南海蜂海綿Haliclona sp.化學成分的研究Δ

王　賓，林耀才，熊云華，孫　麗，蔣詩琴，黃日明

(1.廣州醫科大學附屬深圳沙井醫院藥劑科，廣東 深圳518104； 2.中國科學院華南植物園中國科學院植物資源保護與可持續利用重點實驗室，廣東 廣州　510650)

南海蜂海綿Haliclonasp.化學成分的研究Δ

王賓1*，林耀才1，熊云華1，孫麗1，蔣詩琴1，黃日明2

(1.廣州醫科大學附屬深圳沙井醫院藥劑科，廣東 深圳518104； 2.中國科學院華南植物園中國科學院植物資源保護與可持續利用重點實驗室，廣東 廣州510650)

摘要目的：研究南海蜂海綿Haliclona sp.的化學成分。方法：采用正相、反相柱色譜及凝膠柱色譜等方法，對海綿Haliclona sp.乙醇提取物的化學成分分離純化，通過理化常數及波譜分析等方法鑒定其化學結構。結果：從海綿Haliclona sp.的乙醇提取物中分離鑒定了7個化合物，分別鑒定為：(7Z,10Z,13Z,16Z)-二十二-7,10,13,16-四烯酸、琥珀酸單乙酯、正二十五烷、4-(2-氨乙基)-N,N-二乙苯胺、鄰苯二甲酸二丁酯、鄰苯二甲酸二異丁酯、腺嘌呤。結論：這7個化合物均為首次從該屬中分離得到。

關鍵詞海綿； Haliclona sp.； 化學成分； 結構鑒定

海綿是低等多細胞多孔動物，沒有器官分化，只有個別細胞的差異，其種類繁多，分布廣泛，對環境適應能力極強。海綿資源豐富，其中蘊含著豐富的次生代謝產物，一直是海洋生物中結構新穎、活性強烈的次生代謝產物的最主要來源，從中分離得到的化學成分常具有抗腫瘤、抗菌、抗炎、抑制人類免疫缺陷病毒逆轉錄酶活性等多種生物活性[1-4]。本研究中的海綿Haliclonasp.屬于尋常海綿綱簡骨海綿目蜂海綿科，文獻報道其主要含有生物堿、酰胺、肽類、萜類、甾醇等成分[5-7]。本研究從南海海域采集的蜂海綿中分離得到7個化合物，經現代波譜技術結合理化性質鑒定為(7Z,10Z,13Z,16Z)-二十二-7,10,13,16-四烯酸[(7Z,10Z,13Z,16Z)-docosa-7,10,13,16-tetraenoic acid]、琥珀酸單乙酯(mono-ethyl succinate)、正二十五烷(n-pentacosane)、4-(2-氨乙基)-N,N-二乙苯胺[4-(2-aminoethyl)-N,N-diethylaniline]、鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate)、鄰苯二甲酸二異丁酯(diisobutyl phthalate)、腺嘌呤(adenine)，均為首次從該屬中分離得到。

1材料

1.1儀器

AVANCE 500型核磁共振儀(美國BRUKER公司)；AGILENT 1200 MM/MSI/APCI型ESI-MS質譜儀(美國AGILENT公司)；XT5顯微熔點測定儀(溫度未校正，北京科儀電光儀器廠)。

1.2生物與試劑

海綿Haliclonasp.采自中國海南陵水縣境內水域，經韓國仁川國立生物資源與環境研究中心無脊椎動物研究部李鐘金博士(Dr. Kyung Jin Lee)鑒定為Haliclonasp.。Sephadex LH-20葡聚糖凝膠(德國Merck公司)；層析用硅膠(青島海洋化工廠)；ODS反相硅膠(YWC公司)；化學試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1提取與分離

