青黛大鼠給藥90天胃腸毒性研究

朱璋佩，石婭萍，閔志強

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青黛大鼠給藥90天胃腸毒性研究

朱璋佩，石婭萍，閔志強

[摘要]目的：考察青黛是否具有胃腸毒性。方法：大鼠按2.4、1.2、0.6 g生藥/kg（約相當于臨床劑量的48倍、24倍、12倍），灌胃給予青黛，每天1次，連續90天，然后停藥恢復30天，觀察消化道毒性反應。結果：主要毒性反應為給藥期間給藥組動物體重增長緩慢以及大便量增多，攝食量下降，但停藥后基本恢復正常。結論：青黛可能存在一定的胃腸毒性，但具體機理未知，還需進一步試驗驗證。

[關鍵詞]青黛；胃腸毒性；多次給藥

[作者單位]成都中醫藥大學，四川 成都 611137

青黛是一味具有良好藥效作用的常用中藥，但隨著青黛在臨床上的廣泛應用，一些復方青黛制劑不良反應報告有所增加[1～5]。這些不良反應主要表現為胃腸道反應，但未發現單獨報道青黛胃腸不良反應的有關文獻，因此以上不良反應是否為青黛造成存在疑問。本研究擬通過連續給予大鼠青黛90天，模擬青黛臨床長期給藥，觀察青黛可能引起的臨床不良反應，尤其是對消化道的影響。

1　材料和方法

1.1試藥

青黛飲片，四川江油恒源藥業提供，批號120301，試驗時用純化水配制成所需濃度的混懸液，每次給藥前搖勻后使用。

1.2動物

SD大鼠，SPF級，48只，體重120-160 g，雌雄各半。來源：成都達碩生物科技有限公司。生產許可證號：SCXK（川）2013-24，合格證號：NO.0014599。

1.3儀器

ACS-0.6T 電子計重秤，廣東省中山市金利電子衡器有限公司；德國sartorius ALC-210.4型電子天平，德國Satorius股份有限公司；日本島津AUW120D型電子天平，XSZ-H生物顯微鏡，重慶光電儀器總公司；常州中威TSJ-Ⅲ電腦自動組織脫水機，常州中威電子儀器廠；常州中威BMJ-Ⅲ型包埋機，江蘇省常州市中威電子儀器廠；常州中威PHY-Ⅲ病理組織漂烘儀，江蘇省常州市中威電子儀器廠；徠卡RM2126輪轉式切片機，上海徠卡儀器有限公司；北京永光明202-0型臺式干燥箱，北京市永光明醫療儀器廠；日本奧林巴斯 BX41-32P02顯微鏡，日本奧林巴斯株式會社。

2　實驗方法

2.1分組及給藥

取SD大鼠48只，鼠齡6～8周，體重120～160 g，各性別組內每只大鼠體重不超過或低于平均體重20％，雌雄各半。分性別根據體重按隨機區組法分為對照組和高、中、低劑量組，每組12只，雌雄各半。灌胃給予受試物，每日給藥1次，給藥周期90天，停藥周期30天。高劑量按最大給藥濃度給予，折算劑量2.4 g．kg-1，中、低劑量分別為1.2、0.6 g．kg-1，分別相當于24、12倍臨床人用劑量。對照組同法給予等體積（20 mL．kg-1）純化水。

2.2觀察及檢測指標

給藥期、停藥恢復期間，每天觀察藥物對大鼠的中樞和運動神經系統、植物神經系統、呼吸系統、心血管系統、消化系統、泌尿生殖系統、皮膚和皮毛、眼等的影響。每周用電子單重秤稱體重1次，測定攝食量1次。給藥結束和恢復期結束后次晨，每組分別取6大鼠（雌雄各半），麻醉后放血處死，進行全面細致的系統尸解。同時，用電子天平稱取臟器重量，并計算臟器指數。對高劑量組及空白組的消化系統標本石蠟包埋切片, HE染色，在光學顯微鏡下進行觀察。

