凝血酶激活纖溶抑制物基因啟動子區-438A/G多態性與腦梗死的關系①

陳煜森，曾志良,2，林智君，冼文川，鐘望濤，趙斌，許志恩

凝血酶激活纖溶抑制物基因啟動子區-438A/G多態性與腦梗死的關系①

陳煜森1，曾志良1,2，林智君1，冼文川1，鐘望濤1，趙斌1，許志恩1

目的分析中國漢族人群凝血酶激活纖溶抑制物基因啟動子區-438A/G(TAFI-438A/G)多態性與動脈粥樣硬化性腦梗死(ACI)發病的關系。方法 225例ACI患者(病例組)和184例健康體檢者(對照組)采用聚合酶鏈反應-限制性內切酶片段長度多態性分析方法(PCR-RFLP)檢測TAFI-438A/G多態性。結果TAFI-438A/G基因型及等位基因頻率在病例組與對照組之間無顯著性差異。性別分層后，男性腦梗死組A等位基因頻率為28.6%，高于對照組20.6%(P=0.039)；AA基因型為9.0%，高于對照組1.9%(P= 0.019)；在女性中無顯著性差異。結論TAFI-438A/G可能與男性腦梗死的發病有關，AA基因型可能增加男性腦梗死患病風險。

凝血酶激活纖溶抑制物；啟動子；基因多態性；動脈粥樣硬化；腦梗死

[本文著錄格式]陳煜森，曾志良，林智君，等.凝血酶激活纖溶抑制物基因啟動子區-438A/G多態性與腦梗死的關系[J].中國康復理論與實踐,2012,18(5):406-408.

動脈粥樣硬化性腦梗死(atherosclerotic cerebral infarction,ACI)是一種復雜性疾病，是多種環境因素、多基因相互作用的結果。大量家系研究和流行病學研究表明，遺傳易感性在腦卒中的發生中起重要作用[1-2]。腦梗死相關的易感基因主要涉及腎素血管緊張素系統、脂代謝、凝血/纖溶和動脈硬化[2-4]。凝血酶激活纖溶抑制物(thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI)在凝血和纖溶系統中起著重要的作用，參與動脈血栓形成[5-7]，TAFI基因可能是腦梗死發病相關的候選基因。TAFI基因啟動子-438A/G(TAFI-438A/G)多態性對TAFI抗原表達有調控作用[8]，可能與腦梗死的發病相關。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例組(n=225)：其中男性145例，女性80例；年齡38～80歲，平均(67.60±10.61)歲；為本院2006年8月～2007年11月在神經內科住院的ACI患者，病程1周以內，均為漢族人，并經過臨床及CT和/或MRI確診(依照第四屆全國腦血管病學術會議診斷標準)。排除心臟源性栓塞、動脈炎、血液病等其他原因引起的腦梗死。

對照組(n=184)：其中男性107例，女性77例；年齡37～78歲，平均(66.11±11.02)歲；為本院健康體檢者，均為漢族人，無腦卒中史，并經臨床檢查和/或影像學檢查排除腦卒中。排除感染、發熱及炎癥性疾病、肝腎功能不全、血液病、自身免疫性疾病等。

詳細記錄入選者的腦血管病危險因素，包括高血壓、糖尿病、吸煙、血脂等。所有標本的收集均經本人或家屬同意。

1.2基因組全血DNA提取 用QIAGEN酶法提取全血DNA。

1.3 多態性檢測 應用聚合酶鏈反應-限制性內切酶片段長度多態性分析方法(PCR-RFLP)檢測TAFI-438A/G多態性，引物設計參考Henry[8]。

1.4 統計學分析 采用SPSS 11.5統計軟件和遺傳學數理統計方法進行統計分析，采用基因計數計算各組基因型頻率和等位基因頻率，Hardy-Weinburg平衡吻合度和基因頻率和基因型統計分析采用χ2檢驗或Fisher確切概率法。顯著性水平α=0.05。

2 結果

2.1 電泳圖 TAFI-438A/G的HpyCH4IV酶切結果顯示，GG基因型包括344 bp和41 bp 2個片段，AA基因型只有385 bp 1個片段，AG基因型包括385 bp、344 bp和41 bp 3個片段(圖1，41 bp片段由于過小未能顯示)。選取1和2號標本送上海生物工程技術服務有限公司進行測序，測序結果與PCR-RFLP結果吻合。

圖1 TAFI-438A/G位點擴增片段HpyCH 4IV酶切產物電泳圖

2.2 Hardy-Weinburg平衡檢驗 病例組與對照組人群的TAFI-438A/G基因型分布經χ2檢驗均符合Hardy-Weinburg平衡，表明TAFI-438A/G的多態性位點的基因型分布在所研究的人群中已達到遺傳平衡。見表1。

表1 基因型分布的Hardy-Weinburg平衡吻合度檢驗

2.3 基因型及等位基因頻率 病例組A等位基因頻率為26.4%，與對照組23.0%無顯著性差異(P=0.271)；AA基因型7.1%，與對照組4.9%無顯著性差異(P= 0.351)；GG基因型54.2%，與對照組58.7%無顯著性差異(P=0.364)與對照組均無顯著性差異。見表2。

性別分層后，病例組男性A等位基因頻率28.6%，高于對照組20.6%(P=0.039，OR=1.549，95% CI：1.020～2.353)；AA基因型9.0%，高于對照組1.9%(P=0.019，OR=5.170，95%CI：1.142～23.419)；GG基因型51.7%，與對照組60.7%比較無顯著性差異(P=0.154，OR=5.170，95%CI：0.417～1.149。見表3。