將海綿Haliclonasp.(濕質量約10.0 kg)剪碎，以95%工業酒精50 L于室溫(25 ℃)中浸泡提取3次，每次20 d。合并提取液，減壓濃縮，混懸于2 000 ml水中，用等體積的氯仿萃取5次。氯仿層萃取液減壓濃縮后溶于適量90%乙醇溶液中，以等體積正己烷反復萃取，分別回收溶劑，減壓濃縮，得乙醇層浸膏約46 g，正己烷層浸膏約63 g。再將水層部分用等體積正丁醇萃取，得正丁醇層浸膏約42 g。90%乙醇溶液部分采用正相柱層析，乙酸乙酯：環己烷(0～5%)梯度洗脫分離得到化合物1(18.9 mg)、3(4.2 mg)，利用Sephadex LH-20柱層析，正相溶劑甲醇：氯仿(1：1)洗脫得到化合物5(6.3 mg)、6(6.0 mg)。正丁醇萃取部分采用正相柱層析，甲醇：氯仿(0～6%)梯度洗脫分離得到化合物2(5.1 mg)，利用反相硅膠柱層析，甲醇：水(0～20%)梯度洗脫分離得到化合物4(74.0 mg)、7(4.2 mg)。

2.2結構鑒定

2.2.1化合物1：黃色油狀物。ESI-MAm/z333 [M+H]+。1H-NMR(500 MHz, CDCl3)δ: 5.40(8H, m, H-7, 8, 10, 11, 13, 14, 16, 17)，2.84(6H, m, H-9, 12, 15)，2.37(2H, t,J=7.6 Hz, H-2)，2.15-2.08(4H, m, H-6, 18)，1.73(2H, m, H-3)，1.31(8H, m, H-4, 5, 19, 20)，0.98(3H, t,J=7.6 Hz, H-21)。以上數據與文獻[8]對照一致，鑒定為(7Z, 10Z, 13Z, 16Z)-二十二-7,10,13,16-四烯酸。

2.2.2化合物2：黃色油狀物。ESI-MSm/z147 [M+H]+。1H-NMR(500 MHz, CDCl3)δ: 4.16(2H, q,J=7.2 Hz, H-1′)，2.67(2H, dd,J=6.2, 2.1 Hz, H-2)，2.62(2H, dd,J=6.2, 2.1 Hz, H-3)，1.27(3H, t,J=7.2 Hz, 2′-CH3)。13C-NMR(125 MHz, CDCl3)δ: 176.5(C-1)，172.3(C-4), 60.8(C-1′)，29.1(C-2)，28.9(C-3)，14.0(C-2′)。以上數據與文獻[9]對照一致，鑒定為琥珀酸單乙酯。

2.2.3化合物3：無色油狀物。ESI-MSm/z353 [M+H]+。1H-NMR(500 MHz, CDCl3)δ: 1.26(46H, brs)，0.86(6H, m)。以上數據與文獻[10]對照一致，鑒定為正二十五烷。

2.2.4化合物4：針狀結晶。ESI-MSm/z193 [M+H]+。1H-NMR(500 MHz, CD3OD)δ: 7.12(2H, d,J=8.5 Hz, H-3,5), 6.79(2H, d,J=8.5 Hz, H-2, 6)，3.14(2H, t,J=8.3, 7.4 Hz, H-2′)，3.02(4H, q,J=7.3 Hz, N-1′, 1″)，2.91(2H, t,J=8.3, H-1′)，1.32(6H, t,J=7.3 Hz, N-2′, 2″)。13C-NMR(125 MHz, CD3OD)δ: 130.9(C-3,5)，116.7(C-2,6)，42.3(C-2′)，36.1 (C-1″, 1?)，33.7(C- 1′)，12.9 (C-2″, 2?)。以上數據與文獻[11]對照一致，鑒定為4-(2-氨乙基)-N，N-二乙苯胺。

2.2.5化合物5：無色油狀物。ESI-MSm/z279 [M+H]+。1H-NMR(500 MHz, CD3OD)δ: 7.73(2H, dd,J=5.7, 3.3 Hz, H-2, 5)，7.30(2H, dd,J=5.7, 3.3 Hz, H-3, 4)，4.31(4H, t,J=6.5 Hz, H-1′, 1″)，1.75(4H, m, H-2′, 2″)，1.47(4H, m, H-3′, 3″)，1.00(6H, t,J=7.4 Hz, H-4′, 4″)。以上與根據文獻[12]對照一致，鑒定為鄰苯二甲酸二丁酯。

