息風止痛顆粒質量標準研究

廣西中醫藥研究院，廣西 南寧 530022

息風止痛顆粒是廣西強壽藥業集團有限公司根據壯族民間驗方委托我院研究開發的新藥，主要由白芍、當歸、白芷、延胡索、天麻、川芎等八味藥材經提取加工精制而成的顆粒劑。具有養血息風，祛風止痛。用于內外風所致的偏頭痛。如前額痛、眉棱骨痛、太陽穴痛、巔頂后枕部痛等癥。為了更好控制制劑的質量，本實驗采用薄層色譜法對處方中當歸、白芷、延胡索、天麻、川芎進行鑒別，采用高效液相法對白芍中的芍藥苷［1］進行含量測定，結果本法操作簡便，可作為本品的質量控制。

1 儀器、試劑與樣品

1.1 儀器:日本島津公司LC－10AT高效液相色譜議;SPD－10A紫外檢測器;威瑪通用多媒體色譜數據工作站。

1.2 試藥:芍藥苷對照品:由中國藥品生物制品檢定所提供 (批號110736－200320，供含量測定用)。甲醇為色譜純，水為重蒸餾水。實驗樣品及缺白芍的陰性對照樣品由廣西強壽藥業集團有限公司提供

2 方法與結果

2.1 鑒別試驗

2.1.1 當歸、川芎的薄層色譜鑒別。取本品5g，研細，加甲醇20mL，加熱回流30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水15mL使溶解，用乙醚提取2次，每次20mL，合并乙醚液，用2%碳酸氫鈉溶液20mL提取，棄去乙醚液，堿水溶液加鹽酸調pH值至2－3，用乙醚提取2次，每次20mL，合并乙醚提取液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取阿魏酸對照品加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。再取缺當歸、川芎藥，材的陰性樣品5g，同法制成陰性對照溶液。吸取上述供試品溶液和陰性對照溶液各10μl，對照品溶液5μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯－醋酸乙酯－甲酸 (7.5∶3∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈 (254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性無干擾。

2.1.2 白芷的薄層色譜鑒別。取本品5g，研細，加甲醇20mL，加熱回流30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20mL使溶解，用正丁醇20mL，振搖提取，提取液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取白芷對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。再取缺白芷藥材的陰性樣品5g，同法制成陰性對照溶液。吸取上述三種溶液各10μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯－醋酸乙酯－丙酮 (7∶3∶2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈 (365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯1－2個相同顏色的熒光斑點。陰性無干擾。

2.1.3 延胡索薄層色譜鑒別。取本品5g，研細，加甲醇20mL，加熱回流30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加10%鹽酸溶液20 mL使溶解，用乙醚振搖提取2次，每次20mL，棄去乙醚液，酸水溶液加濃氨試液調pH值至9－10，用氯仿20mL振搖提取，提取液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索乙素對照品加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。再取缺延胡索藥材的陰性樣品5g，同法制成陰性對照溶液。吸取上述供試品溶液和陰性對照溶液各10μl，對照品溶液5μL，分別點于同一以1%氫氧化鈉制成的硅膠G薄層板上，以正己烷－氯仿－甲醇 (7.5∶2.5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸汽中熏至斑點顯色清晰，置紫外光燈 (365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性無干擾。

2.1.4 天麻的薄層色譜鑒別。取本品5g，研細，加甲醇20mL，加熱回流30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20mL使溶解，用正丁醇20mL，振搖提取，提取液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取天麻對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取缺天麻藥材的陰性樣品5g，同法制成陰性對照溶液。吸取上述三種溶液各10μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯－甲醇－水 (9∶1∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性無干擾。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱:Diamonsil C18(250mm×4.6mm，5mm)，流動相:甲醇－水 (33.5:66.5);流速:1.0mL/min;檢測波長:230nm;柱溫:27℃。理論板數按按芍藥苷峰計算，應不低于1500”。

2.2.2 對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含30μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備取本品裝量差異項下的內容物，研細，取約1g，精密稱定，加甲醇30 mL，置水浴加熱回流30min，濾過，濾液置50mL量瓶中，用少量甲醇分次洗滌容器和殘渣，洗液濾入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.2.4 陰性干擾試驗取缺白芍的陰性樣品，按正文擬訂的供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液，按正文擬訂的色譜條件測定。結果陰性對照在芍藥苷出峰位置無吸收峰，表明處方中其它成分對測定無干擾 (見圖1)。

2.2.5 線性關系考察精密稱取黃芩苷對照品12.25mg，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備溶液 (濃度為0.245mg/mL)。精密量取對照品貯備溶液0.4、1、2、3、5mL，分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別作為對照品溶液 (濃度分別為9.80mg/mL、 24.50mg/mL、 49.00mg/mL、 73.50mg/mL、122.50mg/mL)按上述的色譜條件測定。以芍藥苷對照品進樣量 (mg)為橫坐標 (X)，峰面積積分值為縱坐標(Y)繪制標準曲線，得回歸方程為:Y=2929592X－34874.2，r=0.9999。結果表明，當進樣量在 0.0976～2.4400mg范圍時，芍藥苷進樣量與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.2.6 精密度試驗 對同一供試品溶液，按上述的色譜條件，連續測定5次，平均值為1.62 mg/g，RSD為1.51%(n=5)。試驗表明，本法的精密度良好。

2.2.7 重復性試驗 對同一批樣品平行測定5份，結果平均值為1.64mg/g，RSD=1.26%(n=5)結果表明，本法的重復性良好。

2.2.8 穩定性試驗對同一份供試品溶液，每隔一定時間測定一次，共測定7次，平均值為1.63 mg/g，RSD為1.92%(n=7)。試驗表明供試品溶液在24h內，供試品溶液穩定。

2.2.9 加樣回收率測定 精密稱取芍藥苷對照品10.26mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液 (濃度為0.2052mg/mL)。精密稱取重復性試驗項下的樣品 (芍藥苷含量為1.64mg/g)0.5g，共取5份樣，分別精密加入上述對照品貯備液4.0mL，再加甲醇至30mL，按上述的供試品溶液制備項下，自“置水浴上加熱回流30min”起，依法操作。測定，計算回收率，結果平均回收率為98.67% ，RSD=1.32%(n=5)，詳見表1。

表1 芍藥苷含量測定加樣回收率測定結果

2.2.10 樣品測定 按擬訂的含量測定方法，測定了本品3批樣品中芍藥苷含量結果分別為15.6mg/袋、16.4mg/袋、14.9mg/袋。

3 討論

參照《中國藥典》2005年版一部“白芍”項下【含量測定】項所使用的流動相［1］，但分離效果不好，經反復試驗和調整，最后采用甲醇－水 (33.5:66.5))為流動相，芍藥苷與相鄰峰能達到基線分離。測定波長，采用《中國藥典》2005年版一部“白芍”項下【含量測定】的波長。對樣品進行回流提取和超聲處理對比，結果回流提取效果比超聲處理效果好，故供試品溶液的制備，故采用回流提取。

［1］國家藥典委員會。中華人民共和國藥典一部，北京:化學工業出版社，2005:68