石榴提取物鞣花酸乳膏劑的制備工藝初探*

劉 月,范高福,姚琪琪,胡 婷,鄭 斌

(1.合肥職業技術學院生物工程學院,安徽合肥 238000;2.合肥師范學院化學與化學工程學院)

石榴屬于石榴科植物,不僅作為水果食用,也有極高的藥用價值,其根、果皮、葉、花、籽均可入藥。文獻報道石榴中存在122種以上生物活性化合物[1-2],其中果皮富含多酚類、生物堿類和單寧類等成分,其中有效成分之一鞣花酸,具有消炎、抗氧化、保護腎臟、抗腫瘤、抗敏、止血等藥理作用,已有石榴皮鞣花酸片劑等固體制劑劑型的開發應用[3-7]。

據藥品監督管理局公開數據顯示外用制劑中乳膏劑占約50 %[8],表明乳膏劑深受患者接受。伴隨中醫講究“內病外治”,軟膏劑外用治療,也備受認可[9]。乳膏制劑具有制劑成型穩定,不良反應少,無肝臟首過效應,胃腸道破壞較小及攜帶使用方便等優勢廣泛用于臨床。但乳膏劑需在皮膚上涂抹給藥,對其基質要求應細膩潤滑,且易于涂布,尚需對其基質配方及制備工藝進行篩選[10]。本文以自制的石榴皮提取物鞣花酸為原料,對制備軟膏劑的制備工藝及質控標準進行初步探討。

1 材料與方法

1.1實驗儀器 L5/L5S-L6-L6S紫外可見分光光度計(上海儀電分析儀器有限公司);FA-1004型電子天平(天津天馬衡基儀器有限公司);KQ-500型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司);TD4臺式離心機(湖南凱達科學儀器有限公司);HH-4數顯恒溫水浴鍋(常州丹瑞實驗儀器設備有限公司);SHZ-D(Ⅲ)循環式真空泵(河南省予華儀器有限公司)等。

1.2實驗試藥 自制石榴皮提取物鞣花酸(純度為45 %);鞣花酸對照品(sigma);藥用級別阿拉伯樹膠粉;白凡士林;其他分析純試劑有液體石蠟;硬脂醇(十八醇);單硬脂酸甘油酯;十二烷基硫酸鈉;丙三醇;尼泊金;吐溫-80等。

1.3實驗方法

1.3.1基質的篩選 (1)乳化劑的篩選:乳化劑是制備乳膏劑重要成分,常用有O/W型乳化劑,包括十二烷基硫酸鈉、吐溫80和阿拉伯樹膠粉。根據離心實驗、耐寒耐熱實驗、膚感及外觀等結果來評判。具體步驟如下:①離心穩定性實驗:稱取3.5 g石榴皮提取物鞣花酸軟膏成品置于10 mL離心管中,低速離心30 min(轉速為3 000 r/min),考察分層、破乳及變粗等現象,并記錄打分。②耐熱耐寒實驗:稱取2.0 g石榴皮提取物鞣花酸軟膏成品置于離心管中,恒溫烘箱干燥,55 ℃觀察24 h,考察分層、破乳及變粗變軟等現象,并記錄打分;取2.5 g石榴皮提取物鞣花酸軟膏成品置于壓蓋離心管中,置于恒溫冰箱冷凍,-15 ℃中觀察24 h,考察分層、破乳及變粗變軟等現象,并記錄打分。③膚感:取適量的乳膏劑均勻涂在皮膚上,比較其鋪展難易性。④外觀;取適量的石榴皮提取物鞣花酸軟膏成品,考察其外觀顏色是否均勻或有變化。(2)正交篩選基質配方比例:在預實驗基礎上,參考相關文獻[11-13],選擇以硬脂醇(十八醇)、白凡士林、單硬脂酸甘油酯、液體石蠟、十二烷基硫酸鈉、丙三醇和純化水作為常用基質處方成分,以單硬脂酸甘油酯、白凡士林和液體石蠟作為乳膏劑成型性影響的關鍵因素進行基質配方比例篩選,建立三因素三水平正交實驗。然后參照L9(34)正交設計表,制作9種乳膏,觀察9種乳膏的外觀性狀及穩定性,按照基質篩選評分標準進行評分。見表1、表2。

