EB病毒抗體聯合檢測在臨沂地區鼻咽癌篩查中的應用研究

王艷麗,李欽,秦娜娜,孫雨浩,魏健

(1.青島大學醫學部 臨床醫學系,山東 青島 266071;2.臨沂市人民醫院 耳鼻咽喉頭頸外科,山東 臨沂 276600;3.濰坊醫學院 臨床醫學系,山東 濰坊 262500)

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是發生在鼻咽部黏膜上皮的惡性腫瘤,其發病位置隱蔽、惡性程度高、常呈浸潤性生長、易發生早期轉移,被發現時往往已經處于中晚期。其中15～45歲年齡組5年生存率為72%,而65～74歲年齡組僅為36%[1],因此,早期發現是提高NPC患者生存率的關鍵。已有大量研究報道證實EB病毒與NPC的發生密切相關[2], EB病毒血清學抗體檢測結果可為NPC臨床診斷、預后及隨訪提供理論依據[3-5]。本研究通過酶聯免疫法檢測臨沂地區不同人群EB病毒相關血清標志物Rta蛋白IgG抗體(Rta protein IgG antibody,Rta/lgG)、衣殼抗原IgA抗體(capsid antigen IgA antibody,VCA/lgA)、早期抗原IgA抗體(early antigen IgA antibody,EA/IgA)水平,旨在探討3種抗體聯合檢測在NPC篩查中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 資料

選取2019年10月—2022年10月在臨沂市人民醫院健康管理中心的體檢人群15 873例研究對象為體檢組,其中男10 256例,女5 617例,年齡9～96歲,平均年齡50.36歲;同期因鼻塞、涕中帶血、耳悶、頸部腫物等鼻咽部相關癥狀而就診于本院耳鼻咽喉科的1 800例患者為篩查組,其中男962例,女838例,年齡2～92歲,平均年齡46.35歲;同期就診于本院并經病理確診為NPC的48例患者為確診組,其中男35例,女14例,年齡8～83歲,平均年齡50.13歲。3組年齡整體呈正態分布。

1.2 方法

采集每位受試對象靜脈血3～5 mL,用ELISA法檢測Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA此3項抗體,均采用同昕生物技術(北京)有限公司的試劑盒并嚴格按說明書操作。3項抗體Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA的診斷界值(cut-off值)分別為0.54、0.22、0.40,標本吸光度大于診斷界值時為陽性。根據檢測結果繪制受試者工作曲線(receiver operating curve,ROC)。

1.3 統計學分析

采用SPSS 26.0統計軟件進行統計學分析,Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體陽性率的比較行χ2檢驗,P<0.05為差異具有統計學意義。根據檢測結果繪制ROC,根據靈敏度、特異度、Youden指數、曲線下面積等評估3種抗體的NPC診斷效能。

2 結果

2.1 3組間EB病毒Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體陽性率比較

體檢組、篩查組、確診組3組Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA陽性率結果顯示,確診組的Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA 3項抗體陽性率明顯高于篩查組和體檢組,差異具有統計學意義(χ2分別為259.796、185.569、373.484,P均<0.01);對以上3組抗體陽性率進行兩組間比較:確診組高于篩查組,差異均具有統計學意義(χ2分別為95.918、78.029、136.589,P均<0.01);確診組高于體檢組,差異均具有統計學意義(χ2分別為198.823、132.894、297.787,P均<0.01);篩查組要高于體檢組,差異具有統計學意義(χ2分別為76.61、59.850、101.511,P均<0.01)。在總體研究中,VCA/IgA抗體陽性率在篩查組和體檢組高于Rta/IgG、EA/IgA(χ2分別為67.823、780.030,P均<0.01),在確診組中VCA/IgA抗體陽性率與EA/IgA持平。見表1。

表1 3組患者EB病毒Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體陽性率 [例(%)]

2.2 Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體單項檢測結果分析

研究發現,確診組48例患者中EB病毒抗體多為2項或3項陽性,只有2例患者表現為3項抗體全陰性,其中1例為8歲兒童,另1例為經放射治療后37歲女性患者。在確診組中,VCA/IgA、EA/IgA檢測為陽性例數均為41例,高于Rta/IgG(35例)陽性例數。在篩查組及體檢組中VCA/IgA抗體陽性例數,高于EA/IgA、Rta/IgG。具體數據見表2。

表2 3組患者Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體單項檢測結果統計 (例)

2.3 Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體聯合檢測結果分析

將Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA 3項抗體進行聯合檢測。串聯檢測標準:EA和VCA和Rta均為陽性才判斷受試者為陽性患者;并聯檢測標準:Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA只要有1項為陽性時就判斷受試者為陽性患者。在進行串聯檢測時篩查組陰性例數(1 734例)多于3項抗體單獨檢測例數(1 491、1 313、1 481例),體檢組陰性例數(15 784例)亦多于3項抗體單獨檢測例數(14 231、12 803、14 292例);并聯檢測時確診組陽性例數(46例)多于3項抗體單獨檢測時陽性例數(35、41、41例),篩查組陽性例數(783例)稍多于3項抗體單獨檢測時陽性例數(309、487、319例),體檢組陽性例數(5 196例)遠多于3項抗體單獨檢測時陽性例數(1 642、3 070、1 581例)。見表2、3。

表3 3組患者Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體聯合檢測結果分析 (例)

