復方丙酸氯倍他索涂膜劑的質控研究

龐露，陳志科，呂冠欣（.佛山市順德區慢性病防治中心藥劑科，廣東佛山58300；.佛山市順德區藥品檢驗所，廣東佛山 58300）

復方丙酸氯倍他索（Clobetasol propionate，CP）涂膜劑是佛山市順德慢性病防治中心制劑部根據皮膚科臨床需要而開發的復方制劑，主要以CP和水楊酸（Salicylic acid，SA）為主藥，以聚乙烯醇（Polyvinyl alcohol，PVA17-88）為成膜材料[1]，以丙二醇及薄荷油為促滲劑制成。CP為腎上腺皮質激素類藥物，具有較強的抗炎、抗瘙癢和血管收縮作用，用于治療皮膚炎癥和瘙癢癥等[2]。SA為皮膚科常用的消毒防腐藥，價廉但實用性強，根據其使用濃度的不同有抑制細菌和真菌生長、止癢、角質溶解等作用[2]。本制劑涂于皮膚成膜后，產生水合作用促進藥物透皮吸收，增強了止癢和角質溶解作用，用于結節性癢疹、角質增厚性皮膚病、皮炎及濕疹的外用療法，使用方便安全，治療效果良好。為了加強該制劑的質量控劑，本研究以高效液相色譜法（HPLC）法和紫外分光光度法（UV）法分別測定CP及SA含量，并取得了滿意的結果?，F報道如下。

1 材料

UltiMate 3000 HPLC儀、UltiMate 3000 DAD檢測儀（德國戴安公司）；UV-1600型紫外-可見分光光度計（北京瑞利分析儀器公司）；TB125D型電子分析天平（北京賽多利斯公司）。

SA（山東新華制藥股份有限公司，批號：10091，純度：99.6%）；復方CP涂膜劑（自制，批號：20110420、20110421、20110422、20120626）；CP對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100302-200001，純度：99.3%）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，其他輔料均為藥用標準。

2 處方與制備

2.1 處方

CP 0.5 g，SA 50 g，薄荷油10 ml，PVA17-88 70 g，80%乙醇400 ml，丙二醇100 g，尼泊金乙酯1 g，純化水適量共制成1 000 g。

2.2 制備

取PVA17-88 70 g，加入約300 ml純化水及丙二醇充分浸泡，在水浴條件下加熱使其完全溶解；另稱取CP、SA用乙醇溶解，加入薄荷油攪勻，在攪拌條件下緩緩加入上述PVA17-88溶液中；最后加入尼泊金乙酯，邊加邊攪拌，待完全溶解，再加入純化水至足量，攪勻分裝即得。

3 質量控制

3.1 性狀

本品為類白色半透明黏稠狀液體，微有薄荷特臭。在皮膚涂布干燥后能形成有一定撕裂強度的薄膜。

3.2 鑒別

3.2.1 SA的鑒別。在SA含量測定項下，在299 nm波長處有最大吸收。

3.2.2 CP的鑒別。取本品少許，加乙醇1 ml混合，置水浴上加熱2 min，加硝酸（1→2）數滴，搖勻，加硝酸銀試液數滴，即顯白色沉淀。

3.3 檢查

3.3.1 pH值。取本品10 g，置于燒杯中，加蒸餾水100 ml溶解稀釋后，攪拌5 min，測定pH值應在6.0～8.0之間。

3.3.2 其他。應符合2010年版《中國藥典》（二部）[3]附錄涂膜劑項下有關各項規定。

3.4 含量測定

3.4.1 SA的含量測定。（1）供試品溶液的制備：精密稱取自制的復方CP涂膜劑0.4 g（約相當于SA 20 mg）置于100 ml量瓶中，用50%乙醇溶解并稀釋至刻度，再以移液管量取稀釋液5 ml于50 ml量瓶中，以50%乙醇定容并作為供試品溶液。（2）對照品溶液的制備：精密稱取于105℃干燥至恒重的SA 20 mg，按上述步驟（1）操作，制得對照品溶液；另精密稱量除SA外按處方量配制的陰性樣品0.4 g，按“（1）”項下操作，制得陰性對照溶液。（3）測定波長選擇：將上述供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶液以50%乙醇為空白，在250～400 nm波長范圍內掃描。結果，SA及樣品溶液在299 nm波長處有最大吸收，而陰性樣品在此處幾乎無吸收，與文獻報道一致[4]。故可在299 nm波長處直接測定SA的含量。（4）標準曲線的制備：精密稱取于105℃干燥至恒重的SA對照品100 mg，按“（1）”項下操作制得對照品的稀釋溶液，用移液管精密量取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0 ml分別至25 ml量瓶中，用50%乙醇稀釋至刻度，配成濃度為8～28 μg/ml的標準系列溶液；以50%乙醇作為空白，在299 nm波長處測定吸光度。結果，SA濃度在8～28 μg/ml范圍內與吸收度呈良好的線性關系。以吸光度（A）為縱坐標、質量濃度（c）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程為：A＝0.024 8c+0.006 6（r＝0.999 8）。（5）回收率試驗：精密稱取復方CP涂膜劑的SA陰性樣品0.4 g，置于100 ml量瓶中。分別加入處方量80%、100%、120%的水楊酸對照品，即0.016、0.020、0.024 g。用50%乙醇溶解稀釋至刻度，精密量取稀釋液5 ml至50 ml量瓶中，用50%乙醇稀釋至刻度；以50%乙醇作為空白參比，在299 nm波長處測定吸光度，按回歸方程計算回收率。（6）穩定性試驗：取上述供試品溶液，以50%乙醇作為空白參比，在299 nm波長處測定吸光度，于0、2、4、6、24 h分別測定SA的吸光度。按上述“（4）”項下回歸方程計算其含量。結果表明，SA在24 h內基本穩定，RSD＝0.19%（n＝5）。（7）重復性試驗：精密稱取與“（5）”項下制備同一批號的陰性樣品0.4 g（相當于SA 0.02 g）共6份，依法操作，以50%乙醇為空白參比，測定吸光度，按上述回歸方程計算，測得平均含SA量為52 mg/g，RSD＝0.91%（n＝6）。（8）精密度試驗：取上述對照品溶液，以50%乙醇作為空白參比，在299 nm波長處測定吸光度，按“（4）”項下回歸方程計算得其含量RSD＝0.17%（n＝6）。UV光譜見圖1，SA回收率試驗結果見表1。

