山東省濰坊市鴨病毒性肝炎的流行病學調查

（山東畜牧獸醫職業學院，山東濰坊 261061）

山東省濰坊市鴨病毒性肝炎的流行病學調查

朱俊平，薛 梅

（山東畜牧獸醫職業學院，山東濰坊 261061）

為了解濰坊市鴨病毒性肝炎流行情況，從山東省濰坊市的昌邑、壽光、昌樂等9個市縣區發病嚴重的鴨場采集病料，采用雞胚尿囊腔接種法分離到22株病毒，經雞胚中和試驗和雛鴨血清保護試驗，采集樣本中發現22株病毒為鴨肝炎病毒。其雞胚半數致死量（ELD50/0.2mL）均在10-5.9～10-5.4之間，平均為10-5.6。鴨病毒性肝炎在濰坊市的昌邑、壽光、昌樂等9個市縣區時常發生，該病雖一年四季均有發生，但春季和冬季出現的頻率略高。多個日齡的鴨均可感染發生鴨病毒性肝炎，但發病日齡相對集中在4～21日齡，且日齡越小，發病率和死亡率越高，4～7日齡的發病率和死亡率分別達50.9%和58.7%，是危害濰坊肉鴨養殖業最重要的疫病之一。

鴨病毒性肝炎；流行病學；調查

鴨病毒性肝炎（Duck Virus Hepatitis，DVH）是由鴨肝炎病毒（DHV）引起雛鴨的一種急性、高度致死性的傳染病，以角弓反張和肝炎為主要特征[1-3]。該病是目前危害養鴨業的主要疾病之一，給養鴨業造成了巨大的經濟損失[3]。為了解山東濰坊地區鴨病毒性肝炎的流行情況，并對其防控工作提供數據支持，我們從山東省濰坊地區的昌邑、壽光、昌樂、臨朐、安丘、寒亭、青州、高密、諸城等9個縣市區20個養鴨場開展流行病學調查，具體如下。

1 材料與方法

1.1 病料

采自患病或當日死亡的疑似鴨病毒性肝炎病鴨的肝臟樣品[1]。

1.2 標準陽性血清

I型鴨肝炎病毒標準陽性血清：購自哈爾濱獸醫研究所維科生物技術開發公司。

1.3 鴨及雞胚

10日齡SPF雞胚：購自山東斯帕法斯家禽有限公司；1日齡和3日齡無鴨病毒性肝炎抗體鴨：由濰坊樂港食品有限公司提供。

1.4 培養基

鮮血瓊脂培養基按郭霄峰提供的方法配制[2]。

2 試驗方法

2.1 樣品采集

從山東省濰坊地區的昌邑、壽光、昌樂、臨朐、安丘、寒亭、青州、高密、諸城等9個縣市區20

個養鴨場30個疑似鴨病毒性肝炎的病鴨群中無菌采集病鴨的肝臟，各分成2份，1份樣品用于細菌學檢測，4℃保存備用；1份樣品用于病毒分離鑒定，-20℃冷凍保存。記錄疑似鴨病毒性肝炎的病鴨群所在地、日齡、發病率、死亡率、免疫情況、發生季節等情況。采樣時間為2012年1月到2012年12月。

2.2 樣品的病毒分離鑒定

2.2.1 樣品的細菌學檢測

2.2.1.1 樣品的觸片、染色、鏡檢[3-4]。取疑似鴨病毒性肝炎的病鴨的肝臟做觸片，分別進行美蘭染色和革蘭氏染色；染色結束后，用顯微鏡觀察染色結果，并記錄有細菌存在的樣品數及細菌的染色結果。

2.2.1.2 樣品中細菌的分離培養。無菌取疑似鴨病毒性肝炎的病鴨的肝臟，接種于鮮血瓊脂培養基，分別采取37℃厭氧培養和普通有氧培養24h。觀察培養結果并做記錄[5]。

2.2.1.3 統計樣品的細菌學檢測結果。

2.2.2 樣品的處理[6-8]

取無菌采集的疑似鴨病毒性肝炎的病鴨的肝臟，剪碎、研磨后，加入滅菌生理鹽水（pH6.8）制成20%（W/V）乳劑，反復凍融三次，加入青霉素、鏈霉素，使每毫升乳劑含青霉素、鏈霉素各1000單位，置4℃過夜，然后10000-12000r/min離心10min，取上清液用孔徑0.45um的細菌濾器過濾，-20℃保存備用。

2.2.3 雞胚接種[9-10]