2.2.6化合物6：無色油狀物。ESI-MSm/z279 [M+H]+。1H-NMR(500 MHz, CDCl3)δ: 7.71(2H, dd,J=5.6, 3.3Hz，H-2, 5)，7.30(2H, dd,J=5.6, 3.3 Hz, H-3, 4)，4.22(4H, m, H-1′, 1″)，1.70(2H, m, H-2′, 2″)，0.93(12H, m, H-3′, 3″)。以上數據與波譜數據庫及文獻對照[13]基本一致，鑒定為鄰苯二甲酸二異丁酯。

2.2.7化合物7：白色粉末。ESI-MSm/z136 [M+H]+。1H-NMR(500 MHz, DMSO-d6)δ: 12.50(1H, m, 9-NH)，8.11(1H, s, H-8)，8.09(1H, s, H-7)，7.09(2H, s, 6-NH2)。13C NMR(125 MHz, DMSO-d6)δ：155.6(C-6)，152.3(C-2)，150.2(C-4)，139.2(C-8)，117.9(C-5)。以上數據與文獻[14]對照一致，鑒定為腺嘌呤核苷。

3討論

以往的研究中，在正丁醇層還分離得到一系列鄰苯二甲酰胺類化合物，與本研究中的鄰苯二甲酸二酯類相比，骨架一致，極性不同。推測鄰苯二甲酰胺類化合物是鄰苯二甲酸二酯類化合物經海綿體內代謝后的相關產物，由極性小的物質代謝為極性大的物質，從這一點上看，海綿在海洋生態系統中具有潛在的污染處理能力，對凈化海洋環境起到了重要的作用。鄰苯二甲酸二酯類化合物作為增塑劑廣泛分布于自然界中，在植物及海洋生物中分離得到很多鄰苯二甲酸二酯類化合物，普遍認為其來源于工業污染，但其是否就來自于污染物尚有爭議，Namikoshi等[15]學者對3種海藻進行的14C追蹤試驗結果表明，這3種測試海藻可通過生物合成鄰苯二甲酸二酯類化合物，而非來自于工業污染。此類化合物普遍存在，相信對其代謝的研究將推進生物代謝途徑及環境污染評價方面的研究。

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Study on Chemical Constituents from Marine SpongeHaliclonasp.Δ

WANG Bin1, LIN Yaocai1, XIONG Yunhua1, SUN Li1, JIANG Shiqin1, HUANG Riming2

(1.Dept.of Pharmacy, Shenzhen Shajing Affiliated Hospital of Guangzhou Medical University, Guangdong Shenzhen 518104, China; 2.Key Laboratory of Plant Resources Conservation and Sustainable Utilization, South China Botanical Garden, Chinese Academy of Sciences,Guangdong Guangzhou, 510650,China)

ABSTRACTOBJECTIVE：ABSTRCT OBJEKTIVE: To study the chemical constituents from the marine sponge Haliclona sp.. METHODS: Normal phase and reversed-phase chromatography and gel column choromatography method were adopted, the chemical constituents from the marine sponge Haliclona sp. were isolated and purified, and structures were identified by physico-chemical properties and spectral analysis. RESULTS: Seven compounds were isolated and identified as (7Z,10Z,13Z,16Z)-docosa-7, 10, 13, 16-tetraenoic acid, mono-ethyl succinate, n-pentacosane, 4-(2-aminoethyl)-N，N-diethylaniline, dibutyl phthalate, diisobutyl phthalate, and adenine. CONCLUSIONS: The seven compounds were isolated from marine sponge Haliclona sp. for the first time.

KEYWORDSMarine sponge; Haliclona sp.; Chemical constituents; Structure identification

#通信作者：主管藥師，碩士。研究方向：中藥資源與標準研究。E-mail：cooleryang3@163.com

中圖分類號R931.74

文獻標志碼A

文章編號1672-2124(2016)05-0628-03

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.05.021

(收稿日期：2015-11-02)

*主管藥師。研究方向：藥品質量研究。E-mail：tayuanhongying@163.com