肺炎糖漿的質量標準研究

劉 靜

(海門市中醫院，海門　226100)

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肺炎糖漿的質量標準研究

劉 靜

(海門市中醫院，海門226100)

摘要：目的建立肺炎糖漿的薄層鑒別方法和含量測定方法。方法 采用薄層色譜法對處方中連翹、金銀花和玄參進行定性鑒別；采用HPLC法對君藥麻黃中的鹽酸麻黃堿進行含量分析。結果 薄層色譜斑點清晰，陰性無干擾；制定了麻黃中鹽酸麻黃堿含量標準。結論 該方法簡便快速，結果準確可靠，可作為該制劑的質量控制標準。

關鍵詞：肺炎糖漿；薄層色譜；高效液相色譜法

肺炎糖漿是海門市中醫院中藥制劑，由金銀花、連翹、天竺黃、玄參和麻黃等組成，具有辛涼宣泄、清肺平喘功效，臨床用于屬風熱痰阻之證的小兒肺炎，表現為喘逆氣急、痰熱壅盛風邪犯肺，臨床療效顯著。原質量標準僅有簡單的理化鑒別項，為提高制劑質量標準，采用薄層色譜法[1]對制劑中的連翹、金銀花、玄參進行鑒別；采用高效液相色譜法對麻黃中鹽酸麻黃堿進行含量測定，該方法專屬性強，重復性好，結果滿意。

1儀器與試藥

1.1儀器CAMAG TLC VISUALIZER型薄層自動成像儀(瑞士卡瑪公司)；BS110S萬分之一天平(北京賽多利斯儀器系統有限公司)；Agilent1260型高效液相色譜儀(美國安捷倫)； Agilent-G1311C型四元泵(美國安捷倫公司)； Agilent-G1315D型二極管陣列檢測器(美國安捷倫公司)； Agilent-G1329B型真空脫氣器(美國安捷倫公司)；CHEMSTATION B.04.02版化學工作站(美國安捷倫公司)；KQ-250B型超聲清洗機(昆山超聲儀器有限公司)；Mettler Toledo EL2401電子天平(梅特勒-托利多公司)。

1.2試藥連翹苷(批號110821-200711)，金銀花對照藥材(批號121060-200805)，綠原酸對照品(批號110753-200413)，玄參對照藥材(批號121018-200503)，哈巴俄苷對照品(批號111730-200501)，鹽酸麻黃堿對照品(批號171241-201007)，均購于中國藥品生物制品檢定研究院；肺炎糖漿(批號：140602，140609，140825)及陰性對照均由海門中醫院制劑室生產；乙腈、甲醇為色譜純；水為重蒸餾水；其余試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1薄層色譜鑒別

2.1.1連翹的TLC鑒別 取本品20 mL，先用水飽和正丁醇溶液振搖并提取2次，每次為20 mL，合并正丁醇液，再用氨試液洗滌2次，每次20 mL，棄去氨試液，再用正丁醇飽和水洗滌2次，每次為20 mL，將正丁醇液蒸干，加入甲醇1 mL，使殘渣溶解，作為供試品溶液。取連翹苷對照品適量，加甲醇制成1 mL含0.25 mg的對照品溶液[2]。取缺連翹藥材的陰性對照樣品，參照供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。參照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)實驗，分別吸取供試品2～4 μL、陰性對照品溶液2～4 μL及對照品溶液3 μL，依次點于硅膠G薄層板上，展開劑為三氯甲烷-丙酮-甲醇-甲酸(12∶2.5∶2∶0.2)，展開，取出，晾干，噴100 mL·L-1的硫酸乙醇溶液再晾干，105 ℃加熱至斑點顯色清晰；置于日光下檢視。供試品色譜中，與對照品色譜相對應的位置可顯相同的斑點，陰性樣品色譜在相對應位置沒有干擾，見圖1。

