HPLC-RID法測定不同廠家益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量?

王秋萍 楊邦祝 宋善敏 甘夢蘭 李滿香 何珺 雷陽（81）

摘要：建立了測定益母草中鹽酸水蘇堿含量的HPLC-RID方法，并測定分析了14家藥廠的益母草中鹽酸水蘇堿的含量。結果表明：以Mercury益母草專用柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）為色譜柱，以70%乙腈溶液為流動相、流速1.0 mL/min、柱溫45℃的條件下采用示差檢測器進行檢測，鹽酸水蘇堿在0.100～0.523 mg/mL濃度范圍內呈良好的線性關系；回歸方程為y=91 519 x+1 342.2 （R2=0.991 6），平均回收率100.07 %，RSD為0.71 %，且該方法具有重復性好、操作簡便、快速、穩定、易于普及等優點；各廠家的益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量差異較大，14家廠家中僅有1367和8656這2家的益母草藥材符合藥典標準；鹽酸水蘇堿含量與益母草藥材性狀具有關聯性，市民、藥企和中藥商等在購買益母草藥材時，建議選擇性狀為葉多、青綠、莖細的益母草藥材。

關鍵詞： 益母草；鹽酸水蘇堿； HPLC-RID；不同廠家；藥材性狀

中圖分類號：S567.2; R917文獻標識碼：A文章編號：1006-060X（2024）02-0081-04

Determination of Stachydrine Hydrochloride in Leonuri Herba from Different

Manufacturers by HPLC-RID

WANG Qiu-ping1，2，YANG Bang-zhu1，SONG Shan-min1，GAN Meng-lan1，LI Man-xiang1，HE Jun2，LEI Yang1

（1. Guizhou Vocational College of Agriculture， Qingzhen 551400， PRC;

2. Guizhou Provincial Biochemical Engineering Center， Guizhou University， Guiyang 550025， PRC）

Abstract： A HPLC-RID method was established to determine the content of stachydrine hydrochloride in Leonuri Herba， and then the content of stachydrine hydrochloride in the Leonuri Herba samples from 14 manufacturers was determined. The results indicated that the content of stachydrine hydrochloride demonstrated a good linear relationship within the range of 0.100–0.523 mg/mL using the differential detector with the Mercury column （250 mm × 4.6 mm， 5 μm）， mobile phase of 70：30 acetonitrile-water solution， flow rate of 1.0 mL/min， and column temperature of 45℃. The regression equation was y=91 519 x+1 342.2 （R2=0.991 6）， and the average recovery rate was 100.07% （RSD of 0.71%）. The established HPLC-RID method was characterized by good repeatability， simple operation， rapid determination with stable results， and easy popularization. The content of stachydrine hydrochloride varied significantly among samples from different manufacturers， and only the samples from manufacturers 1367 and 8656 met the standards in the Chinese Pharmacopoeia. The content of stachydrine hydrochloride was associated with the medicinal characteristics of Leonuri Herba. According to the results， we suggested that users， pharmaceutical enterprises， and Chinese medicine manufacturers chose the Leonuri Herba materials with rich green leaves and fine stems.

Key words： Leonuri Herba; stachydrine hydrochloride; HPLC-RID; different manufacturers; medicinal characteristics

益母草（Leonurus japonicus Houtt.）為唇形科益母草屬植物的新鮮或干燥地上部分，別名益母艾、野麻、坤草等，全國大部分地區均有種植[1]。益母草中主要有效成分為益母草堿和鹽酸水蘇堿[2]。藥理作用研究表明，益母草中的生物堿具有顯著的興奮子宮、鎮痛抗炎、改善血液流變學、抗血栓等多種藥理活性[3-5]，為治療月經不調、胎漏難產、產后惡露不盡、瘀血腹痛等婦科病及抗心肌缺血臨床治療的常用良藥[6-8]。目前市面上以益母草為單一原料制成有糖型或無糖型益母草顆粒的國藥準字號廠家多達185家，益母草原藥材中鹽酸水蘇堿的含量檢測是益母草顆粒生產中的必要步驟。由于各廠家生產的益母草顆粒中鹽酸水蘇堿含量的差異，臨床和藥理試驗發現，有病人在服用常規或過量益母草藥材后，人體出現過敏、腹瀉等不良反應，有的甚至出現嚴重的肝、腎等臟器損傷[9-12]。因此，益母草藥材質量的把控至關重要，而高效快捷的鹽酸水蘇堿檢測技術也顯得尤為迫切。目前，用于測定益母草中鹽酸水蘇堿含量的方法有HPLC-UV法、HPLC-ELSD法、HPLC-MS法、HPLC-DAD法等[13-16]，它們大多儀器昂貴、操作繁雜、維護較難，不便于在中小型企業中普及應用。因此，亟需建立一種操作簡便、快速、穩定、易于普及的方法，以便各類型藥企普及益母草藥材中鹽酸水蘇堿的檢測。

