健脾溫陽凝膠劑臍療治療脾胃虛弱型慢性腹瀉的療效及機制：一項臨床隨機對照試驗

崔藝馨，王德財，謝東晴，王海明，徐睿鑫，唐瀟然，張 印

中國人民解放軍總醫院1第六醫學中心中醫醫學部，3第一醫學中心超聲科，北京 100853；2航天中心醫院，北京100049

慢性腹瀉指排便次數明顯超過平時習慣（＞3次/d），糞質稀薄，可伴有黏液、膿血或未消化的食物，且病程大于4周，或間歇期在2～4周內的復發性腹瀉［1,2］，常見于功能性腸病中的腸易激綜合征伴腹瀉(IBS-D)和功能性腹瀉（FDr）［3］。慢性腹瀉在我國發病率為3%～5%，基層參訓人員特殊群體尤為高發，具有易反復發作、遷延難愈特點，重者可引起吸收不良、水電解質紊亂，甚至焦慮、抑郁等情況，嚴重影響患者身心健康?！堵愿篂a基層診療指南》［4］指出慢性腹瀉應以改善癥狀、提高生活質量為主要目標，提倡以生活方式、情緒及飲食的調整為基礎治療［5］，藥物治療多以調節腸道菌群、解痙止瀉、抗菌及抗焦慮藥物為主［6］，雖然短時間內能緩解臨床癥狀，但效果有限，且易產生耐藥，不良反應發生率亦高［7］。中醫在治療慢性腹瀉上有著獨特的優勢，將該病歸屬到“久瀉”范疇，健脾溫陽是其最常用的臨床治法。然而傳統口服湯劑有諸如煎煮不便、攜帶受限等很多局限性，針灸、外敷、灌腸等外治法也很難獲得良好的治療依從性，對于有效制劑的分子機制研究也較少。故而我們在前期研究中開發了健脾溫陽凝膠劑（SSWYG），將中醫健脾溫陽法和中醫熱熨外敷技術結合起來，有效解決了上述難點。本研究選取80例脾胃虛弱型慢性腹瀉的基層參訓人員進行前瞻性隨機對照研究，同時對SSWYG進行了網絡藥理學及分子對接技術分析，驗證了該凝膠劑臨床療效的同時，進一步闡明其療效機制，為開發新型制劑奠定臨床和藥理學基礎。

1 資料和方法

1.1 SSWYG的臨床療效評價研究

1.1.1 一般資料 研究對象均來源于2023年2月～2023年5月中國人民解放軍總醫院門診病例資料完整的脾胃虛弱型慢性腹瀉患者，共80例，按隨機數字表法隨機分為2組。試驗組40例：功能性腹瀉15例、腸易激綜合征（腹瀉型）患者25例；對照組40例：功能性腹瀉17例、腸易激綜合患者23例，兩組間年齡、身高、體質量、BMI指數、病程時間等一般資料比較差異均無統計學意義（Ρ＞0.05，表1）。本研究所有患者入組前均由研究者與患者本人及家屬充分溝通講解治療程序、可能的不良反應等，簽署了知情同意書，并通過中國人民解放軍總醫院醫學倫理委員會批準（倫審第S2022-602-01號）。

表1 慢性腹瀉患者一般資料比較Tab.3 Comparison of general data of the patients with chronic diarrhea(n=40,Mean±SD)

1.1.2 診斷標準

1.1.2.1 西醫診斷標準 參考2019年由中華醫學會等機構共同制定的《慢性腹瀉基層診療指南》［4］：大便次數增加，超過平時排便次數（＞3次/d）；大便性狀有改變，大便稀薄，含水量超過85%，或伴有粘液、膿血、未消化的食物；病程在4周以上，或在2～4周內反復發作。

1.1.2.2 泄瀉中醫診斷標準 參考2002年中華人民共和國衛生部制定發布的《中藥新藥臨床研究指導原則》［8］：大便次數增多，3次/d以上，便質或水樣便，大便量增加；癥狀持續1 d以上。