2.3統計學分析

采用SPSS19.0軟件進行數據分析，計量資料計算平均數、標準差，判斷數據是否正態性，若為正態分布則采用獨立參數t檢驗進行統計，否則采用非參數檢驗進行統計。

3　實驗結果

3.1一般情況觀察

給藥2天后，高、中、低劑量組大鼠排便量均較對照組多，高劑量組個別動物出現稀便，顏色呈青黛藥色，給藥10天后大便質軟但成形，中、低劑量組給藥期間大便形狀一直正常，但顏色較深；停藥3天后，各組動物大便形狀及排量恢復正常，其余未發現任何異常情況。

3.2體重變化

給藥7日后，與對照組比較，給藥組大鼠體重有統計學意義下降（p＜0.05 、p＜0.01），此后逐漸恢復，除中劑量組雄性動物給藥35天后，其余各組動物在給藥14天后體重與對照組比較開始無統計學差異(p＞0.05)，但高、中劑量組大鼠體重均數在給藥期間一直小于對照組動物，停藥后逐漸恢復與對照組基本一致，低劑量組動物體重受影響相對較小。結果表明藥物對動物體重增長有一定影響，特別是高、中劑量。大鼠體重變化結果參見圖1～3。

1　體重變化圖(♀♂合計)

圖2　體重變化圖(♀)

圖3　體重變化圖(♂)

3.3攝食量

各組動物給藥后，攝食量均較給藥前有下降，其中高劑量組下降程度最大，整個給藥期間攝食量均小于對照組，但停藥后逐漸恢復到對照組水平，而中、低劑量組在整個試驗期間攝食量數量及變化趨勢與對照組基本相同，說明此兩組動物攝食量未明顯收到藥物影響。見圖4～6。

圖4　攝食量變化圖(♀♂合計)

圖5　攝食量變化圖(♀)

圖6　攝食量變化圖(♂)

3.4系統尸解及臟器指數檢查結果

3.4.1系統尸解結果 體表檢查：對照組與給藥組大鼠外觀健康, 被毛光澤、無脫毛，皮膚粘膜無出血點、潰瘍及色斑，乳腺及外生殖器官無異?？梢? 各天然孔無異常分泌物。

胸腹壁皮下組織:對照組與給藥組大鼠動物胸腹壁皮下組織未見出血和感染現象。

腹腔及盆腔檢查: 對照組與給藥組大鼠腹腔內無積液、血液和滲出物, 各臟器位置正常, 肝、脾、胃、胰、大網膜、膀胱、腹膜等的形狀、位置、質地等無異?？梢?。腸道無出血點和腸道未見寄生蟲。雄性生殖器和雌性生殖器未見腫瘤、畸形或其他異常。

胸腔檢查: 對照組與給藥組大鼠胸腔無積液、出血及滲出物, 心、肺等臟器位置、大小、形狀、色澤、質地均正常。

顱內檢查：對照組與給藥組大鼠顱腔無積液及出血，腦未見水腫、膿腫、血腫和萎縮等異常情況。

3.4.2臟器指數 青黛大鼠長毒灌胃給藥90天及停藥30天期間，各臟器指數檢查，各給藥組與對照組比較未見異常(p＞0.05)。

3.5病理組織學檢查

組織病理學檢查綜合肉眼與鏡下所見，大鼠給藥期與恢復期，高劑量組與對照組相比，組織形態無明顯差異，消化道器官（食道、胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結腸、直腸、頜下腺、腮腺、胰腺、肝）均未出現與受試物明顯有關的組織器質性損害的病理改變，得出結論：在試驗劑量條件下的給藥期和恢復期，青黛對大鼠無病理損害。