2.4 Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體診斷價值評估

Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體診斷價值評估結果顯示,VCA/IgA、EA/IgA靈敏度相當,為85.41%;EA/IgA特異度要高于VCA/IgA,為89.24%;Rta/IgG特異度界于兩者之間。當VCA/IgA、EA/IgA、Rta/IgG此3項抗體進行聯合檢測時靈敏度及特異度均得到提高,并聯聯合檢測時靈敏度可達95.83%,串聯聯合檢測時特異度達99.12%,正確度達99.01%,陽性預測值高于3項單獨檢測,而陰性預測值無明顯差異。見表4。

表4 EB病毒3種抗體診斷價值評估 [%(例)]

2.5 Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體ROC分析

將總體Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA此3項及聯合檢測結果繪制ROC。結果顯示,由ROC獲得的曲線下面積分別是0.846、0.901、0.916、0.949;Youden指數分別為0.619、0.653、0.746、0.807;Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA此3項抗體分別對應的診斷界值(cut-off值)分別為0.54、0.22、0.40。由此可見,VCA/IgA、EA/IgA診斷效果相當,差異無統計學意義(Z=0.632,P=0.527),3項抗體聯合檢測診斷效能明顯高于Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA任何一項單獨檢測,差異具有統計學意義(Z值分別為3.277、2.237、2.676,P均<0.05)。見圖1。

圖1 Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA抗體聯合檢測的ROC比較

3 討論

EB病毒是皰疹病毒科γ亞科成員,其編碼約80個蛋白質,擁有眾多抗原表位,主要通過潛伏感染和裂解感染兩種形式將細胞感染。當EB病毒從潛伏感染變為裂解感染時,就開始進入立即早期,其可以促使立即早期基因BRLF1、BZLFl產物Rta的表達,然后引發一系列級聯反應,進入裂解周期。而當病毒處于裂解性感染時,感染周期中早期抗原EA、衣殼抗原 VCA得到表達[6]。近年研究發現,EB病毒相關血清學標志物Rta/IgG、EA/IgA、VCA/IgA抗體可作為NPC篩查、診斷及預測的新指標[7-11]。目前對EB病毒相關抗體的研究主要集中于福建、廣東、廣西等NPC高發地區,尚無臨沂地區此類大樣本研究數據。本研究樣本量大,使研究數據更具代表性,實驗結果更具說服力,可以更好地反映臨沂地區不同人群EB病毒Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA此3項抗體水平。

本研究結果顯示在體檢組中VCA/IgA抗體陽性率為19.30%,高于Rta/IgG(10.34%)、EA/IgA(9.96%),說明VCA/IgA抗體在體檢人群中陽性檢出率高于Rta/IgG、EA/IgA,這與王俊霞等[11]研究的鄭州市體檢人群的檢測結果一致,張晗等[12]對北京地區體檢人群的研究也證實了這一點。但是臨沂地區抗體陽性率總體高于北京和鄭州,分析其原因可能與地域間的差異有關。因此,在統一檢驗標準的同時需要根據當地人群抗體情況建立適合當地人群的篩查方法,周勇等[13]研究證實了這一點。本研究中增加了篩查組的對照,在篩查組中VCA/IgA抗體陽性率為27.06%,高于Rta/IgG(17.17%)、EA/IgA(17.72%),確診組VCA/IgA抗體陽性率為85.41%,與EA/IgA(85.41%)持平,均高于Rta/IgG(72.90%),這與張曉琍等[3]研究結果稍顯不同,可能與確診組樣本量相對較少有關。3種抗體聯合檢測,串聯時(Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA均為陽性才判斷為受試者為陽性)具有較高的特異性(99.12%),并聯時(Rta/IgG、VCA/IgA、EA/IgA只要有1項為陽性時就判斷受試者為陽性)具有較高的靈敏度(95.83%),均高于3項抗體單獨檢測。因此,聯合檢測也提高了陽性預測值及準確度,這與唐浩能等[7,9,14]研究結果一致。在分析ROC時發現EA/IgA、VCA/IgA曲線下面積分別為0.916、0.901,根據ROC分析,EA/IgA、VCA/IgA對NPC的診斷價值非常高,而3項聯合檢測時AUC為0.949,高于單項檢測,具有更高的診斷價值。

本研究結果還發現,雖然EA/IgA的特異性最高(89.24%),但仍低于蟻雪涵等[15]研究結果,分析其原因可能與地域間差異及NPC組樣本量有關。而Rta/IgG的陽性率為72.91%,稍低于唐浩能等[7]的研究結果,這可能與所采用的診斷臨界值差異有關。在NPC確診組中,有2例患者表現為3項抗體全陰性,其中1例為8歲兒童,另1例為經放射治療后37歲女性患者。本研究中兒童NPC患者較少,尚無法推斷年齡是否為影響EB病毒抗體水平的因素。黃小顏等[16]已研究證實NPC患者體內VCA/IgA、EA/IgA、Rta/IgG抗體水平會隨放射治療時間延長而逐漸降低,這可以用來解釋上述1例經放射治療后的患者3項抗體均呈陰性的原因。在已確診的48例患者中,有1例是在健康體檢時檢測出EB 病毒3項抗體均呈陽性,進一步行鼻咽鏡及影像學檢查,并隨訪觀察后經病理確診為NPC。因此對于EB病毒血清學檢測呈現抗體陽性,尤其3項抗體皆陽性者,應高度警惕NPC的可能,并定期隨訪。

綜上所述,臨沂地區NPC發病與EB病毒密切相關,通過酶聯免疫法進行EB病VCA/IgA、EA/IgA、Rta/IgG抗體聯合檢測可提高NPC診斷的靈敏度及特異度,提高NPC檢出率。然而,臨沂地區屬于NPC低發區,確診組樣本量相對較少,所以確診組數據還需進一步豐富。通過數據比對,進一步發現其規律,更有利于臨沂地區NPC的早防早治。