取10日齡SPF雞胚，通過照蛋標出雞胚和氣室部位，然后分別用5%碘酊和75%酒精消毒氣室，干燥后用滅菌的打孔器打孔。然后將處理好的樣品的上清液，經尿囊腔接種SPF雞胚，每胚接種0.2ml，每份樣品接種6枚雞胚，并設生理鹽水對照。用石蠟封孔后37℃繼續孵化，觀察3～6d，棄去24h內死亡的雞胚，以后每天照胚3次，并及時將死亡的雞胚置4℃冰箱冷藏。收獲死亡胚尿囊液，取第1代死亡胚尿囊液再按同樣方法繼代5次，死亡胚尿囊液-20℃保存備用。

2.2.4 病毒鑒定

利用回歸試驗、雞胚中和試驗和雛鴨保護試驗進行病毒的鑒定

2.2.4.1回歸試驗[10-11]。取1日齡無鴨病毒性肝炎抗體鴨12只，平均分成2組，試驗組頸背部皮下注射病料乳劑0.2ml、對照組頸背部皮下注射生理鹽水0.2ml。2組鴨均隔離飼養，每天觀察并記錄發病死亡情況；死亡鴨進行解剖，并記錄剖檢病理變化。

2.2.4.2 雞胚中和試驗[10，12-13]。將收獲第5代尿囊液作1∶10稀釋，與I型鴨肝炎病毒標準陽性血清等體積混和，37℃下作用1h，然后分別給試驗組、對照組SPF雞胚尿囊腔接種傳代尿囊液稀釋液和I型鴨肝炎病毒標準陽性血清的混合液、傳代尿囊液稀釋液，每胚接種0.2ml，每組接種6枚雞胚。接種后繼續孵化，觀察記錄雞胚死亡情況。

2.2.4.3 雛鴨保護試驗[11]。取3日齡無鴨病毒性肝炎抗體鴨18只，平均分成3組。其中試驗組頸背部皮下注射I型鴨肝炎病毒標準陽性血清，每只2 ml，對照組不注射。24h后試驗組和對照組1頸背部皮下注射傳代尿囊液0.2ml/只，對照組2頸背部皮下注射生理鹽水0.2ml/只。3組鴨分別隔離飼養，每天觀察并記錄發病死亡情況。

2.2.4.4 結果統計。統計回歸試驗、雞胚中和試驗、雛鴨保護試驗陽性的樣品（即含鴨病毒性肝炎病毒株的樣品）的數量。

2.3 鴨肝炎病毒分離株的毒力測定

2.3.1 鴨肝炎病毒分離株雞胚半數致死量（ELD50）的測定[14-15]

將分離株第5代尿囊液分別按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7進行倍比稀釋，然后接種SPF雞胚，每胚接種0.2ml，每個稀釋度接種6枚，同時設立空白對照組。接種后8h照蛋一次，棄去24h內死亡的雞胚，記錄雞胚每天死亡情況，6d后累計所有結果，按Reed-Muench法計算出ELD50。

2.3.2 各鴨肝炎病毒分離株毒力測定結果的統計

3 結果

3.1 樣品的病毒分離鑒定結果

3.1.1 雞胚接種結果

雞胚接種經無菌處理的樣品后，能使雞胚在

24h ～144h內死亡的樣品數是22個，占樣品總數的73.3%。多數死亡雞胚發育不良或水腫，全身出血，尤其是胚的頭部和腳爪出血嚴重，剖檢呈現肝臟點狀出血或斑狀出血。繼代3～4次后，胚體表現規律性死亡，死亡時間基本集中在36h ～72h之間。

3.1.2 回歸試驗

發病死亡鴨多在注射樣品后第2～4d發病死亡，初期表現為精神沉郁，厭食。繼而大多數病鴨出現角弓反張，多幾分鐘至半天內死亡。發病死亡鴨的剖檢病理變化，主要病變器官是肝臟，大多數肝臟腫脹、出血。結果見表1。

表1回歸試驗結果

3.2.3 雞胚中和試驗結果

表2雞胚中和試驗結果

3.2.4 雛鴨保護試驗結果

表3雛鴨保護試驗結果

3.3 鴨肝炎病毒分離株的毒力測定結果

從表4可以看出，所分離到的22株鴨肝炎病毒分離株的雞胚半數致死量（ELD50/0.2ml）均在10-5.9～10-5.4之間，平均為10-5.65。

3.4 確診鴨群有關情況的統計結果

從表6中可以看出：確診為鴨病毒性肝炎的病鴨群存在于濰坊市的各縣市區，其中昌邑2群、壽光2群、昌樂4群、臨朐3群、安丘3群、寒亭3群、青州2群、高密2群、諸城1群。

