幽門螺桿菌感染對特發性血小板減少性紫癜患者外周血CD4+CD25+T調節細胞的影響*

汪宇嬰，馮春顏

(廣東省深圳市龍華新區人民醫院檢驗科　518109)

·臨床研究·

幽門螺桿菌感染對特發性血小板減少性紫癜患者外周血CD4+CD25+T調節細胞的影響*

汪宇嬰，馮春顏

(廣東省深圳市龍華新區人民醫院檢驗科518109)

目的探討幽門螺桿菌(HP)感染對特發性血小板減少性紫癜(ITP)患者CD4+CD25+T調節細胞的影響，進一步揭示ITP的發病機制，為臨床診斷、治療與預防提供重要的理論依據。方法2013年1月至2014年12月門診及住院收治的ITP患者33例納入ITP組，HP陰性13例，HP陽性30例。另選取健康體檢者40例作為對照組，其中HP陰性23例，HP陽性17例；均測定血清CD4+CD25+T調節細胞的濃度。結果ITP組HP陽性率明顯高于對照組，差異有統計學意義。對照組HP陰性者與對照組HP陽性者CD4+CD25+T調節細胞的濃度比較，差異有統計學意義(P<0.05)。對照組HP陰性者、陽性者分別與ITP 組HP陰性者、陽性者比較，差異有統計學意義(P<0.05)。ITP組HP陰性者與HP陽性者比較，差異無統計學意義(P>0.05)。結論HP感染與ITP的發病有一定關系，健康人群HP感染可增加CD4+CD25+T調節細胞的濃度；與健康人相比，ITP患者CD4+CD25+T調節細胞的濃度降低；而HP感染ITP對CD4+CD25+T調節細胞沒有影響。

幽門螺桿菌；特發性血小板減少性紫癜；CD4+CD25+T調節細胞

特發性血小板減少性紫癜(ITP)是一種獲得性特異性自身免疫性疾病，以骨髓巨核細胞發育成熟障礙，血小板生存時間縮短，數量減少，產生血小板膜糖蛋白特異性自身抗體，并伴有廣泛皮膚黏膜及內臟出血為特征。是臨床最常見的一種血小板減少性疾病。近年來有學者從基因方面對ITP病例和健康人群進行研究，例如Rs17101655位點T→G多態性的基因型和等位基因頻率分布[1],CD86基因啟動子-3479 A/C位點單核苷酸多態性與ITP遺傳易感性[2]，但都暫時未發現兩者有差異。ITP的發病機制迄今尚未完全闡明，但已有研究表明自身免疫性疾病的易感性與CD4+CD25+T調節細胞及幽門螺桿菌(HP)感染有關。有研究表明ITP患者行HP根除治療后，患者血小板計數升高，提示HP感染可能與ITP的發生有一定的關系[3]。另外，ITP患者外周血CD4+CD25+T調節細胞的數量明顯降低[4-5]。HP的感染可以干擾免疫系統，使CD4+CD25+T調節細胞數量增加。HP感染的ITP患者CD4+CD25+T調節細胞的情況如何尚不清楚。能不能用CD4+CD25+T調節細胞的濃度變化來判斷ITP患者病情的變化和轉歸，讓患者免受取骨髓的痛苦？本研究旨在討論HP感染對ITP患者CD4+CD25+T調節細胞的影響，進一步揭示ITP的發病機制，為臨床預防、診斷和治療提供重要的理論依據。

1資料與方法

1.1一般資料深圳市龍華新區人民醫院血液科2013年1月至2014年12月門診及住院收治的ITP患者33例納入ITP組，診斷均符合《血液病診斷及治療標準》[6]，其中男14例，女19例；年齡19～69歲，平均(39.0±6.5)歲；所有患者均為初次入院患者，既往未使用激素類藥物，排除其他自身免疫性疾病。另選取健康體檢者40例作為對照組，其中男17例，女23例；年齡20～65歲，平均(41.1±5.9)歲；無糖尿病、腫瘤及其他免疫性疾病病史，近2個月內未服用過激素及免疫抑制劑，2周內未患感染性疾病。

1.2儀器與試劑異硫氰酸熒光素(FITC)標記的鼠抗人CD4單克隆抗體(CD4-FITC),藻紅蛋白(PE)標記的鼠抗人CD25單克隆抗體(CD-25PE)；相應同型對照抗體為FITC標記的小鼠IgG1、PE標記的小鼠IgG1,試劑為美國Beckman coulter公司產品，美國BD公司FACSC calibur流式細胞儀。

1.3檢測方法(1)HP陽性的確定：采用14C-尿素呼氣試驗(UBT)確定，14C-UBT≥100 dpm/mmol即診斷為陽性。CD4+CD25+T調節細胞濃度的測定。(2)CD4+CD25+T調節細胞的濃度測定：抽取2 mL靜脈血，采用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝。取流式專用試管2支分別標記對照管和測定管。對照管中加入CD4+-FITC和IgG-PE各20 μL。測定管中加入CD4+-FITC和CD25+-PE各20 μL。再分別加入標本100 μL，混勻，室溫避光20 min。兩管分別加溶血素50 μL，混勻，室溫避光10 min，加蒸餾水500 μL，混勻，室溫避光10 min。加磷酸緩沖鹽溶液(PBS)3 mL。1 500 r/min離心5 min,棄上清，留沉淀，混懸。采用Cellquest軟件進行上樣，并用該軟件自動統計結果。

