苯乙基間苯二酚包合物溶液的含量測定及其穩定性研究

潘繼飛 ,王麗麗 ,祝美華 ,馬亞茹 ,封 靜 陳建英 *

（1.山東省藥學科學院 新型緩控釋制劑與藥物靶向遞送系統山東省工程研究中心，山東 濟南 250101；2.國家藥監局藥物制劑技術研究與評價重點實驗室，山東 濟南 250101；3.山東省藥學科學院 山東省皮膚與黏膜給藥工程技術研究中心，山東 濟南 250101；4.山東福瑞達醫藥集團有限公司 山東省黏膜與皮膚給藥技術重點實驗室，山東 濟南 250101）

苯乙基間苯二酚（phenylethyl resorcinol，PR）是新型高效美白活性物質，于2012年被美國食品藥品監督管理局正式批準作為化妝品原料使用，是目前報導的美白活性最高的酪氨酸酶抑制劑之一，通過抑制酪氨酸酶的活性，能有效減少黑色素產生，同時具有較強的抗氧化能力，且安全性較高[1-3]。

PR的化學名為4-（1-苯乙基）-1,3-苯二酚，為白色或米黃色粉末，結構類似于酪氨酸，同時具有類似氫醌的雙酚結構，常溫下微溶于水，易溶于丙二醇及極性油脂，在光照下不穩定，其極差的水溶性和穩定性限制了其在化妝品領域的應用。已有報導將PR做成脂質體，解決其難溶于水的問題并提高穩定性[4-12]。通過包合技術也可解決此問題，采用羥丙基倍他環糊精（hydropropyl-β-cyclodextrin，HP-β-CD）制備的PR包合物（HP-β-CD-PR）可有效提高其在水中的溶解度[13-14]，但其穩定性仍需進一步提高。本文建立包合物溶液中PR的含量測定方法，對包合物溶液的穩定性進行研究，為PR應用于開發化妝品溶液產品奠定基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器設備

高效液相色譜儀（LC-20AT型泵、SPD-M20A型檢測器、Lab Solution液相色譜數據工作站，日本島津公司）；XA105DU分析天平（Mettler Toledo）；PB-10 pH計（賽多利斯）；藥品強光照射試驗箱（重慶永生實驗儀器廠）；恒溫恒濕箱（BINDER）。

1.2 試劑材料

PR（九鼎化學QVWFYQQ，純度≥95 %）；HP-β-CD（藥用輔料，山東濱州智源生物科技有限公司，批號：HP20210114），乙二胺四乙酸二鈉（EDTA，藥用輔料，湖南爾康制藥有限公司，批號：F20060009），乙腈、甲醇為色譜純試劑；其余為分析純試劑。

2 方法與結果

2.1 PR的含量測定

2.1.1 溶液配制 稀釋溶劑:甲醇:0.1 % H3PO4=50:50。

空白輔料溶液：照PR溶液劑處方配制不含PR的空白輔料溶液。精密量取1 ml，置入25 ml量瓶，用稀釋溶劑稀釋至刻度，搖勻。

對照品溶液的配制：精密稱取PR約20 mg，置入100 ml量瓶，用適量稀釋溶劑溶解，并稀釋至刻度，搖勻。制成每1 ml中含有PR約0.2 mg的對照品溶液。

供試品溶液的配制：精密量取PR溶液劑1 ml，置入25 ml量瓶，用稀釋溶劑稀釋至刻度，搖勻。

2.1.2 色譜條件 色譜柱：Waters XBridge C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）。流動相：甲醇- 0.1 %磷酸溶液（65:35），檢測波長280 nm，柱溫30 ℃，流速1.0 ml/min，進樣體積10 μl。理論板數按PR峰計算應不低于3000，拖尾因子不高于1.50。