中醫證候標準［8］：脾胃虛弱型慢性腹瀉判定標準，主癥：大便時溏時瀉；飲食稍有不慎即發或加重；舌質淡。次癥：食后腹脹；食欲不振；倦怠乏力；神疲懶言；苔薄白；脈細弱。證候的確定：主癥滿足1項，次癥滿足2項即可確診。

1.1.3 納入標準 符合慢性腹瀉的西醫診斷標準；符合泄瀉中醫診斷標準及脾胃虛弱型泄瀉的中醫證候標準；年齡18～45歲；治療期間同意不使用其他針對腹瀉的治療；簽署知情同意書者。

1.1.4 排除標準 痢疾、霍亂、寄生蟲及胃腸部器質性疾病所致腹瀉；合并嚴重原發性基礎性疾病，需服用藥物治療，服用的藥物對本次試驗有影響者；患有嚴重的精神類疾病患者，不能對本次試驗做出客觀的評價者；正在參加其他的藥物臨床試驗患者；病情危重者。

1.1.5 治療方法

1.1.5.1 基礎治療 參考《慢性腹瀉基層診療指南》調整生活方式的規范性基礎治療。

（1）調整飲食結構：避免誘發或加重腹瀉癥狀的食物，例如既往麥麩過敏或乳糜瀉患者，需推薦無麩質飲食；（2）調整生活方式和社會行為，如減少煙酒攝入、注意休息、充足睡眠等；（3）認知治療：功能性腹瀉及IBS患者對疾病的病因和危害的不恰當認知可能會加重癥狀，診療過程中進行良好醫患信任溝通對慢性腹瀉充分正確的認識。

1.1.5.2 對照組治療方法 在基礎治療上給予雙歧三聯活菌膠囊（上海信誼藥廠有限公司，0.21 g×24粒）2粒，3次/d，飯后口服，服用1周。

1.1.5.3 試驗組治療方法 在基礎治療上給予SSWYG外敷，SSWYG由吳茱萸、干姜、木香、乳香、烏藥、小茴香等中藥組成，委托貴州省貴成醫藥科技有限公司制成中藥凝膠劑（50 g/貼）。使用方法：臍部（神闕穴）貼敷，分別于第1、2、3、5、7天應用，1貼/d，每次連續貼敷6～8 h，1周為1療程。

觀察期為1周，治療期間均停用其他相關治療藥物，治療1周后評價療效，隨訪1個月。

1.1.6 觀察指標及療效判定標準

1.1.6.1 觀察指標（1）胃腸癥狀評分：參考胃腸道癥狀評定量表（GSRS）［9］對治療前后排便增多、稀便、腹痛、腹鳴、腹脹、排便緊迫感和排便不盡感共7項臨床癥狀評分。排便增多：0分，1次/d；2分，3次/d；4分，5次/d；6分，7次/d或更多。稀便：0分，標準稠度；2分，略??；4分，糊狀的；6分，水樣的。余5項臨床癥狀評分：0分，無癥狀；2分，短暫偶發的臨床癥狀，經提醒后方意識到癥狀存在；4分，頻發的較長時間的臨床癥狀，平素正常行為活動不受限；6分，持續存在，嚴重影像社會活動；（2）采用Bristol糞便性狀評估表（BSFS）［10］對大便性狀進行評估7型（7分），水樣便，無固形成分；6型（6分），糊狀便；5型（5分），邊緣清楚的柔軟團塊，容易排出；4型（4分），光滑而柔軟，條狀便；3型（3分）表面有裂縫，條狀便；2型（2分），表面凹凸，多塊的臘腸狀；1型（1分），干球狀便，很難排出；（3）中醫證候積分 參考《中藥新藥臨床研究指導原則》［8］泄瀉癥狀分級量化標準由3名副主任醫師經驗自擬量表評價積分。大便泄瀉：無癥狀，0 分；大便不能成形、3～4次/d，2分；大便稀溏、5～10次/d，4分；大便如水樣、10次/d以上，6分。脘腹痞滿：無癥狀，0分；食后脘腹痞滿、0.5 h內自行緩解，2分；食后脘腹痞滿、2h內自行緩解，4 分；持續脘腹痞滿，6分。食欲：食欲正常，0分；食欲較差、食量減少低于1/3，2分；食欲不佳、食減少1/3以上，4分；終日不欲進食、食量較病前減少1/2，6分；倦怠乏力：無癥狀，0分；肢體稍倦、可堅持輕體力工作，2分；四肢乏力、勉強堅持日?；顒?，4分；全身無力、終日不愿活動，6分。神疲懶言：無癥狀，0分；精神不振、不喜多言、不問不答，2分；精神疲乏、思睡、懶于言語、多問少答，4分；精神萎靡、偶語，6分。

