QuEChERS-LC-MS/MS法測定櫻桃中63種農藥殘留量

于曉慧,李俏,魏愛云

(1.山東特檢科技有限公司,山東 濟南 250000;2.方圓標志檢驗檢測(山東)有限公司,山東 濟南 250100)

近幾年來,隨著休閑農業發展,種植櫻桃的農戶數量增加、種植面積單位擴大,當前市面流通買賣的櫻桃質量也隨之下降,并且櫻桃特別容易發生病害,農藥的不合理使用,給農藥殘留帶來超標風險?，F在對于農業質量的要求越來越嚴格,對水果中農藥殘留的檢測工作也越來越重視。目前現有的農藥殘留分析包括樣品前處理和儀器數據檢測兩部分,農藥的殘留分析是一項對復雜混合物中痕量組分進行分析的手段。目前常見的樣品前處理新技術有加速溶劑萃取法[1-3]、微波萃取法[4-5]、固相微萃取[6-7]、分子印跡萃取技術[8-9]、QuEChERS法[10-12]等。農藥殘留檢測常用的分析技術有HPLC法[13]、GC[14]、LC-MS/MS[15-16]、GC-MS法[15]。本研究前處理參照QuEChERS前處理技術的分散固相萃取法,使用山東美正生物科技有限公司的SpeedTest-QuEChERS凈化包,對樣品進行凈化后上機操作,該前處理操作簡單便捷、省時間、經濟廉價、準確度高,結合HPLC-MS/MS的高選擇性、高靈敏度和強抗干擾能力等特點,建立QuEChERS-HPLC-MS/MS快速測定櫻桃中63種農藥殘留的分析方法。該方法操作簡便、靈敏度高、重現性好、分析速度快,適用于櫻桃中農藥多殘留的同時檢測,為櫻桃農藥殘留的風險監測提供了技術支持。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

儀器設備:SHIMADZU LC-MS/MS 8045三重四級桿液質聯用儀,上海舜宇恒平科學儀器有限公司;JA31002型電子天平,博科BK-180J型超聲波清洗器,北京優晟聯合科技有限公司;UMV-1型多管旋渦混合器,湖南凱達科學儀器有限公司;KL04A型離心機。

試劑和耗材:山東美正生物科技有限公司SpeedTest-QuEChERS凈化包,甲醇、乙腈(色譜純、fisher),一級水(屈臣氏),甲酸(色譜級、fisher),櫻桃(超市購買),63種農藥殘留標準品100 μg/mL(壇墨質檢標準物質中心),50 mL聚乙烯離心管。

1.2 標準溶液配制

混合標準中間液配制:分別精確移取63種農藥的標準物質,用乙腈稀釋成質量濃度為2 μg/mL的混合標準中間液,于-18 ℃冰箱保存,待用(有效期為3個月)。

基質混合標準工作溶液:用空白基質溶液將混合標準中間液逐級稀釋為1,5,10,20,30,50,100,200 μg/L的基質混合標準工作溶液。

1.3 樣品的制備及提取

檢測樣品制備:取櫻桃樣品食用部分,搗碎,最后搗成勻漿,保存條件為零下20 ℃到零下16 ℃,待用。在進行前處理稱取樣品時,需要對已經冷凍好的樣品進行完全解凍,待櫻桃樣品放置常溫后,使櫻桃樣品混勻后取樣。

檢測樣品提取:準確稱取櫻桃樣品20 g(精確至0.01 g)于聚乙烯的50 mL帶蓋離心管中,精確加入20 mL乙腈試劑,擰好離心管蓋,在旋渦機上,渦旋3 min,在離心管中加入5 g氯化鈉,擰好離心管蓋,渦旋混勻,放置超聲機中,超聲提取,提取時間為30 min,超聲完成后,以8 000 r/min的轉速,離心5 min,用一次性塑料吸管吸取上層提取液5～10 mL,置于SpeedTest-QuEChERS管中,混勻,4 000 r/min離心3 min,取上層清液,過0.22 μm有機濾膜至進樣小瓶中,待測。