2.1.2金銀花的TLC鑒別取樣品5 mL，加稀鹽酸0.5 mL，混勻，用乙酸乙酯振搖并提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯溶液并蒸干，加1 mL甲醇使殘渣溶解，作為供試品溶液[3-5]。取缺金銀花藥材的陰性對照樣品，參照供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。取綠原酸對照品適量，加入甲醇制成1 mL含0.5 mg的對照品溶液。參照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)實驗，吸取以上供試品溶液3～5 μL、陰性對照品溶液3～5 μL和對照品溶液各4 μL依次點于聚酰胺薄膜，展開劑為甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(1∶15∶1∶1∶2)的上層；展開，取出，晾干，在紫外燈365 nm下進行檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相對應的位置可顯相同顏色熒光斑點，陰性樣品色譜在相對應的位置上沒有干擾，見圖2。

圖1肺炎糖漿中連翹的薄層色譜圖

1～3.供試品；4.缺連翹的陰性對照；5.連翹苷

Fig.1 TLC ofFructusforsythiaein Pneumonia Syrup; 1-3.test samples; 4.reference substance WithoutFructusforsythiae;5.Fructusforsythiaeglycosides

圖2 肺炎糖漿中金銀花的薄層色譜圖

1～3. 供試品；4. 缺金銀花的陰性對照；5. 綠原酸

Fig.2 TLC ofLonicerajaponicain Pneumonia Syrup

1-3.test samples 4.reference substance withoutLonicerajaponica5.chlorogenic acid

2.1.3玄參的TLC鑒別 取本品20 mL，用水飽和正丁醇溶液振搖并提取2次，每次30 mL，合并正丁醇溶液;用氨試液洗滌2次，每次20 mL，棄去氨試液；再用正丁醇飽和水溶液洗滌2次，每次20 mL，保留正丁醇液蒸干；殘渣加5 mL水溶解，通過D101型大孔吸附樹脂，先用60 mL水洗滌，棄去水液，再用400 mL·L-1乙醇50 mL洗脫，棄去洗脫液，然后用700 mL·L-1乙醇60 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加1 mL甲醇溶解，作為供試品溶液[6-8]。取缺玄參藥材的陰性對照樣品，參照供試品溶液的制法，制成陰性對照溶液。再取哈巴俄苷對照品，加甲醇后制成1 mL含1 mg的對照品溶液。根據薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄ⅥB)實驗，分別吸取供試品、陰性對照品溶液、對照品溶液各10 μL，依次點于硅膠G薄層板上，展開劑為正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)的上層液，展開，取出，晾干，噴以50 mL·L-1的香草醛硫酸溶液，吹熱至顯色清晰；日光下檢視。不同批次的樣品均檢出哈巴俄苷，且與玄參對照藥材的主斑點相對應，而缺玄參的陰性對照在相同位置未檢出哈巴俄苷，說明陰性對照無干擾，見圖3。

圖3肺炎糖漿中玄參的薄層色譜圖

1～3.供試品；4.缺玄參的陰性對照品；5.哈巴俄苷對照品Fig.3 TLC ofRadixscrophulariaein Pneumonia Syrup

1-3.test samples；4.reference substance withoutRadixscrophulariae;5.khabarovRussiaglycosidereference substance

2.2含量測定

2.2.1色譜條件 色譜柱： Megres-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相：乙腈1 mL·L-1磷酸溶液(含1 mL·L-1三乙胺)(5∶95)；檢測波長：210 nm；進樣量：10 μL；柱溫：30 ℃；理論板數按照鹽酸麻黃堿峰的計算不低于5 000。

2.2.2對照品溶液制備 取鹽酸麻黃堿對照品，精密稱定，加0.1 mol·L-1的鹽酸溶液制成質量濃度為20 μg·mL-1的鹽酸麻黃堿溶液[9-10]。

2.2.3供試品溶液制備 將提取方式進行優化，參考《中國藥典》2010年版一部“小兒清肺化痰口服液”含量測定項下方法，建立肺炎糖漿含量測定方法：精密量取本品20 mL，加水10 mL及濃氨試液1 mL，用乙醚振搖提取5次，分別為30，30，30，20和20 mL，合并乙醚提取溶液，加鹽酸乙醇溶液(1→20)2 mL，混勻，低溫回收溶劑至干；殘渣用乙醇5 mL溶解并轉移至25 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。精密量取10 μL，注入液相色譜儀。

