膠體金法檢測全血鐵蛋白的性能評價及其在兒童缺鐵性貧血中的臨床應用

宋　濤,譚　詩,李秋紅,趙　妍,李小強,李春莉△

(1.重慶市婦幼保健院檢驗科　400013；2.重慶市婦幼保健院兒童保健科　400013；3.重慶醫科大學附屬兒童醫院臨床檢驗科　400013)

膠體金法檢測全血鐵蛋白的性能評價及其在兒童缺鐵性貧血中的臨床應用

宋濤1,譚詩1,李秋紅1,趙妍2,李小強3,李春莉1△

(1.重慶市婦幼保健院檢驗科400013；2.重慶市婦幼保健院兒童保健科400013；3.重慶醫科大學附屬兒童醫院臨床檢驗科400013)

目的評價國產膠體金法檢測全血鐵蛋白的分析性能，探討其在兒童缺鐵性貧血中的臨床應用價值。方法通過與免疫化學發光方法比較，根據EP文件從精密度、線性范圍及抗干擾能力、可比性等方面評價膠體金法測定全血鐵蛋白的分析性能；隨機抽取重慶醫科大學附屬兒童醫院50例缺鐵性貧血患兒及重慶市婦幼保健院健康體檢兒童50例，分別測定兩組全血鐵蛋白，分析其診斷效率。結果膠體金法測定全血鐵蛋白批間精密度分別為7.2%和9.6%，線性為0～100 ng/mL，溶血、黃疸、脂血無干擾，與雅培i2000SR血清鐵蛋白檢測結果比對差異無統計學意義(P>0.05)；與對照組相比，缺鐵性貧血組全血鐵蛋白明顯降低。以20 ng/mL作為診斷臨界點，其靈敏度為94%，特異度為100%，診斷效率為97%。結論膠體金法分析性能良好，作為即時檢測項目能滿足臨床，具有較高診斷效率，對兒童是否缺鐵可作提示性診斷。

膠體金；全血；鐵蛋白；性能評價

缺鐵性貧血(IDA)是臨床常見疾病之一，也是貧血中最常見的類型，以嬰幼兒和育齡期女性發病率較高。如果兒童IDA長期得不到改善，會造成發育遲緩、免疫力下降，甚至引發其他并發癥[1]。目前常用于診斷IDA的外周血血常規參數不利于早期診斷，且靈敏度不高，不能準確及時地反映體內鐵代謝狀況。鐵蛋白作為機體內一種儲存鐵的可溶性組織蛋白，其濃度變化可作為判斷是否存在缺鐵或鐵負荷過量的指標，血清鐵蛋白是檢測體內鐵缺乏的最靈敏指標[2]。目前檢測鐵蛋白的方法主要是化學發光法，該法只能檢測血清標本，然而對于發病率較高的嬰幼兒進行靜脈血抽取較困難，近年來，市場上出現通過膠體金法檢測全血鐵蛋白的試劑盒，方便、快速，僅需20 min，尤其適用于嬰幼兒。本研究對該方法的精密度、準確度、線性范圍及抗干擾能力(黃疸、脂血、溶血等)等性能進行評價，并與化學發光法檢測臨床患者的血清鐵蛋白結果進行比對，了解該方法是否能滿足臨床檢測需求，特別是針對嬰幼兒鐵蛋白篩查，探索其在本地區兒童IDA篩查中的應用價值。

1資料與方法

1.1一般資料2015年重慶醫科大學附屬兒童醫院就診的IDA患兒50例納入IDA組，年齡2～5歲，平均年齡(3.2±0.7)歲。2015年1～8月重慶市婦幼保健院進行常規體檢兒童50例納入健康對照組，年齡2～4歲，平均年齡(2.8±0.5)歲，排除早產、多胎、難產、妊娠合并癥，排除先天性疾病和遺傳性疾病。