從表7可以看出：鴨病毒性肝炎在濰坊市一年四季均可發生，春季和冬季出現的風險較高。

從表6和表8可以看出：多個日齡的鴨均可發生鴨病毒性肝炎，最小發病日齡是5日齡，最大發病日齡是29日齡，發生鴨病毒性肝炎的頻率高的日齡段是4～7日齡和8～14日齡。病鴨群發病率最高可達64.0%、最低3.9%，病死率最高可達76.8%、最低8.6%，各日齡段發病鴨群的發病率和死亡率最高的是4～7日齡、次之是8～14日齡。

表4 22株鴨肝炎病毒分離株的毒力測定結果

4 討論

4.1 山東省濰坊地區2012年30個疑似鴨病毒性肝炎的病鴨群中，存在細菌感染的病鴨群超過36.7%，遠遠超過了我們2004年調查所得的26%[19]，由此可見，混合感染已經成為養鴨業中一個越來越值得重視的問題[16-18]。

4.2 雞胚接種經無菌處理的樣品后，能使雞胚死亡的樣品數是22個；無鴨病毒性肝炎抗體鴨注射經無菌處理的樣品后，能使鴨死亡的樣品數是22個；接種傳代尿囊液稀釋液后，有22組的雞胚出現死亡，而血清保護雞胚組數是22組；雛鴨保護試驗血清保護了22組鴨。

由此可以得出這樣的結論：30個樣品中有22個個樣品所感染鴨肝炎病毒。

22株鴨肝炎病毒分離株的毒力測定結果表明：22株分離毒的雞胚半數致死量（ELD50/0.2ml）均在10-5.9～10-5．4之間，平均為10-5.65，略高于山東某些地區所分離毒株[14]，也基本一致。

表5鴨病毒性肝炎病鴨群的有關情況

表6確診為鴨病毒性肝炎的各病鴨群的地域分布

表7濰坊地區2012年鴨病毒性肝炎在不同季節發病的頻率

表8確診為鴨病毒性肝炎的各病鴨群的發病日齡分布、平均發病率、平均死亡率等指標

4.3 鴨病毒性肝炎一年四季均可發生，春季和冬季出現的頻率明顯高于夏季和秋季。這可能與濰坊地區冬春季節氣溫低，風大及鴨肝炎病毒在外界環境存活時間長有關[20]。

4.4 多個日齡的鴨均可發生鴨病毒性肝炎，發生頻率高的日齡段是4～7日齡和8～14日齡，且發病日齡越小，發病率和死亡率越高，4～7日齡的發病率和死亡率分別是50.9%和58.7%。這可能與種蛋的母源抗體低及消毒措施不力等因素有關。因此，加強消毒等措施，提高雛鴨母源抗體水平，對控制和減少鴨病毒性肝炎的發生具有重要意義[16-18]。2012年此數據低于作者2004年調查所得4～7日齡74.6%的發病率和75.0%的死亡率[19]，可能與近年來飼養管理水平的提高和防疫措施的加強有關。

4.5 鴨病毒性肝炎在濰坊市的9個市縣區都常發生。昌樂的發病率最高，與這些地方養鴨時間長、鴨場密度大、鴨舍簡陋、污染嚴重有關；諸城的發病率低與這些地方鴨場布局合理、鴨舍標準高、注重消毒有關。昌邑的2012年的發病率與我們2004年調查所得下降明顯[19]，可能與改建鴨舍，提高了鴨舍標準，加強了生物安全措施有關[18]。

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Epidemiological Investigation of Duck Viral Hepatitis in Weifang，Shandong Province

Zhu Junping，Xue Mei

（Shandong Vocational College of Animal Science and Veterinary Medicine，Weifang，Shandong 261061）

Twenty-two virus isolates were abtained from infected ducks in 9 cities and counties of Weifang using specifc pathogen free（SPF）chick embryos and all were confrmed as duck hepatitis virus（DHV）by chick embryos neutralization test and serum protection test of young duck. ELD50of the isolates ranged from 10-5.9to 10-5.4with the average of 10-5.65. The epidemiological results showed that DVH often appeared in 9 cities and counties of Weifang. DVH could infect ducks of different ages in all seasons，but it was most common in spring or winter and 4-21-day-old ducks were more easily infected. The younger the ducks，the higher the morbidity and the mortality were and the morbidity and mortality in 4-7-day-old ducks was up to 50.9% and 58.7% respectively.

duck viral hepatitis；epidemiological investigation；morbidity；mortality；Weifang

S852.65

：A

：1005-944X（2014）12-0050-05

薛梅