1.4 檢測方法

1.4.1 色譜條件

色譜柱:Shim-pack GIST C1-AQ HP (100 mm×2.1 mm,1.9 μm);儀器柱溫:40 ℃;流動相流速:0.25 mL/min;儀器進樣量:2 μL;流動相:A=2 mmol/L甲酸銨0.01%甲酸水;B=2 mmol/L甲酸銨甲醇;梯度洗脫條件:0.01～0.4 min:6%(2 mmol/L甲酸銨甲醇);0.41～1.3 min:6%～45%(甲酸銨甲醇);1.31～3.0 min:45%～85%(甲酸銨甲醇); 3.01～6.0 min:86%～96%(甲酸銨甲醇);6.01～8.0 min:96%(甲酸銨甲醇);8.01～9.00 min:6%(甲酸銨甲醇)。

1.4.2 質譜條件

離子源:電噴霧離子源;掃描方式:正負離子同時掃描;采集方式:MRM;離子源接口電壓:+4.5 kV;-3.5 kV;碰撞氣:氬氣;離子傳輸管溫度:200 ℃;接口溫度:250 ℃;加熱模塊溫度:350 ℃。

2 結果與分析

2.1 標準曲線繪制、回歸方程、相關系數與方法檢出限

用1.4所述的檢測方法測定基質混合標準工作溶液(現用現配),進行線性回歸處理,測定的63種農藥在1.0～200 μg/L范圍內展現出很好的線性關系,綜合63種物質相關系數均在0.996 1～0.999 9,儀器所測得到63種物質方法定量限,定量限低于國家標準的限量值,見表1。

2.2 回收率和精密度

本試驗采用在空白櫻桃樣品(不含有63種目標物質)中加標的方法進行此方法的精密度和回收率的驗證。準確稱取18個空白櫻桃樣品進行加標回收試驗,以3水平濃度進行加標回收試驗,測試樣品含量為20,50,100 μg/kg的,每個水平做6組加標試驗,按照上述的1.3和1.4進行前處理和儀器分析測定,結果表明,在20,50,100 μg/kg的3水平濃度下,櫻桃中63種化合物的回收率分別為76.9%～106.7%,63種物質的相對標準偏差在0.76%～4.52%,回收率達到較高且穩定的效果。

表1 63種農藥的線性關系和定量限

2.3 實際樣品測定

隨機購買附近市場或者超市的櫻桃樣品10份,按照該試驗的方法進行63種農藥物質殘留的測定,檢測得到的結果均符合農藥殘留限量規定。本次檢測櫻桃樣品的63個農殘參數中有32個農藥品種殘留限量不作判定。31種物質有殘留限量判定,其中腈菌唑、克百威的檢出率最高,有兩批櫻桃樣品接近限量值規定;多菌靈在10份櫻桃樣品中檢出率為40%;樂果、甲胺磷和甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽這三種物質檢出率為30%;甲霜靈、氧樂果兩種化合物檢出率為20%;吡唑嘧菌酯在櫻桃樣品中的檢出率為10%;10份櫻桃樣品均為合格樣品,其他農藥參數均未測出數值。結果詳見表2。

表2 10批櫻桃樣品的檢驗結果及63種農藥的最大殘留限量MRL

3 結論

本研究采用 QuEChERS 前處理結合液相色譜串聯質譜法同時檢測櫻桃中63種農藥殘留,前處理參照QuEChERS前處理技術的分散固相萃取法,使用山東美正生物科技有限公司的SpeedTest-QuEChERS凈化包,63種農藥在1.0～200 μg/L范圍內線性關系良好,相關系數(r)均大于0.996,方法的定量限為 0.12～16.0 μg/kg。20,50和100 μg/kg三個添加水平的回收率在76.9%～106.7%,相對標準偏差為0.76%～4.52%(n=6),本研究建立的方法具有前處理快速、目標物提取效率高、實驗過程中使用到有機溶劑用量少、檢測結果準確、重復性好、實驗耗材少、成本低的優點,可以很好地應用于大批量櫻桃樣品中多種農藥殘留分析檢測。