1.1.6.2 療效判定標準 參考《中藥新藥臨床研究指導原則》［8］：（1)臨床痊愈：癥狀、體征消失或基本消失，證候積分減少≥95%；（2）顯效：癥狀、體征明顯改善，證候積分減少≥70%；（3）有效：癥狀、體征均有好轉，證候積分減少≥30%；（4）無效：癥狀、體征均無明顯改善，甚或加重，證候積分減少不足30%。

計算公式（尼莫地平法）為：[（治療前積分-治療后積分）/治療前積分]×100%。

1.1.6.3 安全性指標 治療期間，觀察患者貼敷部位出現皮疹、皮膚破潰、水泡等不良事件，分析原因，判斷是否與中藥相關，并監測血尿便常規、肝腎功能；測定患者心電圖，應用不良事件發生率反映不良事件發生情況。

1.1.7 統計學方法 采用excel錄入數據，數據分析采用SPSS26.0，定量數據的描述采用均數±標準差，組間比較采用獨立樣本t檢驗，治療前后的比較，采用配對t檢驗，計數資料采用例（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，以Ρ＜0.05為差異有統計學意義。

1.2 網絡藥理學研究

1.2.1 SSWYG的活性成分及靶標蛋白的篩選 通過中藥系統藥理學數據庫和分析平臺（TCMSP）［11］（https://tcmspw.com/tcmsp.php）檢索吳茱萸、干姜、木香、乳香、烏藥、小茴香以及公丁香的主要活性成分、靶標蛋白。因該方為透皮吸收外用制劑，故口服利用度（OB）等因素可不予考慮，參考類藥五原則［12］設置成分篩選條件：-2＜脂水分配系數（AlogP）＜5、相對分子質量（Mw）＜500、類藥性（DL）≥0.18。將所篩選所得的靶標蛋白經uniprot 數據庫（https://www.uniprot.org/）［13］校正，并進行標準化處理。

1.2.2 獲取慢性腹瀉疾病靶點 在NCBI旗下的GEO數據庫中［14］以“Chronic diarrhea”為關鍵詞檢索，獲得編號為GSE14841的芯片數據原始文件,使用數據庫自帶的GE02R分析工具，自定義分組后保存所有結果，保存為geo.csv文件，使用R語言選擇Ρ＜0.05、|LogFC|＞1為限定值獲得顯著差異基因。以“Chronic diarrhea”為關鍵詞，在GeneCards［15］數據庫（https://www.genecards.org/）,NCBI 基因數據庫［16］（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/），以及DisGeNET數據庫［17］（https://www.disgenet.org/）進行人類基因檢索。將以上4個數據庫的基因合并刪重之后，得到慢性腹瀉相關關鍵基因。