2.1.3 波長的選擇 取PR對照品溶液，DAD檢測器在200～400 nm的波長范圍內進行掃描。結果表明，PR有2個紫外吸收峰，波長分別為206 nm和280 nm，206 nm波長過低，因此選擇280 nm為檢測波長。

2.1.4 專屬性試驗 分別取空白輔料溶液、對照品溶液及供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀并記錄色譜圖。結果表明，PR保留時間約4.1 min，空白輔料溶液在PR出峰的位置無色譜峰出現，對測定無干擾，表明本色譜條件用于測定本品中PR的含量的專屬性良好。見圖1～3。

圖1 空白輔料溶液HPLC圖譜

圖2 PR對照品溶液HPLC圖譜

圖3 供試品溶液HPLC圖譜

2.1.5 線性試驗 精密稱取PR對照品約125 mg，置入50 ml量瓶，用適量稀釋溶劑使完全溶解，并稀釋至刻度，搖勻；精密量取0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml分別置入25 ml量瓶，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液各10 μl，注入液相色譜儀，記錄峰面積及色譜圖，以峰面積A為縱坐標，濃度C為橫坐標，用最小二乘法做線性回歸，求得PR的線性回歸方程為A=6 739 336 C+1 899，r=1.0000。結果表明，PR濃度在0.0507～0.3044 mg/ml濃度范圍內呈線性關系。

2.1.6 精密度試驗 精密量取PR對照品溶液10 μl注入液相色譜儀，連續操作6次，記錄峰面積和色譜圖，計算RSD為0.06 %，表明儀器重復性良好。取同一批樣品，連續配制6份供試品溶液，記錄峰面積及色譜圖，計算含量RSD為0.41 %，表明方法重復性良好。

2.1.7 準確度試驗 精密稱取PR對照品適量（約相當于PR處方量的80 %，100 %，120 %），按處方加入其它輔料，分別平行配制3份，加入稀釋溶劑配制成供試品溶液。按測定方法進行測定，計算準確度，用回收率表示。結果見表1。

表1 準確度試驗結果

2.2 PR包合物溶液的制備

以質量比為1:7分別稱取PR與HP-β-CD加入pH 5.5的緩沖體系中，攪拌至PR完全溶解，加入抗氧劑和防腐劑，經0.45 μm濾膜濾過，制備濃度為0.5 %的PR包合物溶液。測定包合物溶液中PR的含量，計算PR包合率為99.5 %。

2.3 PR包合物的穩定性試驗

將0.5 % PR包合物溶液分別用無色中硼硅玻璃安瓿（無色玻）、棕色中硼硅玻璃瓶（棕玻）和棕色PET塑料瓶（棕塑）3種包材進行包裝并于高溫（60 ℃），光照（冷白熒光燈：5000 lux；近紫外燈：90 μW/cm2），凍融（25 ℃ 7 d→4 ℃7 d→-20 ℃ 7 d→4 ℃ 7 d→25 ℃ 7 d）和長期試驗（25 ℃，3個月）條件下進行考察，結果（見表4）表明，3種包裝的樣品各指標均無顯著變化，樣品穩定性較好。

表2 穩定性考察結果

3 討論

HPLC測定PR含量方法已有報導[15-18]，本研究建立了新的HPLC方法，經方法學驗證，該方法專屬性好、準確度和精密度高、適用性強，與已有方法相比，更加方便、快捷，為PR溶液產品的質量控制提供了新的技術支持。PR難溶于水，光照易變色的性質增加了其應用難度，本研究制備了PR的HP-β-CD包合物溶液，解決了其中溶解度差的問題，光照穩定性也顯著提高，用無色玻璃安瓿灌裝的樣品光照10 d溶液顏色無顯著變化，對3種不同包材灌裝的樣品進行了初步穩定性研究，結果表明，經光照和高溫10 d、凍融5周和25 ℃ 3個月考察后，溶液的顏色、澄清度、pH值和含量均無顯著變化，溶液基本保持穩定。完整的穩定性和安全性有待進一步試驗研究。