表1 因素水平設計表(g)

表2 基質篩選評分標準

1.3.2制備方法 一般在制備乳膏劑時應根據乳膏劑的類型、制備用量和環境條件來選擇合適的制備方法。常用制備方法有熔合法和乳化法,均需要通過加熱輔助,利于制劑成型[9]。通過穩定性實驗對上述兩種方法的可行性進行對比研究,結果表明熔合法制備可行性好,其具體操作方法是:先稱取熔點最高的十二烷基硫酸鈉置于燒杯中加熱熔化,依次加入單硬脂酸甘油酯、白凡士林和硬脂醇,攪拌促使加熱熔化,等全部熔化混勻后,再滴入液體石蠟、丙三醇、純化水和尼泊金乙酯,充分攪拌,使其完全反應,混合均勻。再加入研細的適量主藥石榴皮提取物鞣花酸,同一方向攪拌,直至冷凝成膏狀,最終制得含藥量為2%的乳膏。

1.3.3質量檢測 (1)質量檢查參考標準:參照文獻14[14]檢查。①粒度按《中國藥典》2020年版三部通則第一法檢查。②裝量差異按《中國藥典》2020版三部通則重量法檢查。③微生物限度按《中國藥典》2020版三部通則微生物計數法檢測。(2)質量檢查具體方法:含量測定采用紫外可見分光光度計法,對乳膏劑中的石榴皮提取物鞣花酸進行含量測定。①對照品溶液制備:精密稱取對照品鞣花酸6.070 mg,于100 mL棕色容量瓶中,用60 %甲醇溶解,并定容至刻度,搖勻,配制成0.060 7 mg/mL的對照品溶液。②供試品溶液制備:稱取乳膏劑供試品約1 g(約相當于鞣花酸6 mg),置入具塞錐形瓶中,精密加入60 %甲醇80 mL,密塞,稱定重量,超聲提取40 min,提取1次,取出后置5 ℃冰箱中放置2 h,然后取出放置室溫,再稱定重量,用甲醇補足重量,搖勻,抽濾2次,即得。③標準曲線的制作:精密量取鞣花酸對照品溶液0 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL分別置于25 mL棕色容量瓶中,后用60 %甲醇溶液加至規定刻度,搖勻靜置一段時間后,在紫外波段200 nm～400 nm范圍內進行掃描,測得鞣花酸對照品溶液及供試品溶液在254 nm處有最大吸收峰,所以選擇以254 nm為測定波長。其中以0 mL的對照品溶液為空白溶液,測定各濃度的對照品溶液的吸光度值。以吸光度(A)為縱坐標,濃度(C,mg/mL)為橫坐標,制作標準曲線。④供試品的含量測定:精密量取準備好的供試品溶液3 mL、6 mL、12 mL,分別置于25 mL棕色容量瓶中,加60 %甲醇至刻度線,搖勻后放置室溫30 min,采用紫外可見分光光度計254 nm處測定吸光度。

2 實驗結果

2.1乳化劑的篩選結果 十二烷基硫酸鈉,吐溫-80,阿拉伯膠3個不同乳化劑制備乳膏劑,乳化效果依次為十二烷基硫酸鈉>吐溫-80>阿拉伯膠。見表3、表4。

表3 乳膏劑的離心、耐熱耐寒試驗結果

表4 乳膏劑的膚感、外觀結果

2.2正交實驗篩選基質配方比例的結果 從直觀分析R值來看,對乳膏劑的成型性影響因素主次順序為C>A>B>D,最佳基質處方配比為A3B3C2D1,即為硬脂醇0.8 g、白凡士林1.8 g、液體石蠟0.6 g、單硬脂酸甘油酯1.2 g、十二烷基硫酸鈉0.1 g、丙三醇1.0 g和純化水8.5 g。見表5、表6。