1.2.3 韋恩圖 將1.2.1中篩選出的藥物靶點與1.2.2中獲取的疾病靶點通過Venny 2.1.0軟件進行交集映射，得到治療慢性腹瀉的潛在作用靶點。

1.2.4 PPI網絡圖的構建和拓撲學分析 將1.2.3所獲得的潛在作用靶點輸入String數據庫［18］（https://string-db.org/cgi/input.pl），將生物種類設定為“Homo sapiens”、minimum required interaction score＞0.9，構建PPI網絡，借助Cystoscape 3.8.0［19］中NetworkAnalyzer工具進行PPI網絡節點的拓撲分析，通過degree排序，設立分值大于平均分的基因作為關鍵靶點。

1.2.5 GO分析及KEGG富集分析 將SSWYG治療慢性腹瀉的潛在作用靶點進行GO 的生物過程（BP）、分子功能（MF）、細胞組分（CC）富集，以及KEGG通路富集分析，引用String 數據庫，設置Ρ＜0.05為篩選條件，篩選出SSWYG干預慢性腹瀉的可能生物學過程及通路。

1.2.6 分子對接 將“1.2.1”中篩選出的核心活性成分與關鍵靶點進行分子對接，驗證網絡藥理分析結果的準確性。從PubChem 數據庫（https∶//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）中確定復方中5個度值較高的活性成分的名稱、分子量和2D 結構，然后在RCSB PDB數據庫（http://www.rcsb.org/）中下載慢性腹瀉的5個核心靶點。運用AutoDock Vina軟件（http://vina.scripps.edu/）進行分子對接，測定結合能Affinity值（kcal/mol）即代表兩者結合能，Affinity≤-5kcal/mol，結合能力較好，若結合能值越低，配體與受體兩者結合越緊密、結合越穩定。取結合能最低的前4個對接結果作圖，最后選取affinity最佳構象，使用Pymol軟件分析和觀察對接結果，并將結果可視化處理。

2 結果

2.1 臨床研究結果

2.1.1 胃腸道癥狀評定量表細則評分比較 對照組、試驗組各項癥狀在治療前進行獨立樣本t檢驗，各項癥狀積分的差異無統計學意義（Ρ均＞0.05），表明兩組可進行比較（表2）。治療后，對照組和試驗組在大便次數、稀便形態、排便緊迫感、腹脹、腸鳴以及GSRS總分比較，與治療前都有顯著差異（Ρ＜0.001），且兩組治療后的差異有統計學意義（Ρ＜0.05）；排便不盡感、腹痛癥狀的比較發現，兩組患者與治療前相比差異均有統計學意義（Ρ＜0.05），且試驗組優于對照組，但治療后兩組患者組間比較沒有明顯統計學差異（Ρ＞0.05）。

表2 兩組患者治療前后胃腸道癥狀評分Tab.3 Comparison of GSRS scores between the two groups before and after treatment(n=40,Mean±SD)

2.1.2 兩組Bristol 糞便性狀比較 治療前，對照組的Bristol評分均數為5.90，試驗組為6.10，無統計學差異（t=-1.295，Ρ=0.199）；治療后，對照組的Bristol評分均數為5.08，試驗組為4.38（t=4.259，Ρ＜0.001）。

2.1.3 兩組中醫證候積分比較 對照組、試驗組的大便泄瀉評分、脘腹痞滿評分、食欲評分、倦怠乏力評分、神疲懶言評分在治療前進行獨立樣本t檢驗，各項癥狀積分無統計學差異（Ρ＞0.05），表明兩組可進行比較（表3）。治療后，對照組與試驗組的大便泄瀉評分、脘腹痞滿評分均數差異有統計學意義（Ρ＜0.001；），對照組、試驗組治療前后相比較差異有統計學意義（Ρ＜0.05）；治療后，對照組與試驗組食欲評分、倦怠乏力評分、神疲懶言評分均數差異均有統計學意義（Ρ＜0.001），對照組治療前后相比較差異無統計學意義（Ρ＞0.05），試驗組治療前后相比較差異有統計學意義（Ρ＜0.05）。