市售的益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量常常存在較大差異，與藥企、中醫院等具有檢測儀器相比，普通市民在購買益母草藥材時很難確定其有效成分含量。而鹽酸水蘇堿含量往往與益母草藥材性狀具有很大的關聯，分析不同廠家益母草藥材性狀與鹽酸水蘇堿含量的關系，可為市民、藥企和中藥商購買益母草藥材提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 主要儀器 1100 系列分析型HPLC[安捷倫科技（中國）有限公司]，Mercury益母草專用柱（大連依利特分析儀器有限公司），BSA124S電子天平[賽多利斯科學儀器（北京）有限公司]；其他為一般常規儀器。

1.1.2 試藥與試劑 鹽酸水蘇堿對照品（100%，批號122683，中國食品藥品檢定研究院），益母草藥材（貴陽市太升中藥材市場的誠信、啟源、惠源等14家中藥廠家，用廠家老板的手機尾號后4位作為該藥材的代號），乙腈（色譜純，天津市科密歐化學試劑有限公司）；其他為常規試劑（分析純）。

1.2 試驗方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Mercury益母草專用柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相為70%乙腈溶液；流速1.0 mL/min；柱溫45℃；示差檢測器，進樣量10 μL，樣品上機前過0.45 μm微孔濾膜。

1.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的對照品適量，加70%乙醇制成含鹽酸水蘇堿0.100 mg/mL的溶液，搖勻備用。

1.2.3 供試品溶液制備 參照2015版《中華人民共和國藥典》[12]制備，樣品置于70℃烘箱烘至恒重，粉碎過40目篩，以八分法對角取樣。稱取樣品粉末約1 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精準加入70%乙醇25 mL，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失重量，搖勻過濾備用。

1.2.4 方法學考察 （1）專屬性試驗：取對照品、供試品溶液進行測定，記錄色譜圖。（2）線性關系考察：精密稱取干燥至恒重的對照品適量，加70%乙醇制成鹽酸水蘇堿濃度分別為0.100、0.201、0.300、0.402、0.523 mg/mL的溶液，搖勻，按1.2.1色譜條件進行HPLC分析，記錄色譜圖。以鹽酸水蘇堿的濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，進行回歸分析。（3）重復性試驗：取同一批樣品6份，按1.2.3配制供試品溶液，按1.2.1色譜條件進行測定，根據測定值計算RSD。（4）穩定性試驗：按1.2.3配置供試品溶液，靜置0、2、4、6、8、10、12 h后分別進行測定，記錄色譜圖，根據測定值計算RSD。（5）精密度試驗：精密吸取對照品溶液，連續測定6次，記錄色譜圖，按測定值計算RSD。（6）回收率試驗：精密稱取益母草粉末2 g，按1.2.3方法制成待測樣品，取6份樣品，其中：2份精密加入0.273 mg/mL的鹽酸水蘇堿1 mL；2份精密加入0.341 mg/mL的鹽酸水蘇堿1 mL；2份精密加入0.409 mg/mL的鹽酸水蘇堿1 mL。按1.2.1色譜條件分別測定，記錄色譜圖，計算平均回收率和RSD值。

1.2.5 不同廠家益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量的測定 按1.2.3的方法處理14個廠家的4批次益母草藥材，配制成供試品溶液，按1.2.1色譜條件分別進行測定，計算各廠家各批次藥材的鹽酸水蘇堿含量。

