云忠祥 譚亮 冀恬 李玉林 皮立
己酸乙酯是濃香型白酒的主體香,其含量影響著濃香型白酒的品質。GB/T10345-2022《白酒分析方法》建議采用內標法進行己酸乙酯含量的測定,而氣相色譜外標法具有簡單、快速、準確、穩定等優點,比較適合于大批量白酒中己酸乙酯的測定。為此,本研究利用氣相色譜外標法測定濃香型白酒中己酸乙酯含量,并通過外標法和內標法對己酸乙酯作出分析比較,結果表明內標法與外標法無顯著性差異,而且使用外標法檢測己酸乙酯可以簡化操作步驟,提升檢測效率,符合現代檢測技術的要求,值得推廣,并建議在國家標準中增加外標法測定白酒中己酸乙酯的方法。
一、試劑與儀器
1.試劑。己酸乙酯(色譜純,純度≥99.9%;CSA號:123-66-0;批號:E808752-100mL),上海麥克林生化科技有限公司;乙酸正戊酯(色譜純,純度≥99.7%;CSA號:628-63-7;批號:R109075-100mL),上海麥克林生化科技有限公司;乙醇(色譜純,純度≥99.9%;CSA號:64-17-5;批號:20221013306),山東禹王新材料科技有限公司。
2.儀器。AgilentGC-7890B氣相色譜,配有7683自動進樣器、氫火焰離子化檢測器FID,美國安捷倫公司;梅特勒-托利多MS205DU精密電子天平,瑞士MettlerToledo公司;QL-861渦旋振蕩器,海門市其林貝爾儀器制造有限公司;高純氮氣(純度≥99.999%)、高純氫氣(純度≥99.999%)、GA-2000A低噪音空氣泵,北京中興匯利科技發展有限公司。
二、試驗與方法
1.溶液配制。(1)己酸乙酯儲備液25000mg/L,準確稱取2.50g己酸乙酯至100mL容量瓶中,用乙醇溶液(50%)定容至刻度,混勻備用。(2)乙酸正戊酯儲備液20000mg/L,準確稱取2.00g乙酸正戊酯至100mL容量瓶中,用乙醇溶液(50%)定容至刻度,混勻備用。(3)分別吸取己酸乙酯0.1mL、0.2mL、0.4mL、0.8mL、1.6mL、3.2mL于5個10mL容量瓶中,用乙醇溶液(50%)定容,充分混勻,配制成250mg/L、500mg/L、1000mg/L、2000mg/L、4000mg/L、8000mg/L的系列工作液,混勻備用。內標法己酸乙酯系列標準工作液需要在定容后加入0.1mL乙酸正戊酯內標溶液,混勻備用。
2.氣相色譜條件。進樣口溫度:250℃;檢測器溫度:250℃;進樣量:1μL;分流比:1:37;載氣:氮氣;柱流速:1mL/min;色譜柱程序升溫:35℃(保持4min),以5℃/min升溫至60℃(保持4min),以10℃/min升溫至150℃(保持2min),再以15℃/min升溫至210℃(保持6min);色譜柱:LZP-930白酒分析專用柱(柱長60m×內徑0.53mm×膜厚0.25mm)。
3.樣品測定。吸取酒樣于10mL容量瓶中,內標法需要在樣品中加入0.1mL乙酸正戊酯內標溶液,混勻測定。外標法按上述色譜條件將標液測定,以保留時間定性己酸乙酯,以濃度為縱坐標、己酸乙酯的峰面積為橫坐標作一曲線。內標法己酸乙酯系列標準工作液需要在定容后加入0.1mL乙酸正戊酯內標溶液,以濃度為縱坐標、己酸乙酯的峰面積與乙酸正戊酯的峰面積之比為橫坐標作一曲線。白酒樣品直接進行6次樣品平行分析。
三、結果與分析
1.己酸乙酯的色譜分析圖。外標法和內標法測定白酒中己酸乙酯的色譜圖詳見圖1。在采用內標法和外標法時,己酸乙酯的保留時間均為16.401min,乙酸正戊酯的出峰時間為13.656min,其特征峰明顯,兩者互不干擾,分離度好。
根據檢測結果做線性回歸分析,并得出標準曲線方程,以信噪比為3(S/N=3)計算檢出限,線性范圍、相關系數及檢出限詳見表1。結果表明,己酸乙酯標準曲線具有很好的線性關系,其檢出限遠低于該目標物在所檢測白酒中的含量,能夠滿足濃香型白酒中己酸乙酯的檢測要求。
2.內標法分析結果。選取六種不同濃度的濃香型白酒,每個樣品平行取6次平行樣進行測定,內標法分析結果詳見表2。
3.外標法分析結果。選取6種不同濃度的濃香型白酒,每個樣品平行取6次平行樣進行測定,外標法分析結果詳見表3。從兩種測定方法對6種不同濃度的白酒的檢測結果來看,其相對標準偏差(RSD)范圍均小于1%,符合日常檢測要求,說明兩種檢測方法的準確度差別不大。
4.精密度和回收率試驗。方法的精密度以測定待測組分含量的相對標準偏差(RSD)來評價。將6種濃香型白酒進行6次樣品平行分析,計算相對標準偏差(RSD),結果表明,己酸乙酯相對標準偏差(RSD)在0.3%-0.78%,說明外標法具有良好的精密度。
方法的準確度是通過待測組分在不同濃度下的回收率來評價。選取白酒樣品2#和5#,以白酒平行6次樣品分析的結果平均值作為本底值,添加與樣品含量相當的水平濃度,對加標樣品進行平行6次測定,分析結果詳見表4。由表4可知,回收率為98%-103%,符合GB/T27404-2008《實驗室質量控制規范食品理化檢測》的要求,說明本方法的測定結果準確可靠。
5.內標法與外標法的結果比較。選取不同濃香型白酒樣品,分別按外標法與內標法進行比對實驗,結果見表5。根據表6的數據進行兩種方法成對數值之間的t分布檢驗,看其在95%的置信度水平中是否存在顯著性差異。
兩方法絕對差值的平均值dˉ=(0.0035+ 0.002+0.001+0.001+(-0.001)+0.002+(-0.002))/6=0.00075;0.0015;t==1.23。查t分布表可知:當自由度n=6、置信度為0.95時,t(6,0.95)=1.94,實際t值小于t(6,0.95),故兩種方法之間無顯著性的差異。因此,采用外標法測定濃香型白酒中的己酸乙酯也能取得很好的分析結果。
基金項目:青海省應用基礎研究項目“青海牦牛肉風味組學及其相關基因挖掘”(2020-ZJ-753)。
作者簡介:云忠祥(1990-),男,回族,青海大通人,助理工程師,碩士研究生,研究方向為檢驗檢測技術。
通信作者:皮立(1972-),男,漢族,江西樟樹人,副研究員,博士,研究方向為食品分析技術。