圖1 UV光譜圖A.SA對照品；B.供試品；C.陰性樣品Fig1 UV spectrumA.SAcontrol；B.samples；C.negative samples

表1 SA回收率試驗結果（n＝9）Tab1 Results of recovery tests of SA（n＝9）

3.4.2 CP的含量測定。（1）色譜條件：色譜柱為Agilent TC-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（75∶25，V/V），流速：0.6 ml/min；檢測波長：240 nm；進樣量：10 μl；柱溫：35 ℃。（2）溶液的制備：精密稱定復方CP涂膜劑1 g（相當于CP 0.5 mg），置于10 ml量瓶中，加80%乙醇溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液；取CP對照品適量，加80%乙醇溶解并稀釋制成每1 ml含CP 50 μg的溶液作為對照品溶液；另取除去CP外按處方工藝配制的陰性樣品1 g，置于10 ml量瓶中，加80%乙醇溶解并稀釋至刻度，作為陰性對照溶液。（3）專屬性試驗：取上述供試品溶液、對照品溶液和陰性對照溶液，分別按“（1）”項下色譜條件進行測定，記錄色譜圖，可見陰性樣品對測定無干擾。（4）標準曲線的制備：精密稱取CP對照品10.15 mg，置于50 ml量瓶中，加80%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml，分別置于10 ml量瓶中，用80%乙醇稀釋成20.16、40.32、60.47、80.63、100.8 μg/ml的對照品溶液。精密進樣10 μl，以CP質量濃度（c，μg/ml）對峰面積（A）進行回歸，得回歸方程A＝33 623c+14 911（r＝0.999 9）。表明CA在20.16～100.8 μg/ml范圍內呈良好線性關系。（5）精密度試驗：取上述對照品溶液，精密進樣10 μl，依法測定，以CP峰面積計算，RSD＝0.77%（n＝6）。（6）穩定性試驗：取上述供試品溶液，在0、2、4、6、12 h分別測定CP峰面積。結果表明，12 h內CP基本穩定，RSD＝0.80%（n＝5）。（7）重復性試驗：取供試品（批號：20110421）6份依法測定其含量，測得平均含CP量為0.525 mg/g，RSD＝1.40%（n＝6）。（8）回收率測定：分別稱取陰性樣品1 g，按處方中CP量的80%、100%、120%分別精密加入CP對照品溶液，依法測定并計算回收率。高效液相色譜見圖2，CP加樣回收率試驗結果見表2。

3.4.3 樣品測定。取涂膜劑供試品，分別按上述SA和CP的含量測定方法測定，結果見表3。

4 討論

涂膜劑為復方制劑，用中和滴定法測定SA含量，干擾較大；而SA在紫外光區有最大吸收，且在一定的范圍內濃度與吸光度有良好的線性關系，適合醫院制劑快速分析[4]。

圖2 高效液相色譜圖A.CP對照品；B.供試品；C.陰性樣品；1.CPFig2 HPLC chromatogramsA.CP control；B.samples；C.negative samples；1.CP

表2 CP加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab2 Results of recovery tests of CP（n＝9）

在CP含量測定溶劑的選擇中，分別用乙腈-水（70∶30，V/V）、無水乙醇試驗[5]。由于處方中的輔料PVA17-88在大部分溶劑中易形成沉淀，從而影響其回收率，故本法應用80%乙醇為溶劑，能完全溶解CP又不形成沉淀，既方便又準確。采用流動相乙腈-水不同體積比對空白基質以及CP進行色譜的考察與選擇，最后確定乙腈-水（75∶25，V/V）為佳，且隨著體積比的減少，CP的峰形會發生改變。取CP對照品溶液，在Ulti-Mate 3000 DAD檢測器上進行光譜掃描，結果顯示在240 nm波長處有最大吸收，故選擇240 m波長作為CP含量測定的檢測波長。

表3 樣品含量測定結果（n＝4）Tab 3Results of content determination of samples（n＝4）

復方CP涂膜劑是醫院制劑室自己研究開發的外用制劑，本試驗建立了制劑的質量標準（處方工藝另文報道）。對CP及SA 2種主藥均進行了含量測定，采用高效液相色譜法測定CP的含量；由于水楊酸在處方中含量較大，使用紫外分光光度法測定。經方法學驗證本法可滿足含量測定要求，適合醫院制劑的快速分析，制劑質量可控。

[1]呂慧英，劉建芳，侯艷寧.涂膜劑中成膜材料的研究和應用進展[J].華北國防醫藥，2009，21（3）：30.

[2]陳新謙，金有豫，湯光.新編藥物學[M].16版.北京：人民衛生出版社，2007：630、835.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄18.

[4]吳渝陵，范虹，羅鳳琴，等.紫外分光光度法測定水楊酸軟膏中水楊酸含量[J].藥物鑒定，2006，15（6）：19.

[5]李旭梅，祝永明，涂厲標.HPLC法測定丙酸氯倍他索搽劑的含量[J].中國臨床藥學雜志，2007，16（1）：51.