抗菌肽對固始雞生長性能、血清抗氧化、免疫功能及腸道微生物的影響

胡文舉 孫玲利

（1．鄭州信息科技職業學院，河南 鄭州 450046；2．河南農業職業學院，河南 鄭州 451450）

抗菌肽（antimicrobial peptide，AMP）又稱宿主防御肽，是一種在各類生物中廣泛存在的多分子小肽[1]，具有廣譜抗菌[2]、抗病毒[3]、調節免疫[4-5]等生物學功能。肉雞養殖逐步呈現規?；?、集約化，因此在養殖過程中對飼養管理水平、養殖環境及日糧品質要求逐步提升，尤其禁止使用飼用抗生素后肉雞養殖面臨極大挑戰[6]。鄭雪玥等[7]研究表明，200 mg/kg AMP可改善麻黃雞生長性能和腸道組織形態。固始雞是我國優良的地方雞品種之一，飼養周期長、肉質鮮美，具有較大的養殖前景，但目前關于抗菌肽在固始雞養殖中的應用研究較為缺乏。本試驗在固始雞日糧中添加AMP，觀察其對固始雞生長性能、血清抗氧化、免疫及腸道微生物的影響，為AMP在固始雞養殖中的應用與研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與材料

試驗動物為30 日齡、平均體重約為290 g 且健康的固始雞，購自河南三高農牧股份有限公司。本研究使用的AMP 主要成分為天蠶素，購自湖南泰仁藥業有限公司，有效物質含量為99%。

1.2 試驗設計

試驗在本校動物養殖基地進行，將200 只試驗雞隨機分為4 組，每組5 個重復，每個重復10 只雞，對照組為基礎日糧，試驗組分別在基礎日糧中添加50、100、200 mg/kg AMP?；A日糧組成及營養水平見表1。試驗雞轉入試驗場地后對進行5 d預飼喂，正式試驗期60 d。

表1 基礎日糧組成及營養水平

1.3 飼養管理

試驗開始前15 d對場地進行消毒。試驗雞使用籠養方式。試驗期間雞自由飲水和采食，每日7：30、11：30、17：30飼喂，并統計飼料采食量和試驗雞的健康狀況。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 生長性能

正式試驗開始及結束對試驗雞空腹（禁食12 h）稱重。試驗結束，統計各重復總采食量，計算平均日增重、平均日采食量和料重比。

1.4.2 血清抗氧化與免疫指標

在各重復中挑選1 只接近該組平均體重的試驗雞，翅靜脈采血液約5 mL 置于抗凝血管中，靜置5 min，3 000 r/min離心10 min，獲取上清液，-20 ℃保存以，使用試劑盒（南京建成生物工程研究所）測定血清抗氧化指標和免疫指標。

血清抗氧化指標包括：總抗氧化能力（T-AOC）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）。血清免疫指標包括：免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A （IgA)、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-2 （IL-2）、白細胞介素-6（IL-6）及白細胞介素-10（IL-10）。

1.4.3 腸道微生物數量

采血后，試驗雞頸部放血致死，獲取1.5 g盲腸內容物置于無菌離心管，分別使用MRS、EMB、SS、KF 鏈球菌瓊脂培養基分別培養乳酸菌、大腸桿菌、沙門氏菌、鏈球菌并計數，以lgCFU/g計。

1.5 數據統計與分析

試驗數據采用SPSS 18.0 軟件進行單因素方差分析，LSD法進行多重比較。結果以“平均值±標準誤”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 AMP對固始雞生長性能的影響（見表2）

由表2可知，與對照組相比，各試驗組固始雞末重、平均日增重顯著升高（P＜0.05），料重比顯著降低（P＜0.05）；200 mg/kg 組固始雞平均日采食量顯著提高（P＜0.05）。

2.2 AMP對固始雞血清抗氧化指標的影響（見表3）

表3 AMP對固始雞血清抗氧化指標的影響

由表3 可知，與對照組相比，200 mg/kg 組固始雞血清T-AOC 顯著高于對照組（P＜0.05），各試驗組固始雞血清GSH-Px活性顯著提高（P＜0.05），MDA含量顯著下降（P＜0.05）。

2.3 AMP對固始雞血清免疫指標的影響（見表4）

表4 AMP對固始雞血清免疫指標的影響

由表4 可知，與對照組相比，各試驗組固始雞血清IgG 和IgA 含量均顯著升高（P＜0.05），TNF-α 和IL-6 含量顯著下降（P＜0.05），血清IL-10 含量顯著提高（P＜0.05）；200 mg/kg 組固始雞血清IL-2 含量顯著降低（P＜0.05）。

2.4 AMP對固始雞腸道菌群數量的影響（見表5）

表5 AMP對固始雞腸道菌群數量的影響 單位：lgCFU/g

由表5 可知，各組固始雞盲腸大腸桿菌數量隨著AMP添加量升高呈顯著下降趨勢（P＜0.05）。與對照組相比，200 mg/kg 組固始雞盲腸乳酸桿菌數量顯著提高（P＜0.05）， 沙門氏菌數量顯著降低（P＜0.05）；100 mg/kg 組、200 mg/kg 組固始雞盲腸鏈球菌數量顯著降低（P＜0.05）。

