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健康獻血者血漿可溶性糖蛋白A(GPA)在抗-M與抗-“Mia”抗體陽性及陰性中表達差異的分析研究

2024-05-09 20:07梁延連鄔林楓唐雄馳蘇宇清孫麗艷深圳市血液中心輸血醫學研究所廣東深圳58040廣西平南縣人民醫院廣西平南537300
現代檢驗醫學雜志 2024年1期
關鍵詞:糖蛋白獻血者血型

梁延連,鄔林楓,唐雄馳,蘇宇清,吳 凡,梁 爽,孫麗艷(.深圳市血液中心輸血醫學研究所,廣東深圳 58040;.廣西平南縣人民醫院,廣西平南 537300)

MNS 血型是由50 種抗原組成的血型系統,其抗原的多態性主要由于同源基因GYPA/GYPB/GYPE 的重組、突變、融合、交換等[1]。MNS 血型系統的抗原由血型糖蛋白A(glycoprotein A,GPA)與糖蛋白B(glycoprotein B,GPB)的相關基因GYPA 與GYPB 編碼。不僅輸血、妊娠或器官移植等免疫會導致機體產生紅細胞不規則抗體,一些慢性炎癥或燒傷患者血漿中也常常檢出抗-M抗體,有證據表明兒童受細菌感染后被刺激產生抗-M 抗體[2],這類抗體被稱為“天然抗體”,在低于37℃條件下反應增強???M 與抗-“Mia”是MNS 血型系統中最常見的抗體,有時表現出劑量效應,約78%的抗-M 抗體為IgM/IgG 混合型,可與M 抗原陽性細胞發生凝集[3],不僅會影響ABO血型鑒定,還會導致交叉配血困難與溶血性輸血反應。據研究,GPA/ GPB 蛋白異構體可以直接影響MNS 血型抗原在紅細胞上的表達量[4]。為了解不同個體血漿中可溶性GPA 表達量的差異,本文檢測了健康獻血者血漿中的GPA 含量,同時分析不規則抗體陰性個體與血漿中存在抗-M 與抗-“Mia”抗體陽性個體間的差異,報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 樣本來源于2022年2月9日~2023年2月15日的深圳市血液中心健康獻血者血漿,常規篩查了111 156 例血漿的不規則抗體,對陽性樣本進一步鑒定抗體特異性。從中隨機選擇不規則抗體陰性的NN 型(Ⅰ組,n=118)與MM 型(Ⅱ組,n=51),血漿中存在抗-M 抗體的NN 型(Ⅲ組,n=145)與抗-“Mia”抗體的隨機型(Ⅳ組,n=87),分別測定血漿中GPA 的含量。所有樣本收集均經過書面知情同意并通過血液中心倫理委員會批準。

1.2 儀器與試劑 SUNRISE 溫控酶標儀,Diamed-ID 12SI 卡式離心機,Diamed-ID 37SI 孵育器,日本KA-2200 血型血清學離心機。人糖蛋白A(GPA)ELISA 檢測試劑盒(上海紀寧實業有限公司,批號:202302);單克隆鼠抗人血清anit-M(IgM 性質,批號:20210608,20220725),anit-N(IgM 性質,批號:20210407)由上海血液生物科技有限責任公司提供;不規則抗體篩查細胞(廣東營安生物科技有限公司,批號:20220901);不規則抗體鑒定譜細胞Makropanel 16(廣東營安生物科技有限公司,批號:20220906);Liss/抗人球蛋白卡(BIO-RAD,批號:50531.66.14);樣本稀釋液(瑞士Diamed公司,批號:057610005)。

1.3 方法

1.3.1 抗體與血型鑒定:使用篩查細胞對健康獻血者111 156 例的血漿進行不規則抗體篩查,應用譜細胞對抗體篩查陽性的血漿進行抗體特異性鑒定,嚴格按照抗-M 與抗-N 試劑說明書操作規程檢測MN 抗原的表現型。

1.3.2 樣本分組:不規則抗體陰性的NN 型與MM型作為對照組,血漿中存在抗-M 抗體的NN 型與抗-“Mia”抗體的隨機型作為研究對象組。

1.3.3 GPA 含量測定:采用ELISA 方法檢測對照組與研究對象組不同個體血漿中GPA 的含量,具體操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.4 統計學分析 采用Graphpad Prism 7.0 軟件對相關數據進行統計學分析,計量資料以均數±標準差(±s)表示,組間比較采用獨立樣本t檢驗。

2 結果

2.1 不規則抗體頻率 檢出111 156 例的健康獻血者血漿不規則抗體陽性共716 例,陽性率0.64%(716/111 156)。其中抗-M 抗體陽性145 例,占不規則抗體陽性群體的20.25%(145/716);抗-“Mia”抗體陽性87 例,占不規則抗體陽性群體的12.15%(87/716)。

