長鏈非編碼RNA表達與肺腺癌血管內皮功能的關系及對病情進展的影響研究

張召迪，張良

（南陽醫學高等?？茖W校附屬中醫院 腫瘤科，河南 南陽 473000 ）

肺腺癌為非小細胞肺癌（NSCLC）常見病理類型之一，相關研究數據顯示，臨床約有40%～50% 的NSCLC 患者可診斷為肺腺癌［1］。手術切除、化學治療、免疫治療及腫瘤靶向治療均為目前治療肺腺癌的重要手段，上述治療方法一定程度上降低患者病死風險，但對于腫瘤TNM 分期較高的晚期患者來說，即便經上述方法系統治療后，其五年內生存率仍普遍較低［2］。除病理組織活檢這一金標準外，臨床會通過檢測多種血清腫瘤標志物表達水平以診斷肺腺癌并評估患者病情，但不同腫瘤標志物在各類腫瘤、非腫瘤疾病中均可存在表達異常情況［3］。長鏈非編碼RNA（lncRNA）為一種廣泛存在于哺乳動物細胞中、長度＞200 nt 的非編碼序列，可通過多種生物學功能參與細胞增殖、分化、轉移及凋亡［4］。肺腺癌轉移相關轉錄本1（MALAT1）為研究發現的首個定位于染色體11q13.1 的lncRNA，研究發現［5］，MALAT1 表達水平在肺腺癌病理組織中顯著高于癌旁組織。另有研究表示［6］，抑制MALAT1 表達能通過靶向調控微小RNA-200a（miR-200a）而抑制肺癌A549 細胞增殖或轉移，可作為治療肺腺癌的全新靶點。本研究旨在分析MALAT1 這一lncRNA 與肺腺癌血管內皮功能的關系及對病情進展的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本文為回顧性研究，病例納入南陽醫學高等?？茖W校附屬中醫院2020 年5 月至2022 年10 月收治的123 例肺腺癌患者，根據MALAT1 表達情況不同，將入組患者分為A 組（低表達相，60例）、B 組（高表達相，63 例），兩組患者的一般資料比較見表1。本次研究已獲得單位倫理委員會批準（A0155）

納入標準：①入組患者均符合NSCLC 診斷要點［7］，經病理檢查確認為肺腺癌；②經評估預計生存周期均≥1 年；③均知悉此次研究試驗目的及內容，同意獲取并公開既往臨床資料。

排除標準：①存在血液系統、免疫系統疾病者；②存在其他非病理性肺通氣功能異常者；③臨床資料缺失者。

1.2 方法

采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（qPCR）檢測入組患者腫瘤組織中的MALAT1 表達情況，依據受試者工作特征曲線（ROC）分析結果，將60 例MALAT1 低表達相患者列為A 組，將63 例MALAT1 高表達相患者列為B 組，收集并對比兩組患者的一般資料、臨床資料，經統計學單因素分析、Logistic 多因素回歸分析歸納導致MALAT1表達異常的主要影響因素，經Spearman 相關性系數驗證MALAT1 表達與肺腺癌患者血管內皮功能及病情進展的關聯。

qPCR 檢測方法：取外周靜脈需為檢測樣本，經抗凝處理將血液樣本送入離心機，按轉速3 000 r/min、半徑0.5 cm 分離血清后，經Trizol法提取血清樣本中總RNA，并取5 μL 總RNA 加入至濃度為2%的瓊脂糖凝膠中電泳檢測RNA 純度及完整度；將RNA 逆轉錄為cDNA 后，檢測血清各miRNA 表達情況，在95℃環境下預變性10 min 后，參考引物序列計算各miRNA 的相關表達量。

1.3 觀察指標

①比較兩組患者的一般資料、臨床資料：一般資料包括性別、年齡、病程、腫瘤直徑最大值、腫瘤數目（單發腫瘤、多發腫瘤）等；臨床資料包括腫瘤分化程度（低分化、中分化、高分化），腫瘤浸潤深度（T1～T4）、腫瘤區域淋巴結受累情況（N0～N2）、腫瘤遠處轉移情況（M0、M1），血管內皮功能等，其中腫瘤浸潤深度、區域淋巴結受累情況及轉移情況參考腫瘤TNM 分期標準［8］；血管內皮功能檢測指標主要包括血管內皮生長因子（VEGF）、血小板衍化生長因子B（PDGF-B）。②影響肺腺癌患者MALAT1 表達的因素分析［9］：由于自變量、因變量間存在非線性關系，本研究將MALAT1 表達情況設為自變量，其余單因素設為因變量，將存在一定差異的單因素納入Logistic多因素回歸分析，當P＜0.05 時認為該因素為導致MALAT1 表達異常的主要影響因素。③MALAT1表達與血管內皮功能及病情進展的相關性［10］：經Spearman 相關性系數驗證MALAT1 表達與血管內皮功能及病情進展情況的相關性，當P＜0.05 時認為二者顯著相關，r＜0 表示負相關，r＞0 表示正相關。

1.4 統計學方法

數據均采用軟件SPSS 22.0 處理。計量資料以均數±標準差（）表示，比較用t檢驗；計數資料以百分率（%）表示，比較用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MALAT1 表達異常的統計學單因素分析

