藏藥綠蘿花中銀椴苷的提取工藝研究

王潔雪，周 頁，姚 莎，劉玉容

成都師范學院化學與生命科學學院，四川 成都 611130

藏藥綠蘿花是瑞香科結香屬植物滇結香（Edgeworthia gardneri（Wall.）Meisn.）的干燥花蕾[1]，主要分布于西藏寒冷地帶，對糖尿病、高血脂等疾病具有良好的預防和治療效果[1-2]。綠蘿花中含有黃酮、香豆素、多糖、三萜等主要活性物質[3]，其中，銀椴苷在綠蘿花中的含量較高[4]，可作為其指標性成分，但由于當前缺乏對此活性成分的富集純化研究，故而本實驗為這一寶貴的民間植物資源的大規模開發提供了參考依據。

1 實驗

1.1 儀器與試劑

Waters 2695 型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；色譜乙腈，色譜甲醇（費頓控股有限公司）；其他試劑（市售分析純）；綠蘿花（成都荷花池中藥材市場）；銀椴苷，HPLC＞98%（成都康邦生物科技有限公司）；大孔樹脂AB-8、NKA-9、X-5、D101 和NKA-Ⅱ（天津允開樹脂科技有限公司）。

1.2 綠蘿花提取液的制備

取綠蘿花干燥花蕾10 g，粉碎后向其中加入120 mL 無水乙醇，回流提取兩次，每次1.5 h，濃縮后得到綠蘿花提取液。

1.3 銀椴苷標準溶液的配制

稱取銀椴苷對照品1.08 mg，加入甲醇定容，配制成質量濃度為0.108 mg/mL 的銀椴苷標準溶液。

1.4 色譜條件

色譜柱：Agilent Extend-C184.6×250 mm，5 μm；檢測波長：313 nm；柱溫：30 ℃；流動相：乙腈（B）-0.1%磷酸水溶液（A）為（32：68）；流速：1.0 mL/min；進樣量10 μL。

1.5 藏藥綠蘿花提取液中銀椴苷含量的測定

取5 mL 綠蘿花提取液，加乙醇稀釋定容至100 mL，按1.4 項色譜條件進行進樣檢測，計算銀椴苷的含量。經測定綠蘿花中銀椴苷含量為2.52 mg/mL 。

1.6 大孔樹脂的選擇及預處理

選取5 種不同型號的大孔吸附樹脂（AB-8、NKA-9、X-5、D101、NKA-Ⅱ），將其分別浸泡在95%乙醇中24 h 后濕法裝柱，先后用95%乙醇和蒸餾水沖洗，至無醇味。然后分別用4%氫氧化鈉溶液和5%鹽酸溶液浸泡，后沖洗至中性即可，備用。

1.7 靜態吸附與解吸能力考察

分別稱取5 種已處理好的大孔吸附樹脂各2.5 g，向其中加入20 mL 綠蘿花提取液，振搖。2 h 后抽濾至干，即得到吸附液。再向吸附后的大孔樹脂中加入87%的乙醇20 mL 對其進行解吸，抽濾后得到解吸液。將得到的吸附液和解吸液依照1.4 項的色譜條件進行進樣檢測，并計算吸附量、吸附率、解吸量、解吸率（公式如下）。篩選出最適合提取銀椴苷的樹脂。

式中：X 表示吸附量，mg/g；W 表示吸附率，mg/g；Y表示解吸量，mg/g；Z 表示解吸率，%；a 表示吸附前銀椴苷的質量濃度，mg/mL；b 表示吸附后溶液中銀椴苷的質量濃度，mg/mL；v 表示上樣液體積，mL；c表示解吸液中銀椴苷的質量濃度，mg/mL；V 表示解吸液體積，mL；m 表示樹脂質量，g。

1.8 動態吸附考察

1.8.1 上樣液質量濃度考察

取樣品溶液配成質量濃度依次為2.5、2、1.5、1 mg/mL 的溶液，稱取4 份已處理好的樹脂10 g 濕法裝柱，分別將上述溶液以1 mL/min 的速度上樣，收集過柱液，依照1.4 項色譜條件進行檢測，精選最佳上樣液質量濃度。

1.8.2 上樣液體積考察

考察上述得到的最佳質量濃度溶液的上樣體積，方法同1.8.1，每10 mL 收集一管流出液，測定每管中銀椴苷的質量濃度，以流出液含量達到上樣液中銀椴苷含量的20%作為泄漏點，精選出最佳上樣體積。

1.8.3 乙醇洗脫液體積分數的考察

分別采用30%、50%、70%、95%的乙醇洗脫，對流出液進行檢測后，精選出最佳乙醇洗脫液的體積分數。

1.8.4 洗脫體積的考察

按照從上述實驗得到的最優上樣條件上樣，每10 mL 收集一管洗脫液，檢測后，精選出最佳乙醇洗脫體積。

2 結果與分析

2.1 樹脂篩選

AB-8、D101、X-5、NKA-9、NKA-Ⅱ5 種大孔樹脂對藏藥綠蘿花中銀鍛苷的吸附率、解吸率及解吸量如表1 所示，結果表明5 種大孔吸附樹脂對銀椴苷的吸附率均較高，吸附能力很強，其中AB-8 樹脂的吸附效果最好。故優選AB-8 型吸附樹脂作為最佳吸附樹脂。

表1 不同樹脂靜態吸附與解吸能力比較

2.2 上樣濃度對吸附效果的影響

由圖1 可知，隨著藏藥綠蘿花的上樣濃度逐漸增大，銀椴苷的吸附量也在增加。在上樣質量濃度達到2 mg/mL 時，吸附量的增加開始趨于平緩。因此選擇最佳上樣液的質量濃度為2 mg/mL。

圖1 上樣濃度對吸附效果的影響

2.3 吸附泄漏曲線

圖2 顯示，當上樣體積達到30 mL 時開始發生泄漏，130 mL 后銀椴苷的質量濃度接近2 mg/mL，可知樹脂柱已達到飽和狀態。當上樣體積達到60 mL 時，流出液中銀椴苷的質量濃度接近原上樣液的20%。由此確定最佳上樣體積為60 mL。

圖2 吸附泄露曲線

2.4 乙醇洗脫液體積分數對解吸效果的影響

由圖3 可知，隨著乙醇洗脫液體積分數的增大，其解吸效果也在相應地提高。但當乙醇體積分數大于70%時，銀椴苷解吸率提高得較為緩慢，同時洗脫液中溶于乙醇的雜質也在增加，致使銀椴苷的純度下降。因此，選擇70%的乙醇作為洗脫劑。

圖3 乙醇洗脫液體積分數對解吸效果的影響

2.5 乙醇洗脫體積對洗脫效果的影響

由圖4 可知，當乙醇洗脫劑體積為20 mL 時，洗脫下來的銀椴苷的濃度達到最高，當乙醇洗脫劑的體積達到40～50 mL 時，銀椴苷的濃度波動不大，開始趨于平緩，故確定最佳的乙醇洗脫體積為50 mL。

圖4 乙醇洗脫體積對解吸效果的影響

3 結論

本研究通過實驗發現AB-8 型樹脂對銀椴苷的吸附率最高、解吸量最大。確定上樣液質量濃度為2 mg/mL、上樣液體積為60 mL、洗脫液體積分數為70%、洗脫體積為50 mL 作為最佳上樣及洗脫條件。該研究為銀椴苷的富集純化提供了可靠的依據，也為藏藥綠蘿花的進一步開發利用提供了一定的理論參考。