2結果

2.1兩組HP陽性率比較ITP組HP陽性率明顯高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。

表1　兩組HP陽性率比較

注：與對照組比較，*P<0.05。

2.2兩組CD4+CD25+T調節細胞的濃度比較對照組HP陰性者與對照組HP陽性者CD4+CD25+T調節細胞的濃度比較，差異有統計學意義(P<0.05)。對照組HP陰性者、陽性者分別與ITP組HP陰性者、陽性者比較，差異有統計學意義(P<0.05)。ITP組HP陰性者與HP陽性者比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

表2　兩組CD4+CD25+T調節細胞的濃度比較

注：與ITP組HP陽性者比較,*P<0.05；與ITP組HP陽性者比較,#P<0.05；與ITP組陰性者比較，△P<0.05。

3討論

ITP發病較隱匿，國內外一直缺乏較為準確的臨床流行病學資料。隨著對ITP發病機制不斷深入研究，目前一般認為免疫因素介導占主要原因。自1998年Gsabarrini等首先提出了HP感染與ITP的發病有關，目前國內外已有許多研究，提示HP感染與ITP的發生有一定的關系[7]。CD4+CD25+T調節細胞是維持機體免疫耐受的重要調控者，在自身免疫性疾病中起重要作用。CD4+CD25+T調節細胞是一種表達白細胞介素-2(IL-2)受體α鏈(CD25)的CD4+T細胞。CD4+CD25+T調節細胞具有低反應性和免疫抑制的特點。低反應性是指體外很難繁殖和擴增；免疫抑制主要指其具有抑制CD4+和CD8+細胞活化與增殖的能力。Zahran等[8]與Aboul等[9]研究發現，無論是急性還是慢性ITP患者外周血CD4+CD25+T調節細胞數量都是減少的。CD4+CD25+T調節細胞活化后分泌大量的IL-10、腫瘤壞死因子(TGF)-β等抑制性細胞因子，其功能通過這些抑制性細胞因子來實現。因此，推測可能由于ITP患者外周血中CD4+CD25+T輔助細胞數量減少，有效的免疫抑制作用降低，導致自身反應性T細胞激活增多、凋亡減少，促進了血小板的破壞。

CD4+CD25+T調節細胞在HP逃避宿主免疫清除中也起一定作用，Lundgren等[10]發現HP感染者胃和十二指腸黏膜CD4+CD25+T調節細胞高于未感染者，并且它抑制胃黏膜對HP的免疫反應，使HP的感染持續存在。而國內王雪梅等[11]的研究表明HP感染可增加CD4+CD25+T調節細胞的濃度。ITP患者外周血CD4+CD25+T調節細胞的濃度是下降的；HP感染者CD4+CD25+T調節細胞的濃度是升高的；HP感染與ITP的發生有一定的關系。但本研究分析顯示HP感染對ITP患者CD4+CD25+T調節細胞濃度無影響，這有可能是統計例數太少所致。希望有更多的學者進一步研究HP感染對ITP患者CD4+CD25+T調節細胞的影響。未來將加大研究例數，觀察能否用CD4+CD25+T調節細胞的濃度變化來判斷ITP患者病情的變化和轉歸。為ITP的發病機制、臨床診斷、治療與預防提供重要的理論依據。

[1]李麗華，徐顏美，李靜，等．江西漢族人群NRG3基因rs17101655 T→G單核苷酸多態性與ITP的關聯性研究[J]．實驗與檢驗醫學，2014(3)：237-239．

[2]吳品，王智，陸時運，等．CD86基因啟動子-3479 A/C位點單核苷酸多態性與ITP遺傳易感性的關系[J]．山東醫藥，2014(45)：19-22．

[3]莫偉明，葉君，陸甜甜．免疫性血小板減少性紫癜伴幽門螺桿菌感染相關性調查[J]．臨床血液學雜志，2014，27(5)：787-789．

[4]王欣，楊敬慈，張廣杰，等．CD4+CD25+調節性T細胞表達在ITP和AIHA中的意義[J]．河北醫藥，2011，33(16)：2462-2463．

[5]宋麗，金呈強，劉仿，等．急性ITP患兒外周血Tr細胞及其與IL-2的相關性研究[J]．中國免疫學雜志，2010，26(5)：462-463．

[6]張之南，沈悌．血液病診斷及療效標準[M]．3版．北京：科學出版社，2007：172-176．

[7]金瑞放，黃智銘．調節性T細胞與幽門螺桿菌持續感染的研究進展[J]．國際消化病雜志，2010，30(5)：259-260,286．

[8]Zahran AM,Elsayh KI.CD4+CD25+high Foxp3+ regulatory T cells,B lymphocytes,and T lymphocytes in patients with acute ITP in assiut children hospital[J].Clin Appl Thromb Hemost,2014,20(1):61-67.

[9]Aboul LM,Abdel MM,El-Deen MA,et al.Role of CD4+CD25+T cells in children with idiopathic thrombocytopenic purpura[J].J Pediatr Hematol Oncol,2011,33(2):81-85.

[10]Lundgren A，Stromberg E，Sjoling A，et al．Mucosal FOXP3-expressing CD4 CD25 high regulatory T cells in Helicobacterpylori infected patients[J].Infect Immun，2005，73(1)：523-531．

[11]王雪梅，楊清峰，方強，等．幽門螺桿菌感染者CD4+CD25+調節性T細胞的檢測及其相關性分析[J]．中國微生態學雜志，2011，23(12)：1094-1096．

2016-01-12修回日期：2016-03-22)

深圳市龍華新區科技局資助項目(2013027)。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.032

A

1673-4130(2016)12-1678-03