1.3 數據處理

采用Excel 2007軟件對數據進行整理和統計分析。

2 結果與分析

2.1 對照品及樣品的HPLC圖譜

分別取對照品溶液、供試品溶液進行HPLC分析，色譜圖如圖1所示，鹽酸水蘇堿的出峰時間約為11 min，峰型完整，無干擾。

2.2 方法學考察結果

2.2.1 線性關系考察 回歸方程為y=91 519 x+1 342.2，

R2為0.991 6，表明建立的回歸方程相關性良好。此外，回歸方程的線性范圍為0.100～0.523 mg/mL。

2.2.2 重復性試驗 鹽酸水蘇堿含量為0.66%，其RSD值為0.23%，表明該檢測方法的重復性良好。

2.2.3 穩定性試驗 鹽酸水蘇堿含量為0.66%，其RSD值為0.29%，表明12 h內供試品溶液穩定性良好。

2.2.4 精密度試驗 由表1可知，鹽酸水蘇堿的平均加樣回收率為100.07 %，RSD為0.71 %，表明該檢測方法的精密度良好。

2.3 不同廠家益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量測定

由表2可知，益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量最高的是廠家1367，達0.824%，其藥材性狀為葉多、葉綠、莖細；其次為廠家8656，鹽酸水蘇堿含量達0.679%，其藥材性狀為葉多、青綠、莖細。益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量在0.30%～0.50%的廠家有5083、8299、4368、3606、1458，其藥材性狀大多為色青綠或略黃、莖略多或莖粗。益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量在0.30%以下的廠家有5918、6813、7947、4636、2356、2768、2501，其藥材性狀大多為莖多葉少、葉色略黃、莖粗。2015版《中華人民共國藥典》規定：益母草藥材按干燥品計算，其鹽酸水蘇堿（C7H13NO2·HCl）含量不得少于0.50 %[15]，表明僅有廠家1367和8656的益母草藥材符合藥典標準。因此，市民、藥企和中藥商等在購買益母草藥材時，應選擇性狀為葉多、青綠、莖細的益母草藥材。

2.4 符合標準藥材復檢

從符合標準的2廠家購買大批量益母草藥材，復檢其益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量分別為0.66% 和0.79%，均大于0.50%的要求。

3 小結與討論

益母草中鹽酸水蘇堿屬于強極性的酸堿兩性小分子化合物，反相色譜柱較難將其分離，常用的C18柱也較難將其分離[13]。該研究采用的正向酰胺柱具有良好的分離效果，克服了以上不足。

該研究所用樣品上機前均過0.45 μm微孔濾膜處理，可較好地保護色譜柱及儀器，同時也可減少污染或雜質對測定結果的影響。

李偉等[13]報道的益母草原藥材鹽酸水蘇堿的檢測方法為HPLC-ELSD（蒸發光散射檢測器），使用該方法需要有較高的飄移管溫度和一定的載氣體積流量，耗時耗能耗材。周超等[14]采用HPLC-MS法同時測定益母草及益母草顆粒中鹽酸水蘇堿及益母草堿含量時，流動相需要梯度洗脫分流進入質譜儀，對柱溫、毛細管電壓、探頭溫度、錐孔電壓、定量離子等都有一定的要求，儀器價格較貴、操作繁雜、不易普及；該研究建立的HPLC-RID法測定益母草中鹽酸水蘇堿含量與前人研究已報道的HPLC-ELSD[13]、HPLC-MS[14]、HPLC-UV[15]、HPLC-DAD[16]法相比，具有重復性好、操作簡便、快速、穩定、易于普及等優點，可滿足一般藥企對益母草藥材的質量控制。

該研究對市場上不同廠家益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量進行檢測，結果發現，各廠家的益母草藥材中鹽酸水蘇堿含量差異較大，14家廠家中僅有1367和8656這2家的益母草藥材符合藥典標準。此外，鹽酸水蘇堿的含量與益母草藥材性狀有較大關聯度，鹽酸水蘇堿含量較高的益母草藥材性狀大多為葉多、青綠、莖細，含量較低的益母草藥材性狀大多為莖多葉少、葉色略黃、莖粗。因此，市民、藥企和中藥商等在購買益母草藥材時，應選擇性狀為葉多、青綠、莖細的益母草藥材。

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（責任編輯：張煥裕）