4　討論及結論

針對青黛在臨床上暴露出的一系列胃腸道毒性反應特征，本次通過90天的長期給藥毒性試驗，模擬病人長期服藥，結合動物試驗期間的攝食量、體重檢查以及消化器官病理檢查等指標，判斷動物消化功能及胃腸道器官是否受到損傷。試驗結果證明青黛對胃腸道功能有一定影響，多次給藥試驗也發現2.4和1.2 g．kg-1劑量對大鼠體重及攝食量均有影響，促進排便。

臨床使用青黛存在兩種情況，一種為短期使用，主要治療一些細菌或病毒感染類疾病，而治療銀屑病等皮膚病時，需要病人長期服用。前期在單次給藥毒性試驗發現1 g．kg-1青黛（相當于臨床劑量20倍），可促進小鼠的腸推進及排便功能，其余數據也表明在1 g．kg-1劑量以下，也可能存在胃腸道毒性反應。結合兩次結果，初步證實青黛有一定胃腸道毒性，主要表現為影響體重、攝食和排便，較輕微，并未發現病理性損傷，同時停藥后即可恢復，提示臨床使用中需重點監測的指標，胃腸虛弱或有胃腸道病變的人群應避免使用。

綜上，大鼠按2.4、1.2、0.6 g生藥/kg（約相當于臨床劑量的48倍、24倍、12倍），灌胃給予青黛，每天1次，連續90天，然后停藥恢復30天，結果發現主要毒性反應為給藥期間給藥組動物體重增長緩慢以及大便量增多，攝食量下降，但停藥后基本恢復正常。結果表明青黛可能存在一定的胃腸毒性，但具體機理未知，還需進一步試驗驗證。

[參考文獻]

[1]李國良,梁洪彥.復方青黛丸致便血2例[J].中國農村醫學, 1996, 21(8):49.

[2]張良勝.復方青黛丸引起腸道出血1例[J].皮膚病與性病,1994, 16(1):59.

[3]范慧英,杜玉蘭,欒紅.復方青黛丸致胃出血3例[J].中華皮膚科雜志, 1995,28(5):328.

[4]李思明,王道田,吳彩云.口服復方青黛丸致消化道出血9例[J].中國皮膚性病學雜志,2003,17(1):55.

[5]陳子欽,毛碧芳.復方青黛丸引起黏液血便[J].海峽藥學, 1995,7(4):51.

[6]袁伯俊,廖明陽,李波.藥物毒理學實驗方法與技術[M].化學工業出版社,2011:212.

（責任編輯：陳思敏）

·臨床中藥·

Study on gastrointestinal toxicity in rats after administration of indigo naturalis for 90 days

ZHU Zhang-pei, SHI Yaping, MIN Zhi-qiang
(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, Sichuan)

[Abstract]Objective: To investigate the gastrointestinal toxicity ofindigo naturalis in rat.Method: The rats were intragastric administered of indigo naturalis 2.4, 1.2, 0.6 g．kg(-1)(equivalent to clinical dose 48 times,24 times, 12 times) for 90 days, 1 time a day.The gastrointestinal toxicity was observed at 30 days after drug withdrawal.Result: The main toxicity manifested as slowed weight growth, increased stool and decrease food intake which returned to normal after drug withdrawal.Conclusion: Indigo naturalis may have certain gastrointestinal toxicity, but the mechanism remains unknown which need further experimental verification.

[Key words]Indigo naturalis; gastrointestinal toxicity,; multiple administration

[收稿日期]2015-03-10

[通訊作者]閔志強（1979-），男，講師，主要從事中藥藥性理論與臨床應用研究Tel:13880641950 Email:minzq@qq.com

[作者簡介]朱璋佩（1994-），女，在讀本科生，主要從事中藥藥性理論與臨床應用研究Tel:18982260169 Email:2521334588@qq.com

[基金項目]成都中醫藥大學?；痦椖?編號ZRMS201333)

[中圖分類號]R 285.5

[文獻標識碼]A

[文章編號]1674-926X(2016)01-014-03