1.2儀器與試劑免疫層析結果判讀記錄儀，鐵蛋白試劑卡由天津中新科炬生物制藥有限公司提供，雅培i2000SR化學發光分析儀、鐵蛋白試劑盒購自美國雅培公司。

1.3標本采集采集末梢血和靜脈全血，乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝及促凝待用。

1.4方法

1.4.1批內精密度選取高濃度(90 ng/mL)和低濃度(20 ng/mL)的鐵蛋白全血標本各1份，參照EP文件[3]，每份標本連續檢測20次，分別計算變異系數(CV)，得到不同濃度下的批內精密度。

1.4.2批間精密度取濃度分別為85、15 ng/mL的質控品各1份，均分裝5支置-20 ℃保存，每天各取出1支進行檢測，每天檢測4次，每次測定的時間相隔小于2 h，連續5 d，共獲得兩組、40個數據，進行離群值檢驗。分別對檢測高值所得的20個數據及檢測低值所得的20個數據進行CV的計算，得到高值和低值的批間精密度。

1.4.3線性范圍取l份EDTA-K2抗凝全血高值標本參照EP文件[4]，按10∶0、8∶2、6∶4、4∶6、2∶8、0∶10的比例，配制成稀釋度為100%、80%、60%、40%、20%、0%的系列濃度，使其最終濃度從低到高共6個濃度，分別用膠體金法重復2次檢測鐵蛋白水平，取平均值作為測定值，將測定值與理論值做直線回歸。

1.4.4參考范圍根據WS/T 402-2012[5]，篩選出20個參考個體，采集末梢血標本，EDTA-K2抗凝并檢測，測定值剔除離群值后若不滿20需補足，將這20個測定值與需驗證的參考區間比較。

1.4.5可比性試驗每天取5份血清樣品，進行1～5號編號。先在雅培i2000化學發光分析儀上進行檢測，再使用膠體金法檢測同一患者全血鐵蛋白濃度，各檢測2次。第1次按1～5號的順序，第2次按5～1號的順序檢測，連續測定5 d。將對照系統和試驗系統針對臨床標本的檢測結果進行相關系數計算，驗證兩個系統測試結果是否呈正相關關系。

1.4.6干擾試驗(1)溶血干擾：取臨床標本EDTA-K2抗凝全血1份，參照EP文件[6]，先用膠體金法測定2次全血鐵蛋白，然后將此標本分為3份，用擠壓法制造輕、中、重度溶血，離心后測定血漿血紅蛋白(Hb)，再用兩種方法分別重復2次測定輕、中、重度溶血狀態下的鐵蛋白。(2)乳糜干擾：取高值全血鐵蛋白(98 ng/mL)標本1份，低值全血鐵蛋白乳糜標本l份，按比例1∶1、1∶2、1∶3、1∶4和1∶5稀釋，分別重復測定三酰甘油及全血鐵蛋白。(3)黃疸干擾：取高值全血鐵蛋白(98 ng/mL)標本l份，分別用生理鹽水和高膽紅素低鐵蛋白全血標本1份，按比例1∶1、1∶2、1∶3、1∶4和1∶5稀釋后測定膽紅素和鐵蛋白。

1.4.7儲存溫度和時間的影響取當日全血標本，3份標本混合，測定新鮮混合全血的鐵蛋白濃度為48 ng/mL，放置4 ℃儲藏3～4 d，兩種方法的結果與新鮮混合全血進行比對，重復測定2次。

1.5臨床應用價值取重慶醫科大學附屬兒童醫院50例已確診為IDA患兒的全血標本，50例已排除IDA兒童全血標本，分別測定全血鐵蛋白，分析其在兒童IDA中的臨床應用價值。

1.6統計學處理采用SPSS19.0統計軟件進行數據處理及統計學分析，兩組間均數比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1性能評價

2.1.1批內精密度高值和低值標本連續20次測定結果計算CV分別為3.5%和5.9%。

2.1.2批間精密度高值和低值質控品計算CV分別為7.2%和9.6%。

2.1.3線性范圍膠體金法測定全血鐵蛋白在濃度大于100 ng/mL時不呈線性關系，選擇全血鐵蛋白濃度稀釋在0～100 ng/mL的5個濃度范圍測定線性良好，直線回歸方程：Y=0.975X+0.103，r2=0.997，見圖1，測定值與理論值偏差小于10%。