表3 兩組患者治療前后中醫證候積分Tab.3 Comparison of TCM syndrome score before and after therapy between the two groups(n=40,Mean±SD)

2.1.4 兩組臨床療效比較 治療1周后，試驗組臨床療效總有效率97.5%，高于對照組45%，差異有統計學意義（Ρ＜0.001）。

2.1.5 不良反應 治療7 d后，兩組患者血尿便常規、肝腎功能以及心電圖檢查均未見異常。治療期間，試驗組中2例患者在用藥第2天后出現臍部皮膚泛紅、瘙癢癥狀，無明顯皮疹、水泡等；追問病史，該2例患者未遵醫囑自行將貼敷時間延長至12 h以上，考慮局部皮膚不良反應與用藥時間過長有關，患者停藥48 h后皮膚不適情況明顯緩解，后繼續按醫囑時間應用藥物后均未再見不良反應，余患者均未見不良反應發生。

2.2 網絡藥理學及分子對接結果

2.2.1 SSWYG 治療慢性腹瀉的靶點篩選 通過TCMSP檢索吳茱萸獲得27個化合物成分、181個靶點，干姜獲得17個化合物成分、24個靶點，木香獲得7個化合物成分、26個靶點，乳香獲得8個化合物成分、74個靶點，烏藥獲得18個化合物成分、176個靶點，小茴香獲得1個化合物成分、7個靶點，公丁香獲得8個化合物成分、172個靶點，經標準化處理后獲得SSWYG相關靶點共241 個。通過GeneCards、NCBI 以及DisGeNET 數據庫分別檢索到1164、66、62個相關靶點，GEO數據庫中篩選得到的GSE14841的芯片實驗的差異靶點進行合并，刪除重復靶標，得到1280 個疾病相關基因。將SSWYG的活性成分靶點與慢性腹瀉的相關靶點韋恩圖制作軟件取交集，獲得68個靶點（圖1）。

圖1 藥物與疾病靶標韋恩圖Fig.1 Wayne diagram of drug and disease targets.

2.2.2 PPI網絡構建及拓撲分析 將2.2.1所得的靶點導入string網站，對SSWYG治療慢性腹瀉的潛在作用靶點進行PPI分析，蛋白互作信息圖可視化，網絡中有68個節點，730 條邊，平均度值為21.8（圖2A）。通過Cytoscape 3.8.0軟件中進行拓撲學分析，核心靶點通過degree排序，獲得33個度值分值大于平均分的關鍵靶點，將排名前20的靶點使用R 4.0.3進行圖片繪制，橫坐標為每個靶點的度值（圖2B）。據此可知，SSWYG治療慢性腹瀉的關鍵靶點主要有絲氨酸/蘇氨酸激酶1（AKT1）、胱天蛋白酶3（CASP3）、白介素6（IL6）、活化蛋白-1（JUN）、血管內皮生長因子A（VEGFA）等。

圖2 SSWYG與慢性腹瀉交集靶點的PPI網絡和拓撲分析Fig.2 PPI network analysis (A) and topological analysis (B) of the intersection targets of SSWYG and chronic diarrhea.

2.2.3 SSWYG 中關鍵成分篩選 通過cytoscape 3.8.0構建了成分-疾病-靶點網絡圖，將篩選出SSWYG的活性化學成分名稱與藥物活性成分MOL ID進行對接，并按degree 值大小排序，將成分進行degree 的排序，degree值越高成分越重要，越可能是SSWYG治療慢性腹瀉的關鍵化合物。選取度值排名前4的活性成分作為關鍵成分進行后續的研究，從高到低的化合物分別為MOL000098 槲皮素（quercetin）、MOL000390 黃豆甙元（daidzein）、MOL000422 山奈酚（kaempferol）、MOL000354異鼠李素（isorhamnetin）。