表5 正交實驗結果

表6 方差分析結果

2.3乳膏劑制備工藝穩定性實驗結果 按照正交實驗優化的制備方法進行石榴皮提取物鞣花酸乳膏劑的制備,通過實驗驗證表明,采用熔合法制備的乳膏劑穩定性更好,作為本次實驗優選制備方法。見表7。

表7 乳膏劑的制備方法穩定性實驗結果

2.4乳膏劑質量檢測的結果

2.4.1粒度結果 石榴皮提取物鞣花酸乳膏劑3個供試品均未發現>180 μm的粒子。

2.4.2裝量差異結果 石榴皮提取物鞣花酸乳膏劑5個供試品裝量差異符合中國藥典2020年版要求。見表8。

表8 石榴皮提取物鞣花酸乳膏劑裝量差異檢查

2.4.3微生物限度結果 按《中國藥典》2020版三部通則微生物計數法,供試品均未檢查出金黃色葡萄球菌。

2.5含量測定結果

2.5.1標準曲線結果 求得方程為:C=0.048 9A-0.000 9,相關系數R2=0.999 8,結果表明鞣花酸在0.015 0～0.024 4 mg/mL時有良好的線性關系,結果見圖1。

圖1 鞣花酸標準曲線圖

2.5.2含量測定結果 含量測定前對不同濃度的甲醇溶劑進行篩選,精密稱取對照品鞣花酸6.070 mg分別在40 %甲醇、50 %甲醇和60 %甲醇溶解后,實驗結果表明60 %甲醇進行溶解吸光度最大,即本實驗用60 %甲醇作為溶劑。在60 %甲醇為溶劑的基礎上選擇了3組石榴皮提取物鞣花酸供試品溶液(3 mL、6 mL、12 mL)進行吸光度測定,測得吸光度A的平均值為0.461,依據標準曲線C=0.048 9 A-0.000 9,求得供試品平均含量為0.021 6 mg/mL。見表9、表10。

表9 不同濃度的溶劑處理石榴提取物鞣花酸軟膏劑吸光度比較(n=3)

表10 60 %甲醇中供試品紫外測定結果

3 討論

乳化劑是促進乳膏劑穩定的重要組成部分。根據親水疏水平衡值,即HLB值(Hydrophile-Lipophile Balance Number,HLB),乳化劑分為水包油型(O/W型)和油包水型(W/O型),O/W型基質能夠與大量水融合,釋藥速度和透皮吸收快,但因含水量高,應加入防腐劑防止霉變。W/O型外相是油,不易清除,也不能與水融合,在制備軟膏劑時相對應用少,因此本實驗乳膏劑選擇O/W型乳化劑;此外,實驗中對常用O/W型乳化劑十二烷基硫酸鈉、吐溫-80和阿拉伯膠進行離心、耐寒耐熱及外觀等穩定性實驗考查,結果表明十二烷基硫酸鈉所制得的乳膏劑穩定性最佳。

本次實驗在對乳膏劑中主藥進行含量測定時,選擇了3個不同濃度(40 %,50 %,60 %)的甲醇作為溶媒,并對其進行紫外可見分光光度計測量,根據測得數據結果繪制標準曲線,結果發現濃度為60 %甲醇所制作的標準曲線的相關系數R2為0.999 8,可信度好。因此,通過熔合法制備的石榴皮提取物鞣花酸乳膏劑制備工藝簡便可行,質量穩定可靠。與朱朋艷等[15]研究相比,在乳化法常用制備乳膏方法的基礎上增加穩定性考察,且驗證研合法制備乳膏劑質量可行,選擇常見的紫外可見分光光度法進行含量測定,快速準確。至于石榴提取物鞣花酸乳膏劑的藥理作用尚待進一步研究。