20]。但MACC1蛋白在甲狀腺乳頭狀癌石蠟切片中的表達罕見報道。

本研究結果顯示，c-Met 及MACC1 蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的陽性表達率均高于良性甲狀腺疾病，差異有統計學意義（P＜0.05）；Spearman 相關性檢驗結果表明，c-Met 與MACC1 蛋白在甲狀腺乳頭狀癌中的表達呈正相關（r=0.394，P＜0.05）；MACC1 蛋白在有無淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌的陽性表達率比較，差異有統計學意義（P＜0.05）；而不同年齡、性別、腫塊大小c-Met 蛋白及MACC1 蛋白陽性表達率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；c-Met 蛋白在有無淋巴結轉移的甲狀腺乳頭狀癌的陽性表達率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。既往的文獻報道均顯示c-Met 在甲狀腺乳頭狀癌中高表達，但c-Met與不同臨床病理參數如之間的關系不同，分析原因可能與選取標本不同、試劑廠商不同、實驗條件不同等多因素相關，今后還需要收集更多標本及用更多論文數據來綜合分析判斷。c-Met 和MACC1 二者在甲狀腺乳頭狀癌發生、發展過程中的具體協作機制有待進一步研究。

綜上所述，MACC1 及c-Met 蛋白可能參與了甲狀腺乳頭狀癌的發生發展過程，在甲狀腺乳頭狀癌的發生及演進過程中發揮重要的作用，MACC1 的發現為HGF/c-Met 通路研究提供了新的思路，為今后甲狀腺癌的診斷及靶向治療提供新的方向。