小麥赤霉病粒含量與嘔吐毒素含量關系研究*

孫少振，王巧琳，孫 磊 ，曹志國，王金菊，劉 霞，蘇偉東

（1.天津市寶坻京東糧油儲運貿易有限公司，天津 301800；2.天津科技大學食品科學與工程學院，天津 300450；3.寧夏金雙禾糧油有限公司，寧夏 靈武 750401）

小麥是重要的糧食作物之一， 世界上約有1/3以上的人口以小麥為主食。在我國，小麥是僅次于水稻的糧食作物， 以小麥加工成的面粉是人們最基本的食物原料， 其數量與質量的安全關系到國家安全和社會的穩定。對于基層糧庫來講，小麥入庫檢驗是整個糧食收購環節中至關重要的一步， 在入庫檢驗的過程中，真菌毒素是非常重要的檢測項目。小麥等糧食作物在生長過程中因環境氣候等因素會感染真菌， 這些真菌產生的次級代謝產物往往具有一定的毒性，如果處理不當，其含量超過一定限值，會對人體健康造成重大危害[1]。

小麥赤霉病主要發生在小麥種植期， 是一種世界范圍內廣泛流行的小麥病害，流行頻率高、危害損失大，易造成小麥減產、品質下降等問題[2]。 而當赤霉菌侵染小麥后，感病籽粒中產生多種真菌毒素，其中主要毒素成分是脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（俗稱嘔吐毒素，DON），其化學性質穩定，易殘留于最終加工的食品中[3-4]，帶來較大的食品安全風險。 因此，嚴格控制小麥原糧的DON 含量， 確保其含量低于限量標準，對糧食儲備安全和人體健康具有重要意義。

小麥嘔吐毒素含量定量檢測方法為高效液相色譜法，檢測準確性高，但儀器昂貴，檢測成本較高、耗時長，難以滿足收購現場實際需要?，F行國標規定嘔吐素限量DON≤1 000 μg/kg［5］，這也是糧庫收購小麥的限量指標。 膠體金技術不同于傳統的酶聯免疫檢測試劑盒和高效液相色譜法[6]，膠體金快速定量法具有檢測精密度好，檢測速度快，儀器便于攜帶等優點[7]，被廣泛應用于毒素指標的快速檢測[8]。 本研究選取收購的小麥樣品20 份， 采用膠體金檢測方法，結合小麥入庫前安全檢測實際情況，得出被檢測小麥中赤霉病粒含量的臨界值，提高檢驗效率，為收購時的快速篩選提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與方法

1.1.1 試劑

甲醇（70%），樣品稀釋液（DON),小麥，ddH2O。

1.1.2 儀器

SKJ-IV 型安普諾快檢儀，成都安普諾生物科技有限公司；NPRO-HWFY-1 型孵育器， 成都安普諾生物科技有限公司；FA2204B 電子分析天平， 常熟市雙杰測試儀器廠；SLG32-Ⅱ雙螺桿擠壓實驗機，濟南賽百諾科技開發有限公司； 湘儀TGL-16M 臺式高速冷凍離心機， 長沙高新技術產業開發區湘儀離心機儀器有限公司；vortex-2 渦旋混勻儀，上海滬析實業有限公司。

1.2 實驗方法

利用快檢卡快速檢測小麥原料中的嘔吐毒素，其步驟如下：

1.2.1 樣品制備

從糧食收購的入庫車輛中挑選赤霉病粒含量較高的樣品，人工撿出其中的赤霉病粒備用。準備未檢出嘔吐毒素的小麥樣品10 份，每份約200 g。 將準備好的赤霉病?；旌暇鶆?，按1%、2%……9%、10%的比例加入準備好未檢出嘔吐毒素的小麥樣品中，將各梯度樣品分別混合均勻用粉碎機粉碎，待用。

