Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A在喉鱗狀細胞癌組織中的表達及與臨床病理特征的相關分析①

王莉莉

(大冶市人民醫院病理科,湖北 黃石 435100)

喉鱗狀細胞癌是一種常見的頭頸部腫瘤,其發病率逐年增加。盡管目前的治療手段已取得了一定的進展,但喉鱗狀細胞癌的預后仍然不理想,特別是在晚期病例中。因此,深入了解喉鱗狀細胞癌的發病機制和分子調控網絡,對于開發更有效的治療策略具有重要意義。轉錄因子是一類能夠調節基因表達的蛋白質,它們在細胞增殖、分化、遷移和轉移等生物學過程中發揮著重要作用。扭曲蛋白2(Twist2)、轉錄因子蛋白(Snail)是重要的細胞轉錄因子,已被證實在多種惡性腫瘤中發揮著關鍵作用[1,2]。Xklp2靶蛋白(targeting protein for xenopus kinesin-like protein2,TPX2)和極光激酶A(aurora kinase A,Aurora-A)是參與細胞周期調節的關鍵分子,在腫瘤發生和發展中也起著重要作用。已有的研究表明[3-5],TPX2、Aurora-A在多種腫瘤中的異常表達與腫瘤的增殖能力、侵襲能力存在著密切關聯。然而,關于Twist2、Snail、TPX2和Aurora-A在喉鱗狀細胞癌中的表達情況以及與臨床病理特征的相關性的研究還相對較少,限制了目前對各項分子指標在喉鱗狀細胞癌發展中的具體作用機制的理解。因此,本研究旨在探究Twist2、Snail、TPX2和Aurora-A在喉鱗狀細胞癌組織中的表達情況,并分析其與該癌癥的臨床病理特征之間的關聯性。通過這項研究,希望能夠進一步了解這些分子在喉鱗狀細胞癌發展和預后中的具體作用機制,并為喉鱗狀細胞癌的診斷和治療提供新的分子標志物和治療靶點。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021年1月至2023年7月大冶市人民醫院收治的喉鱗狀細胞癌66例為研究對象,其中男54例、女12例,年齡40～70歲,臨床分型為聲門上型23例、聲門型43例;甲狀軟骨累及17例;臨床TNM分期:Ⅰ-Ⅱ期24例,Ⅲ-Ⅳ期42例;低分化16例,中高分化50例;淋巴結轉移21例;遠處轉移13例。取患者手術切除癌組織和癌旁正常組織分為喉鱗狀細胞癌組與癌旁組織組。(1)納入標準:①均為手術病理診斷為喉鱗狀細胞癌,癌旁組織經病理證實為炎癥或正常黏膜;②患者均在術前告知患者及家屬,經同意后取材;③術前均未行放化療;④臨床資料完整。(2)排除標準:①合并免疫性疾病;②其他部位惡性腫瘤;③合并嚴重感染性疾病。本研究方案取得醫院倫理委員會審批同意。

1.2 方法

(1)標本?；颊呷∧[瘤病灶組織和病灶外0.5cm以上的正常組織為標本,體后1h內切取,將標本置入4%福爾馬林中固定,常規石蠟包埋,4μm連續切片5張。取其中1張經HE染色后作為病理形態對照,1張為陰性對照,其他3張進行免疫組化。(2)試劑及儀器。主要試劑包括兔抗人Twist2多克隆抗體、兔抗人Snail多克隆抗體、兔抗人TPX2多克隆抗體、兔抗人Aurora-A多克隆抗體,均購自北京博奧森生物技術有限公司;sP免疫組化試劑盒,購自福州邁新生物技術開發有限公司;DAB顯色劑,購自北京中衫金橋生物技術有限公司;熒光二抗,羊抗兔FITC—IgG抗體,購自Jackson Immuno Research公司。(3)組織檢測。取癌組織與癌旁組織標本,脫蠟,水化,梯度酒精脫水后經二甲苯透明后,樹膠封片。載玻片上鋪平標本,再次脫蠟、梯度酒精脫水后,加入枸櫞酸緩沖工作液(pH5.5)抗原修復。溫箱內(37℃)孵育45min,滴加1:100稀釋后的一抗,置于4℃冰箱一夜。用0.01M PBS沖洗3次,每次5min,吸去多余液體后滴加二抗,采用DAB顯色劑顯色,蘇木素染色,80%、95%、100%梯度酒精脫水,二甲苯透明2min,樹膠封片。(4)標本觀察。在400×的高倍鏡下選取5個觀察區域,每個區域劃定100個計數細胞,根據染色強度和分布確定各因子指標在喉鱗狀細胞癌組織中的水平[6]。