2.2.4 GO富集分析及KEGG分析 將2.2.2所得關鍵靶點進行GO富集分析，利用R繪制氣泡圖（圖3A）。結果顯示分子功能（MF）72個、細胞組分（CC）富集34種細胞成分，影響了1446條生物過程（BP）。MF方面主要富集在細胞因子受體結合、細胞因子活性、受體配體活性、信號受體激活劑、活性蛋白絲氨酸/蘇氨酸激酶活性、血紅素結合等。CC方面，在膜筏、膜區域、膜微區等富集占比較高。BP主要富集在對脂多糖的反應、對細菌分子的反應、對氧化應激的反應、活性氧的代謝過程、藥物反應細胞對化學應激的反應、對活性氧的反應等。

圖3 SSWYG治療慢性腹瀉關鍵靶點的GO功能分析和KEGG通路富集分析Fig.3 GO function and KEGG analysis of the key targets of SSWYG against chronic diarrhea.A:Bubble map of GO function analysis.B:Bubble map of KEGG analysis.

將關鍵靶點進行KEGG富集分析，利用R繪制氣泡圖（圖3B）。結果顯示靶基因顯著富集在148條信號通路（Count＞2，Ρ＜0.05），選取前20條通路進行可視化分析得到氣泡圖（縱坐標為富集條目，橫坐標表示基因所占比例，圖中氣泡越大代表富集基因數越多，顏色越紅表示富集程度越顯著），除外弓形蟲、動脈粥樣硬化、肺結核等與“慢性腹瀉”不相關的通路后，主要涉及TNF、IL-17、衰老等信號通路。

2.2.5 SSWYG治療慢性腹瀉的關鍵靶點分子對接驗證4種活性成分與CASP3、JNK、IL1B、IL6、AKT1關鍵靶點結合能均較低、配體與受體均具有較好的結合力（圖4A）。其中CASP3與槲皮素和異鼠李亭素、JNK靶點與槲皮素、黃豆甙原和山奈酚結合力最好（圖4B～F）。

圖4 分子對接效能熱圖與藥物活性成分與慢性腹瀉關鍵蛋白對接效能最高的模式圖Fig.4 Heat map of molecular docking efficiency and pattern of the highest docking efficiency between drug active ingredients and the key proteins of chronic diarrhea.A: Heat map. B: CASP3 and MOL000098. C: CASP3 and MOL000354. D: JNK and MOL000098.E:JNK and MOL000390.F:JNK and MOL000422.

3 討論

慢性腹瀉以大便時溏時瀉、飲食稍有不慎即發或加重為主癥，以食后腹脹、食欲不振、倦怠乏力、神疲懶言、舌質淡苔薄白、脈細弱為次癥，脾胃陽虛、中焦虛寒是其最主要的病機。SSWYG主要是由吳茱萸、干姜、木香、乳香、烏藥、小茴香等中藥組成，方中吳茱萸味辛苦而性熱，既能溫胃暖肝祛寒，又能和胃降逆，小茴香、烏藥可溫中散寒、扶助脾陽，顧護中土，共為君藥；木香為臣藥，暢通中焦氣機，降逆導滯；乳香為佐藥，辛竄走散，活血化瘀，諸藥共奏健脾和胃、益氣溫元之功，正可切中慢性腹瀉的病機。本研究的結果進一步證實了其不僅可以改善患者大便次數多、稀便形態、排便緊迫感、脘腹痞滿情況以及Bristol評分，對西藥治療無效的排便不盡感、腹痛、食欲、倦怠乏力、神疲懶言亦有明顯效果，有效率高達97.5%。它的主要優勢：其外敷劑型通過臍療的方式透皮吸收，避免口服劑型難以解決的胃腸降解及肝臟首過效應，提高了藥物的利用率；SSWYG是基于中醫熱熨技術的運用，加強局部血液循環，提高了藥物的滲透和吸收，增強了健脾溫陽方的療效；利用中醫經絡理論神闕穴具有“復元固本、和胃理腸”的功能，達到了更好的臨床效果。此外，SSWYG中的主要成分吳茱萸、乳香，口服時對胃腸粘膜有一定的刺激，部分患者會出現惡心、嘔吐等消化系統不良反應，改成外用凝膠劑型（SSWYG）后并未再出現上述不良反應。