3 討論

3.1 AMP對固始雞生長性能的影響

李棟等[8]研究表明，與對照組相比，抗生素組（200 mg/kg 恩拉霉素）、400 mg/kg 組、600 mg/kg 組肉雞平均日增重分別提高了4.57%、3.40%和5.40%，末重分別增加了4.47%、3.31%、4.60%；抗生素組和600 mg/kg組肉雞料重比分別降低了3.03%和3.64%。蔡興等[9]在Cobb 500 肉雞基礎日糧中添加400、500 mg/kg AMP，肉雞平均日增重分別提高了17.83%和20.15%，料重比下降了16.16%和17.68%，存活率上升了7.0%和8.7%。Xie等[10]在AA 肉雞日糧中分別添加200 mg/kg 不同來源的混合AMP（ABP1 組）、100 mg/kg AMP + 50 mg/kg 植物精油（ABP2 組），ABP1 組和ABP2 組料重比下降約4.06%和4.57%。本研究結果顯示，AMP 能夠提高固始雞試驗末重、平均日增重、平均日采食量，降低料重比，表明AMP在日糧中添加可以促進固始雞生長性能。綜合上述研究結果，AMP 可作為新型飼料添加劑用于促進肉雞生長。

3.2 AMP對固始雞抗氧化能力的影響

T-AOC 是衡量機體整體抗氧化能力的重要指標，GSH-Px 活性反映了機體清除自由基及衍生物的能力，CAT可以催化過氧化氫分解避免細胞遭受損傷[11]。MDA是體內脂類氧化產物，其含量可反映機體內部氧化反應程度[12]。研究認為，AMP 抗氧化的作用機制與抗氧化活性肽作用機制類似。如抗菌肽在細胞質或細胞核中可結合CK2 蛋白，通過磷酸化作用特異性介導轉錄因子，使細胞內自由基的生成受到抑制[13]。AMP 還可以通過其內部結構域螯合金屬離子，避免金屬離子對氧化反應產生催化作用以降低機體氧化反應程度[14]。楊海濤[15]研究表明，日糧中添加500 mg/kg AMP 可顯著增強21 日齡和42 日齡肉雞血清和肝臟GSH-Px 和SOD 活性。劉夢雪等[16]在蛋雞日糧中添加100、200、400 mg/kg AMP，發現各試驗組蛋雞T-AOC顯著上升且MDA含量顯著下降，200 mg/kg 組和400 mg/kg 組肉雞血清GSH-Px 和SOD 活性顯著上升，與李棟等[8]和蔡興等[9]的研究結果相似。本研究認為，日糧中添加AMP后，固始雞T-AOC和GSH-Px活性顯著上升，MDA 含量顯著下降，表明AMP 可以提高雞體內抗氧化能力。

3.3 AMP對固始雞免疫功能的影響

血清免疫球蛋白含量與機體主動免疫能力強弱有關[17]。細胞因子在體內炎癥反應通路中具有重要作用，TNF-α、IL-2、IL-6常被認為與炎癥發生有關，而IL-10屬于抑炎因子[18]。劉夢雪等[16]研究表明，日糧中添加400 mg/kg AMP可提高蛋雞血清IgG、IgA、IgM的含量。陳偉松等[19]研究認為，日糧中添加300 mg/kg AMP 或300 mg/kg AMP + 0.1%酸化劑能夠提高肉雞平均日增重，降低料重比，顯著提高肉雞血清IgA 和IgG 含量。卜華超[18]使用鼠傷寒沙門氏菌對肉雞進行攻毒，之后在基礎日糧中添加500、1 000、1 500 mg/kg AMP進行飼喂，與對照組相比，14～28 日齡，日糧中添加AMP 可提高肉雞血清IgA和IgM含量，且1 000 mg/kg組和1 500 mg/kg組肉雞血清IL-10 含量顯著上升。目前研究認為，AMP 可通過促進免疫細胞增殖、提高動物抗感染能力、調節細胞因子活性和抑制過度炎癥反應等途徑提高動物機體免疫能力[20]。本研究結果表明，日糧中添加AMP可有效提高血清免疫球蛋白和抗炎因子的含量，降低促炎因子的含量，與上述研究結果基本一致。

3.4 AMP對固始雞腸道菌群的影響

腸道菌群對動物腸道功能與結構具有重要影響，是動物健康發育的重要因素之一。帶正電荷的AMP可與帶負電荷的病菌細胞壁（膜）接觸，影響磷脂雙分子層結構穩定性以抑制病菌活性和增殖；部分AMP可進入病菌細胞內部，通過氫鍵堆積影響蛋白合成或誘導細菌自溶酶合成而導致病菌死亡[21]。劉夢雪[22]研究表明，100 mg/kg AMP 可以增加擬桿菌屬、瘤胃球菌科、厚壁菌門的表達豐度，200、400 mg/kg AMP 可顯著提高擬桿菌門、互養菌門、理研菌科RC9 等豐度。喬恒鑫等[23]研究表明，肉雞日糧中添加2.0%的AMP粗提物可降低糞便中大腸桿菌數量（降低18%），同時糞便中乳酸桿菌和雙歧桿菌數量分別提高了6.7%和12.3%。本研究結果與上述研究基本一致，表明日糧中添加AMP可改善肉雞腸道中微生物結構。

4 結論

本研究結果表明，日糧中添加AMP可提高固始雞生長性能、免疫力與抗氧化能力，改善腸道菌群結構，建議在固始雞日糧中添加200 mg/kg AMP。