1.3 結果判定

(1)Aurora-A:觀察細胞質的著色程度,呈黃色或棕黃色顆粒狀則為陽性表達。采用半定量記分法,分別對細胞著色情況和陽性細胞占比進行打分。細胞著色:0～3分分別代表無染色、弱著色、輕度著色、重度著色。陽性細胞占比:0～3分分別代表陽性細胞占0%、1%～10%、11%～50%、>50%。兩項得分相乘,最終得分<4分判定陰性;≥4分判定陽性。(2)TPX2:觀察細胞核的染色情況,細胞核呈現棕黃色顆粒狀,則為陽性細胞。根據陽性細胞在觀察區內的占比評估是否為陽性表達,其中占比>10%判定為陽性。(3)Snail:觀察細胞質或細胞核是否出現棕黃/棕紅顆粒,同樣采用半定量記分法,根據陽性細胞的占比、陽性著色程度分別打分,評分相乘,最終得分<3分判定陰性;≥3分判定陽性。(4)Twist2:觀察細胞質的著色程度和細胞占比,細胞質內出現片狀、顆粒狀則為陽性細胞,以半定量記分法評估是否為陽性表達,最終得分<4分判定陰性;≥4分判定陽性。

1.4 觀察指標

比較兩組Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表達差異,通過ROC曲線分析Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表達診斷喉鱗狀細胞癌的價值;并分析Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表達與喉鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 兩組Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表達比較

結果顯示,喉鱗狀細胞癌組織中Twist2陽性表達、Snail陽性表達、TPX2陽性表達、Aurora-A陽性均高于癌旁組織(P<0.05),見表1。

表1 兩組Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表達比較[n=66,n(%)]

2.2 Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表達診斷喉鱗狀細胞癌的價值分析

ROC曲線分析顯示,Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表達診斷喉鱗狀細胞癌的AUC分別為0.674、0.697、0.818、0.780,均具有較高準確性;診斷敏感度、特異度:Twist2為54.5%、80.3%;Snail為56.1%、83.3%;TPX2為69.7%、93.9%;Aurora-A為63.6%、92.4%,診斷具有一定價值,見表2,圖1。

圖1 Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表達診斷喉鱗狀細胞癌ROC曲線

表2 Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表達診斷喉鱗狀細胞癌價值分析

2.3 Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表達與喉鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系

喉鱗狀細胞癌組織中Twist2陽性表達、Snail陽性表達、TPX2陽性表達、Aurora-A陽性均與年齡、性別、臨床分型無相關(P>0.05),但喉鱗狀細胞癌組織中Twist2陽性表達、Snail陽性表達、TPX2陽性表達、Aurora-A陽性均與甲狀軟骨累及、TNM分期、分化程度、淋巴結轉移、遠處轉移存在相關(P<0.05),見表3-6。

表3 Twist2表達與喉鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系[n(%)]

表4 Snail表達與喉鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系[n(%)]

表5 TPX2表達與喉鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系[n(%)]

表6 Aurora-A表達與喉鱗狀細胞癌臨床病理特征的關系[n(%)]