本研究通過網絡藥理學篩選出SSWYG中度值較高的主要活性成分為槲皮素、黃豆甙元、山奈酚、異鼠李素。有研究表明，槲皮素是一種類黃酮化合物，可通過誘導激活的NF-κB信號通路抑制輪狀病毒性腹瀉［20］，而且通過誘導緊密連接蛋白一定程度上恢復了腸道的上皮完整性，顯著減少腸道炎癥［21］；黃豆甙元是一種異黃酮植物雌激素化合物，可通過抑制PI3K/AKT和P38通路相關蛋白的磷酸化及相關基因的水平，修復腸上皮屏障損傷，從而發揮防治腹瀉的作用［22］；山奈酚可通過提高厚壁菌與擬桿菌的比例來重塑腸道微生物，提高有益菌，從而調節腸道微生物群［23］；異鼠李素可通過激活Nrf2/HO-1通路，緩解H2O2引起的腸上皮細胞氧化應激損傷［24］。通過對這些藥物活性成分與慢性腹瀉的相關靶標進行相關性分析，我們可以初步推測，這些主要活性成分發揮的抗腸上皮細胞氧化應激損傷、減少腸道慢性炎癥、調節腸道微生物菌群的功能，很可能就是SSWYG治療慢性腹瀉的機理。

網絡藥理學研究和分子對接技術可通過大數據庫去探索藥物發揮療效的關鍵蛋白和可能的信號通路，詮釋臨床問題。本研究對SSWYG靶點、通路、分子對接結果的綜合分析，也為該新型制劑的療效機制，提供了非常有價值的線索。首先，分子對接結果顯示SSWYG中主要活性成分與AKT1、CASP3、IL6、JUN、VEGFA等關鍵蛋白結合力良好，尤其是JUN和CASP3與復方中多種主要活性成分結合能最低，結合最穩定，提示JUN和CASP3可能是SSWYG治療慢性腹瀉的兩個極其關鍵的蛋白。相關的研究也有證實，CASP3能夠導致DNA裂解促進細胞凋亡，與腸道菌群失調有著重要聯系，下調CASP3蛋白的表達可以改善腸道菌群，顯著增加有益菌的豐度［25］；JUN蛋白是活化蛋白-1（AP-1）轉錄復合物中具有轉錄活性的轉錄因子，對細胞增殖、凋亡等生物學過程進行調控，可響應促炎細胞因子、危險相關分子配體與腸屏障功能障礙相關刺激激活c-Jun氨基末端激酶信號通路，會影響杯狀細胞分泌黏蛋白以及緊密連接蛋白的表達，破壞腸黏液層的完整性，引起腸屏障功能障礙［26,27］。其次，網絡藥理學KEGG富集結果示TNF 信號通路、IL-17 信號通路、細胞衰老可能是SSWYG治療慢性腹瀉的重要相關通路，有報道TNF信號通路的主要受體TNFR1 在大多數組織中表達，與TNF的交聯可以產生經典的促炎反應，激活NF-κB、c-Jun和MAPK通路，影響IL-1、IL-6等各種經典促炎細胞因子的表達，參與腸道炎癥的產生和腸道黏膜的修復過程［28］。故此，我們推測，該方中的槲皮素、黃豆甙元、山奈酚、異鼠李素主要活性成分可能通過作用于JUN、CASP3等核心靶點調控TNF等信號通路達到治療慢性腹瀉的作用，這為下一步我們繼續進行體內體外實驗對SSWYG的療效機制展開更深入的分子機制研究，從而研制出慢性腹瀉的新型藥物奠定更堅實的實驗研究基礎。