統計學單因素分析結果顯示，兩組患者的年齡、腫瘤直徑最大值、腫瘤數目等一般資料以及腫瘤分化程度、腫瘤浸潤深度、區域淋巴結受累情況、遠處轉移情況、血管內皮功能等臨床資料均差異有統計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 MALAT1 表達異常的統計學單因素分析 ［n(%)］

2.2 MALAT1 表達異常的Logistic 多因素回歸分析

結合單因素分析分析結果，分別對P＜0.05 的單因素進行賦值，具體賦值情況，見表3。

Logistic 多因素回歸分析結果顯示，腫瘤直徑最大值＞5 cm、多發腫瘤、低分化、腫瘤浸潤T3～T4、區域淋巴結受累N1～N2、病灶遠處轉移M1、VEGF≥142 pg/mL、PDGF-B≥200 pg/mL 為導致MALAT1 表達異常的主要影響因素，見表4。

表4 MALAT1 表達異常的Logistic 多因素回歸分析

2.3 MALAT1 表達與血管內皮功能及病情進展的相關性分析

經Spearman 相關性系數檢驗，MALAT1 表達與腫瘤分化程度負相關，與腫瘤浸潤深度、淋巴結受累情況、遠處轉移情況、VEGF 表達、PDGF-B正相關，見表5。

表5 MALAT1 表達與血管內皮功能及病情進展的相關性分析

3 討論

肺癌為一種十分常見的惡性腫瘤，也是導致人類發生癌癥相關死亡的首要原因，根據腫瘤病灶的形態及分化程度不同，臨床主要將其分為小細胞肺癌（SCLC）和NSCLC 兩種類型，前者腫瘤生長速度快、病灶惡性程度高，后者病情進展緩慢且具有更多手術機會［11-12］。肺腺癌為NSCLC 常見病理類型，早期、中期肺腺癌經手術、化療、免疫治療或腫瘤靶向治療后大多可獲得良好預后，但晚期患者經上述方法治療后五年內病死風險仍較高［13］。近年有研究指出［14］，lncRNA 在多種實體腫瘤的發生及及病情進展中均有重要作用，可參與調節腫瘤細胞的多種生物學行為及血管生成。MALAT1 為最早發現于NSCLC 的lncRNA 家族成員之一，已有的研究證實［15］，MALAT1 在肺腺癌等NSCLC 癌癥組織中的表達水平較癌旁組織明顯更高。

MALAT1 在多種惡性腫瘤中均呈高水平表達，相關文獻指出［16］，MALAT1 能通過海綿miR-200a-3p 而靶向作用于程序性死亡配體1 并促使肺腺癌細胞增殖或轉移，與肺腺癌患者病情進展有密切聯系。俞岑明等［17］研究結果顯示，MALAT1 呈高表達相的為導致NSCLC 腺癌患者病情進展、病灶轉移的危險因素。而本研究結果顯示，腫瘤直徑最大值＞5 cm、多發腫瘤、低分化、腫瘤浸潤T3～T4、區域淋巴結受累N1～N2、病灶遠處轉移M1、VEGF≥142 pg/mL、PDGF-B≥200 pg/mL 均為導致MALAT1 表達異常的主要影響因素，除進一步明確MALAT1 表達與肺腺癌患者病情進展的管理外，本研究結果還提示MALAT1 高表達導致肺腺癌患者病情進展或許與血管內皮功能亢進、新生血管生成密切相關。研究指出［18］，腫瘤的發生、發展過程可涉及細胞增殖、侵襲或轉移、上皮間質轉化以及新生血管生成等多種生理過程，其中新生血管生成為腫瘤發生或進展的主要機制。研究指出［19］，MALAT1 為一種可與miRNA 發揮相互作用的競爭性內源性RNA，可通過海綿效應進行互補配對后而抑制miRNA 表達，并對腫瘤靶基因產生負向調控作用。SHYU 等［20］研究指出，MALAT1 可通過抑制miR92 并抵消miR-92a 而下調Kruppel 樣轉錄因子表達，以抑制血管內皮細胞功能。VEGF 及其受體表達水平與腫瘤患者的病灶侵襲能力及預后均有密切關聯。當VEGF 與其受體相結合后即可介導細胞表面受體多種信號轉到并誘發多種級聯反應，高水平VEGF 可促使細胞增殖并加快新生血管生成及腫瘤侵襲速度，其表達水平與PDGF-B 正相關［21］。另有學者通過缺氧復氧誘導血管內皮損傷的實驗中指出［22］，MALAT1 還可通過與miR-320a 相互作用而對血管生成產生一定調節作用。上述研究均證實了MALAT1 表達與血管內皮功能間的關聯。本研究經Spearman 相關性系數檢驗得知，MALAT1 表達與腫瘤分化程度負相關，與腫瘤浸潤深度、淋巴結受累情況、遠處轉移情況、VEGF 表達、PDGF-B正相關。

綜上所述，MALAT1 為一種可參與肺腺癌患者病情進展的lncRNA，其影響機制考慮與上調VEGF、PDGF-B 表達并導致血管內皮細胞損傷、促使新生血管生成相關。