3 討論

喉鱗狀細胞癌是一種惡性腫瘤,起源于喉嚨(喉部)的鱗狀上皮細胞。它是頭頸部最常見的癌癥之一,通常發生在喉嚨的聲帶、會厭和下喉部,也可能蔓延至喉嚨其他區域。喉鱗狀細胞癌主要表現為聲音嘶啞、吞咽困難、頸部淋巴結腫大等,癥狀可能因腫瘤的大小、位置和分期而有所不同。一些早期的病例可能沒有明顯的癥狀,而在晚期才出現明顯的癥狀。因此,深入探究喉鱗狀細胞癌的發病機制和轉錄因子調控的關系,及早發現并進行診斷和治療非常重要。

在本研究中,喉鱗狀細胞癌組織中的Twist2陽性表達、Snail陽性表達、TPX2陽性表達、Aurora-A陽性均高于癌旁組織。Twist2、Snail均為轉錄因子,其中Twist2參與胚胎發育和上皮間質轉化,Snail參與上皮間質轉化過程。異常的Twist2、Snail表達與多種癌癥有關,如卵巢癌、乳腺癌、咽癌、結直腸癌等,過度表達與腫瘤細胞的浸潤能力、遷移能力以及腫瘤的惡性程度相關[7-9]。TPX2、Aurora-A屬于參與細胞分裂和周期調節的關鍵蛋白[10]。TPX2、Aurora-A異常的表達狀態與細胞分裂的異常、增殖活性的增強以及腫瘤的侵襲和轉移有關,在多種癌癥的發生和發展中表達活躍[11,12]。本研究結果表明,Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A同樣在喉鱗狀細胞癌組織中顯性表達,并可能促進腫瘤細胞的侵襲和轉移,進而參與癌癥的發生過程。在診斷模型中,Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表達診斷喉鱗狀細胞癌的AUC分別為0.674、0.697、0.818、0.780,均具有較高準確性,表明臨床上檢測組織細胞中的Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A表達情況,對喉鱗狀細胞癌的診斷具有一定輔助價值。

本研究進一步評估各因子與患者臨床特征的關系,發現喉鱗狀細胞癌組織中Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A陽性均與甲狀軟骨累及、TNM分期、分化程度、淋巴結轉移、遠處轉移存在相關性。甲狀軟骨累及表示腫瘤侵犯到甲狀軟骨組織,預示著腫瘤的進展和不良預后。同時,TNM分期、分化程度、淋巴結轉移和遠處轉移是評估腫瘤惡性程度的重要指標,TNM分期越高,分化程度越低,出現淋巴結轉移和遠處轉移,表示腫瘤的進展越嚴重。該結果表明,Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A等因子可能通過參與上皮間質轉化和癌細胞有絲分裂調控的途徑,加大了腫瘤細胞的增殖、浸潤和轉移能力。

從各臨床特征看,喉鱗狀細胞癌Twist2陽性表達、Snail陽性表達、TPX2陽性表達、Aurora-A陽性患者的TNM Ⅲ-Ⅳ期占比、低分化占比、淋巴結轉移和遠處轉移占比均高于各陰性組。TNM Ⅲ-Ⅳ期是腫瘤體積較大、有局部擴散和淋巴結轉移的晚期。該結果表明,各因子高表達會促進腫瘤細胞的遷移和浸潤能力,使其更容易侵犯周圍組織和轉移到淋巴結或遠處器官。從分子調控網絡看,各因子還可能與血管生成、抑制細胞程序性死亡等途徑相關,可以提供腫瘤所需的氧氣和營養物質,使得腫瘤細胞具有更強的存活能力,增加了腫瘤的生長和轉移能力,導致喉鱗狀細胞癌出現明顯的轉移跡象。有研究發現,Snail、TPX2等因子的表達與惡性腫瘤疾病的預后具有相關性,高水平表達往往代表預后不良[13,14]。本研究尚未從患者預后角度分析Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A與喉鱗狀細胞癌的關系,在臨床篩查和診療評估中仍存在一定局限性,需要補充分析。

綜上所述,Twist2、Snail、TPX2、Aurora-A在喉鱗狀細胞癌組織中高表達,與患者臨床病理特征相關密切,可作為臨床診斷喉鱗狀細胞癌有效指標。