病例組女性A等位基因頻率22.5%，與對照組26.6%比較無顯著性差異(P=0.396，OR=0.800，95% CI：0.478～1.339)；AA基因型3.8%，與對照組9.1%比較無顯著性差異(P=0.204，OR=0.390，95%CI：0.097～1.565)；GG基因型58.8%，與對照組55.8%比較無顯著性差異(P=0.713，OR=1.126，95%CI：0.598～2.120)。見表4。

表2 兩組TAFI-438A/G基因型及等位基因頻率比較

表3 兩組男性TAFI-438A/G基因型及等位基因頻率比較

表4 兩組女性TAFI-438A/G基因型及等位基因頻率比較

3 討論

血液凝固和纖維蛋白溶解系統在血栓形成過程中起著重要作用，TAFI在血液凝固和纖維蛋白溶解的平衡中發揮紐帶作用。人血漿TAFI抗原水平的變異很大，難以用環境因素解釋，可能主要受遺傳控制。TAFI基因啟動子區多態性與TAFI抗原水平密切相關，TAFI-438A/G可以解釋41%的遺傳可能性[8]。

血漿TAFI水平的變異可能與腦血管病有關。Montaner等報道，缺血性腦卒中患者發病后平均4.6 h測量TAFI血漿濃度，發現TAFI濃度高于健康對照組，而且神經系統癥狀惡化組TAFI濃度最高，其次為神經系統癥狀改善組，最低的是癥狀穩定組，提示TAFI濃度與腦梗死的發生、急性期病情的變化相關[9]。Leebeek等研究顯示，缺血性腦卒中患者功能性TAFI血漿水平高于健康對照組，TAFI抑制劑使缺血性腦卒中患者血凝塊溶解時間增加，功能性TAFI血漿水平最高組比最低組的患缺血性腦卒中的風險高[10-11]。

Franco等認為，TAFI-438A/G多態性位點非?？拷D錄因子結合的位置，位于Vitelogenin基因結合蛋白(VBP)轉錄因子結合位置下游1 bp[12]，其多態性可能會通過影響特異轉錄因子的結合或者改變染色質在TAFI基因座位上的結構，從而改變啟動子的轉錄活性，影響抗原水平[13]。因此TAFI基因啟動子區多態性可能與腦梗死的發病相關。

TOAST(the Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment)分型是缺血性腦卒中病因學研究最常用的方法。Ladenvall等根據TOAST分析了TAFI基因11個不同的單核苷酸的多態性(SNP)及TAFI血漿水平與缺血性腦卒中的相關性，其中包括TAFI-438A/G，結果發現TAFI活化釋放肽與4種主要的缺血性腦卒中相關，未激活的TAFI血漿水平與大血管缺血性腦卒中及隱源性腦卒中相關，TAFI基因SNP與缺血性腦卒中無相關性[14]。本研究顯示，TAFI-438A/G各基因型及等位基因頻率在病例組與對照組均無顯著性差異，但經性別分層分析，在男性中，A等位基因及AA基因型與腦梗死有關。這結果與Ladenvall等報道不一致。值得一提的是，本研究選取的病例組是動脈粥樣硬化性腦梗死，而Ladenvall等選取的病例組是依據TOAST病因分型法選取，兩者并不完全一致。

本研究首次對中國人群中TAFI基因啟動子區SNP與急性腦梗死關系進行研究，由于樣本量不大，其結果有一定局限性，其確切結論需大規模多中心研究進一步證實。如同時測定活化的TAFI抗原水平、多個多態性位點與動脈粥樣硬化性腦梗死結合起來一同研究分析，更能反映相互關系。

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Relationship between Prom oter Polym orphism-438 A/G of Throm bin-activatab le Fibrinolysis Inhibitor Gene and Cerebral In farction

CHEN Yu-sen,ZENG Zhi-liang,LIN Zhi-jun,et al.Department ofNeurology,The Hospital ofGuangdong Medical College,Zhanjiang 524001,Guangdong,China

Ob jectiveTo research the relationship between promoter polymorphism-438 A/G of thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor gene(TAFI-438 A/G)and atherosclerotic cerebral infarction(ACI)in Chinese Han population.M ethodsTAFI-438A/G genotypes and their allele frequencies were identified with the polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism(PCR-RFLP)in 225 ACIpatients and 184 healthy controls.Resu ltsTherewas no significant difference of TAFI-438A/G polymorphism between ACIgroup and control group.Stratified by gender,inmales,the incidence of A allelew as 28.6%in ACIgroup,and 20.6%in control(P=0.039);of the AA genotype was 9.0%in ACI group,and 1.9%in control(P=0.019).But no significant difference was found in females.ConclusionTAFI-438A/G polymorphism isassociated with the risk of ACIinmales,thatAA genotypemay increase the risk of ACI.

thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor;promoter;polymorphism;atherosclerosis;cerebral infarction

R743.3

A

1006-9771(2012)05-0406-03

2012-01-06)

教育部留學回國人員科研啟動基金(教外司留[2005]546號)。

1.廣東醫學院附屬醫院神經內科，廣東湛江市524001；2.東莞市太平人民醫院，廣東東莞市523900。作者簡介：陳煜森(1966-)，男，廣東湛江市人，博士，主任醫師，主要從事腦血管病、帕金森病的基礎與臨床研究。

10.3969/j.issn.1006-9771.2012.05.002