2.2 血漿GPA 平均含量 Ⅰ組,Ⅱ組,Ⅲ組和Ⅳ組血漿中GPA 平均含量依次為:9.941±0.252,10.970±0.256,5.139±0.129 和4.28±0.139ng/ml,兩兩比較,差異具有統計學意義(t=2.82,18.65,19.00,21.80,23.01,均P<0.001)。Ⅰ組與Ⅱ組的GPA 平均含量較高,Ⅲ組與Ⅳ組的GPA 平均含量較低,顯示GPA 平均含量在不規則抗體陰性(Ⅰ組與Ⅱ組)的血漿中較高,在抗-M 與抗-“Mia”抗體陽性(Ⅲ與Ⅳ組)的血漿中較低,差異具有統計學意義(均P<0.01)。

3 討論

人類血型糖蛋白(GP)主要包括GPA,GPB,GPC,GPD。GPA 不僅在人類紅細胞表面具有高表達的特征,還表達于人體的肝、腎、血管等器官與組織液(細胞膜、細胞外液、血漿以及黏液)中[5]。GPA 位于紅細胞膜外的糖基化N 端,具有MN 血型特異性的位置是外來生物:流感病毒、惡性瘧原蟲、大腸埃希菌、甲型肝炎病毒(HAV)或寄生蟲的受體[6]。GPA/GPB 相關基因GYPA/GYPB 家族的核苷酸具有多態性,GYPA 與GYPB 基因發生交換或融合會導致GPA/GPB 融合為GP(A-B-A),GP(B-A-B)等多態性表達,而這種基因的轉換和平衡的選擇正是一些病毒與寄生蟲感染的受體[7],因此,人類群體中有部分人即使無輸血,妊娠或器管移植的免疫過程也產生了抗-M 或抗-“Mia”抗體。GP 除了攜帶MNSs 血型系統的抗原和Gerbich血型抗原決定族參加機體的免疫反應外,還可以參與宿主-病原體的相互作用。GPA 相關基因GYPA的異常表達與2 型糖尿病或某些心血管疾病和癌腫相關,同時,GYPA 基因座的突變頻率已作為大規模篩查環境放射與化學污染的常規手段[4]。還有研究發現,GPA/GPB 在血漿中的濃度與高脂血癥、動脈粥樣硬化相關,也是亞臨床慢性炎癥、慢性感染、糖尿病和自身免疫性疾病的生物標志物[8-9]。GPA 作為一種可溶性糖蛋白,它在人體血漿中的表達量與蛋白結構的變異與人類疾病息息相關,是疾病診斷的重要標記。糖蛋白A(GPA)在人體血液中不僅可以維持紅細胞膜表面的負電荷恒定,防止紅細胞聚集,還可以間接影響紅細胞膜的柔性和機械穩定性。另外,GPA 的糖蛋白殘基與病毒或細菌結合后會引發紅細胞膜剛性結構的變化,在受免疫致敏后有可能產生相關抗原的同種抗體。GPA 表達的M 或“Mia”抗原的多態性影響抗-M 抗體或抗-“Mia”抗體的特異性,而GPA 由相關基因GYPA 編碼,GYPA基因序列中堿基的變異可以把MN 血型基因區分為M101,M102,M103,M201,M202,N101,N102,N103,N104 和N201[10]型,由此不同個體血漿中的抗-M 抗體與異體間M 抗原陽性者反應時出現劑量效應或強弱不同的凝集現象。另有研究者認為,抗-“Mia”抗體的產生與HLA-DRB1*0901基因密切相關,HLA-DR4,DR7 和DR9 分子可能比其他表型更積極地參與激活抗MiШ 糖蛋白的免疫應答,HLA-DR9 個體的細胞可能比其它表型的細胞更有效地誘導抗-“Mia”抗體的產生[11-12]。為探討GPA 在人體血漿中的表達量與抗-M 與抗-“Mia”抗體之間的相關性,本文通過篩查111 156 例健康獻血者血漿的不規則抗體,發現紅細胞血型不規則抗體陽性有716 例(0.64%),除了Rh 血型系統的抗-E 與抗-c 抗體以外,主要以MNS 血型系統的抗-M 或抗-“Mia”抗體為主,其中抗-M 抗體在不規則抗體陽性群體中占20.25%,抗-“Mia”抗體占12.15%。GPA 在不同個體血漿中的表達量存在差異:在不規則抗體陰性個體血漿中較高,在抗-M 與抗-“Mia”抗體陽性的個體血漿中較低,差異具有統計學意義(P<0.01)。這種差異是否提示了血漿中的抗-M 與抗-“Mia”抗體具有中和可溶性GPA 的能力?需進一步跟蹤監測產生抗-M 與抗-“Mia”抗體前及抗體消失后血漿中GPA 表達量的變化來驗證。

綜上,對健康獻血者不同個體血漿中GPA 的定量檢測,發現GPA 表達量與血漿中存在抗-M 及抗-“Mia”抗體的群體具有相關性,存在統計學差異。該研究結果為深入探討血漿中GPA 與機體被外界環境或同種抗原免疫后產生抗-M 及抗-“Mia”抗體的機理提供數據參考,為提高疾病診斷與安全輸血打下基礎。

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