圖1　膠體金法測定鐵蛋白線性范圍

2.1.4參考范圍驗證按照WS/T 402-2012國家行業標準，測定20例表觀健康的嬰幼兒末梢全血標本的鐵蛋白水平，其測定值均大于20 ng/mL，表明可采納試劑盒說明書提供的參考范圍。

2.1.5可比性試驗按照每天檢測的順序，連續5 d共檢測40份血清樣品和全血樣品，每份血清樣品使用化學發光分析儀檢測2次，全血樣品使用天津中新科炬鐵蛋白檢測試劑盒檢測2次，各取其平均值，經配對t檢驗，兩種儀器檢測結果的差異無統計學意義(t=0.692，P>0.05)。經回歸分析，回歸方程為Y=1.107X-9.749，r2=0.934,顯示兩種方法測定結果具有較高的可比性，見圖2。

圖2　膠體金法與化學發光法鐵蛋白測定結果比對

2.1.6干擾試驗(1)溶血干擾：溶血有使全血鐵蛋白測定結果偏高的趨勢，但差異無統計學意義(P>0.05)，見圖3A。(2)乳糜干擾，加入三酰甘油4種濃度時膠體金滲濾法鐵蛋白測定值差異無統計學意義(P>0.05)，見圖3B。(3)黃疸干擾，當標本中膽紅素濃度為10.2～324.6 μmol/L時，鐵蛋白值在86～94范圍內波動，差異無統計學意義(P>0.05)，見圖3C。

2.1.7穩定性4 ℃條件下放置3 d測定結果與新鮮全血的鐵蛋白誤差小于5%。

2.2臨床應用

注：A、B、C分別為溶血、乳糜、膽紅素對膠體金法測定全血鐵蛋白的影響。

圖3溶血、乳糜、膽紅素對膠體金法測定全血鐵蛋白的影響

2.2.12組兒童體內全血鐵蛋白水平變化IDA組全血鐵蛋白、血清鐵水平明顯低于健康對照組，而總鐵結合力明顯高于健康對照組，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。

表1　各組全血鐵蛋白水平變化分析±s)

2.2.2膠體金法測定全血鐵蛋白結果與疾病的符合率以試劑盒說明書20 ng/mL作為診斷臨界點，評價其臨床應用價值，其靈敏度為94%，特異度為100%，診斷效率為97%，見表2。

表2　膠體金法測定全血鐵蛋白結果與疾病的符合情況(n)

3討論

鐵是人體所必需的一種微量礦物元素，在氧的運輸，血紅蛋白形成，電子傳遞和多種酶促反應中扮演著重要角色[7]。血清鐵蛋白是體內鐵儲存的主要形式，參與調節人體鐵的代謝平衡，是目前公認的評估鐵儲存狀態的重要標志物[8]。近年來越來越多的研究資料表明，體內鐵代謝異常參與了多種生理、病理過程，鐵過量與腫瘤、糖尿病、冠心病等疾病密切相關[9]。鐵缺乏則是導致貧血發生的重要原因之一[7]。IDA是指由于血液中缺乏足夠的鐵，導致紅細胞或者血紅蛋白水平下降的一類多發于孕期女性、嬰幼兒及青少年的常見疾病，研究顯示孕婦缺鐵會導致嬰兒早產、體質量過低，同時，鐵缺乏會損傷嬰幼兒的中樞神經系統髓鞘的形成，影響嬰幼兒學習能力，對其智力造成不可逆的損傷，因而快速準確地檢測孕婦和嬰幼兒的體內鐵水平，及時發現鐵缺乏，并補充適量的鐵，對于嬰幼兒的健康和發育具有長遠意義。目前診斷IDA最有效的方法是骨髓鐵染色檢測細胞內外鐵水平[10]，但骨髓鐵染色只適用于大型醫院的臨床工作，由于其標本的采集及方法學的限制，不利于進行快速篩查以及床旁檢測。研究顯示血清鐵蛋白能有效地反映體內鐵的存儲量，對IDA有較好的診斷價值，其標本的采集及在臨床的推廣要比骨髓鐵染色更為方便[11-12]。