1.2.2 試劑前期準備

實驗用到的試劑在使用之前應平衡到室溫，使用前將試劑充分振蕩，以保證所用試劑均勻性，檢測儀和恒溫孵育器需提前開機預熱。

1.2.3 試樣制備

試樣保存在2～4 ℃， 檢測前平衡至室溫。 稱取2 g 試樣于提取瓶中，加入8 mL 提取劑，用渦旋儀振搖5 min，轉移至1.5 mL 離心管，在10 000 r/min條件下離心2 min。 取100 μL 離心后的上清液樣品加入樣品稀釋液(DON)900 μL 混勻，待檢。

1.2.4 試樣檢測

將測試卡片從鋁箔袋包裝中取出, 逐一進行編號和標記, 與已稀釋混合好后的待測液體樣品一同密封置于恒溫孵育器中37 ℃恒溫孵育5 min。 用移液槍吸取90 μL 待檢樣液滴流動進加樣孔腔中迅速定量(5 s 內),自加樣完成后開始計時,恒溫孵育8 min,將測試卡取出放入檢測儀即可讀出結果。

1.2.5 數據處理

使用Excel 軟件對赤霉病粒和嘔吐毒素含量檢測結果進行統計分析， 以赤霉病粒含量為橫坐標，DON 含量為縱坐標， 擬合兩者之間的相關性曲線。根據嘔吐毒素國標限量要求，推得赤霉病粒含量限。

2 結果與分析

2.1 赤霉病粒與嘔吐毒素結果分析

選取的入庫小麥10 份樣品進行嘔吐毒素的指標檢驗，按不同病粒含量將獲得的結果進行統計。根據表1，當赤霉病粒含量＜3.0%時，入庫小麥的嘔吐毒素含量低于國家限量標準。

表1 嘔吐毒素（DON）與赤霉病粒含量

2.2 赤霉病粒含量與嘔吐毒素含量的相關性曲線

對赤霉病粒含量為1.0%、2.0%、3.0%、4.0%、5.0%、6.0%、7.0%、8.0%、9.0%、10.0%的小麥樣品的嘔吐毒素含量進行檢測， 赤霉病粒含量與嘔吐毒素含量的相關性曲線如圖1 所示。由圖1 可以看出，隨著小麥赤霉病粒含量的增加， 嘔吐毒素含量也逐漸增加， 二者呈正相關線性關系。 可擬合出直線方程y= 642.57x-442.05，其R2=0.9803，相關性較為顯著。

圖1 嘔吐毒素（DON）與赤霉病粒含量相關性曲線

2.3 嘔吐毒素超標與否輔助判斷限

食品安全國家標準規定的小麥嘔吐毒素限量為1 000 μg/kg， 根據擬合所得直線方程y= 642.57x-442.05， 可以推得嘔吐毒素含量滿足國標限量要求時，赤霉病粒含量應≤2.5%。 當小麥赤霉病粒含量低于2.5%時，可以粗略判斷其嘔吐毒素含量不超過食品安全國家標準規定的限量要求。

3 結論與探討

利用小麥赤霉病粒含量來輔助和判定嘔吐毒素有無超標的方式簡單、快速,對收購小麥入倉時的快速判斷很有幫助,可大大降低檢驗成本。為降低風險,可在實際采購過程中對赤霉病粒含量2.0%~2.5%的小麥樣品進行嘔吐毒素檢驗,赤霉病粒含量2.0%以下的小麥樣品根據實際情況確定是否需要進行嘔吐毒素檢驗。由于不同年份、不同田塊、不同產地、不同品種小麥對赤霉病抵抗力差異以及感染小麥的禾谷型鐮刀菌不同毒株分泌毒素能力不同， 因此不能完全依靠小麥赤霉病籽粒含量來判斷嘔吐毒素含量，本實驗僅提供一個經驗數值和方法， 找出赤霉病籽粒與嘔吐毒素含量之間的對應關系， 供基層糧庫參考。 小麥赤霉病粒的檢測主要依靠感官判定,存在一定的人為誤差風險, 膠體金快速定量法與其它檢測的方法相比，檢測速度更快，成本低，操作簡單，且其得出的檢測結果的精準度也為人們所接受， 同時檢測儀器具有體積小、重量輕，便于攜帶等特點，可在入庫現場直接進行檢驗， 由此實現對小麥中嘔吐毒素含量的快速檢測。