目前大部分醫療機構主要是通過免疫化學發光法檢測血清鐵蛋白，雖然此種方法檢測的特異度和靈敏度較高，其缺點在于一方面檢測標本需要抽取靜脈血，對嬰幼兒檢測時標本采集比較困難；另一方面，需要大型化學發光分析儀且耗時，不適合床旁檢測和快速篩查。

國產膠體金定量檢測全血鐵蛋白采用雙抗夾心免疫層析法原理，當測試卡上的樣品墊吸收到適量標本時，標本中的鐵蛋白會與標本墊中的膠體金標記抗體結合，形成“鐵蛋白-金標抗體”復合物。檢測線色帶的顏色強度與鐵蛋白水平呈正相關。

本研究顯示膠體金法檢測全血鐵蛋白濃度在0～100 ng/mL內線性良好，Y=0.975X+0.103，r2=0.997，該法的標本穩定性較好，2～8 ℃可保存3 d，黃疸、脂血、溶血對結果無干擾，將膠體金法和化學發光兩種方法測定結果進行比較，差異無統計學意義(t=0.692，P>0.05)，與血清鐵蛋白比較，全血鐵蛋白測定結果偏低，差異無統計學意義(P>0.05)。作為即時檢測，膠體金法不失為一種簡便、快速的全血鐵蛋白檢測系統，其分析性能可滿足臨床即時篩查的要求。

全血鐵蛋白在IDA患兒中明顯降低，以20 ng/mL作為臨界點，膠體金法測定全血鐵蛋白具有較高診斷效率，在IDA診斷中有重要的意義，可作為一種快速篩查，對是否缺鐵作提示性診斷。如出現陽性，需結合臨床和其他檢查綜合考慮。

綜上所述，膠體金滲濾法檢測全血鐵蛋白為一種簡便、快速的全血鐵蛋白檢測系統，其分析性能可滿足臨床即時檢測的要求。鐵蛋白能有效地反映體內鐵儲存量，對IDA有較好的診斷價值，為嬰幼兒的IDA快速篩查提供一種新型高效的檢測方法。

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Evaluation of performance of colloidal gold method on detecting blood ferritin and the value of blood ferritin in iron deficiency anemia in children

SONGTao1,TANShi1,LIQiuhong1,ZHAOYan2,LIXiaoqiang3,LIChunli1△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,ChongqingHealthCenterforWomenandChildren，Chongqing400013,China；2.ChildrenHealthCareDepartment,ChongqingHealthCenterforWomenandChildren，Chongqing400013,China；3.DepartmentofClinicalLaboratory，Children′sHospitalofChongqingMedicalUniversity，Chongqing400013，China)

ObjectiveTo analyze the performance of the colloidal gold method on detecting blood ferritin and the value of blood ferritin in iron deficiency anemia children.MethodsBy comparing with the chemiluminescence immunoassay method,the sensitivity,the liner，comparision and the distraction-analysis of blood ferritin were estimated following the EP file.A total of 50 children from Children′s Hospital of Chongqing Medical University diagnosed with iron deficiency anemia were enrolled randomly into this observational study.Other 50 abnormal children from Chongqing Health Center of Women and Children were selected into the control group.The blood ferritin was detected in the two groups.Efficiency of diagnose was analyzed.ResultsBetween-run assays were 7.2% and 9.6%，the linear range was 0-100 ng/mL.Hemoglobin,serum bilirubin,triglyceride had no interference in blood ferritin detection.Compared with the serum ferritin of Architect i2000SR,there was no significant difference(P>0.05).With the control group,the blood ferritin was significantly decreased.If 20 ng/mL was used as the cut-off value,the sensitivity was 94%,the specificity was 100%,the efficiency of diagnose was 97%.ConclusionAs a POCT detection project,analysis capability of the blood ferritin assayed by colloidal gold method could meet the requirements of clinical test.With good efficiency of diagnose,the method could prompt iron deficiency in children.

colloidal gold method；whole blood；ferritin；performance evaluation

2016-01-12修回日期：2016-03-19)

宋濤，男，檢驗師，主要從事生化與免疫檢驗研究?！?/p>

， E-mail:lcl518023@126.com

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.017

A

1673-4130(2016)12-1639-04

·論著·