2.2.4陰性對照溶液制備 按照處方，取除麻黃外的其余藥材，按照制備工藝要求，制成不含麻黃的肺炎糖漿(由海門中醫院提供)，按照供試品溶液制備項下的方法，制成陰性對照溶液，在上述色譜條件下進行測定。

結果顯示，在供試品溶液色譜峰中，與鹽酸麻黃堿對照品相對應的保留時間有明顯的吸收峰，陰性對照在與鹽酸麻黃堿對照品相同的保留時間處，無色譜峰干擾。見圖4。

圖4 肺炎糖漿的 HPLC圖

A.鹽酸麻黃堿對照品溶液；B. 肺炎糖漿供試品溶液；C.陰性對照溶液

Fig.4 HPLC chromatograms of Pneumonia SyrupA.reference substance solution of ephedrine hydrochloride；B.product solution of Pneumonia Syrup；C.negative control solution

2.2.5標準曲線的制備與線性范圍考察 精密吸取質量濃度為20.90 μg·mL-1的鹽酸麻黃堿對照品溶液0.5，1，2，4，8和10 μL，注入液相色譜儀，按照上述色譜條件測定，縱坐標為峰面積的積分值，而鹽酸麻黃堿的進樣量(μg)為橫坐標，繪制其標準曲線，求得回歸方程：Y=1 917.263 1X+3.553 6，r=0.999 7，結果顯示，線性關系良好。

2.2.6精密度實驗 精密吸取鹽酸麻黃堿對照品溶液10 μL，連續進樣6次，顯示峰面積測定值的RSD為0.80%，說明儀器的精密度良好。2.2.7重復性實驗 取相同批號(140825)的肺炎糖漿6份，按照本文含量測定項下的方法測定供試品中鹽酸麻黃堿[11]的含量，計算平均含量和RSD。

2.2.8穩定性實驗 取供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，每隔一定的時間測定1次峰面積，直至16 h。結果表明，鹽酸麻黃堿在16 h內基本穩定。

2.2.9加樣回收實驗 精密量取已知含量的樣品6份(批號140825，質量濃度為13.15 μg·mL-1)，每份取10 mL，分別精密加入鹽酸麻黃堿對照品適量，按照正文供試品溶液制法制成加樣回收供試品溶液，按照實驗含量測定項下的色譜條件，分別進樣10 μL，計算回收率和RSD。結果見表1。結果表明，本方法的加樣回收率實驗良好。

表1 回收率實驗結果

Tab.1 Results of recovery test

實驗號取樣量/mL樣品中量/mg加入量/mg測得總量/mg·mL-1回收率/%平均回收率/%RSD/%1100.13150.16720.2995100.47102.392.792100.13150.16720.3044103.423100.13150.16720.3077105.394100.13150.16720.3024102.245100.13150.16720.295197.866100.13150.16720.3070104.94

2.2.10樣品測定及含量限度的確定 按照本實驗含量測定項下的方法，測得5批(批號：140116，140602，140609，140813和140825)不同樣品中的鹽酸麻黃堿含量分別為10.13，10.90，7.48，13.08和13.28 μg·mL-1。

根據上述5批樣品的含量測定結果，在其平均含量的基礎上再下浮30%，因此暫訂為本品1 mL含麻黃以鹽酸麻黃堿(C23H23O11)計，不得少于7 μg。

3討論

肺炎糖漿是由多味中藥飲片經現代工藝加工制成，根據江蘇省食品藥品監督管理局有關醫院制劑要求，需要提高制劑質量標準。

本制劑中連翹的定性鑒別曾參照2010年版《中國藥典》“連翹”藥材項下連翹苷鑒別，結果斑點分離不清晰，后經過反復實驗，調整展開劑的比例，以三氯甲烷-丙酮-甲醇-甲酸(12∶2.5∶2∶0.2)為展開劑，結果斑點分離完全、清晰，表明此方法專屬性強，重復性好，且陰性無干擾。

本制劑中金銀花的定性鑒別中，曾參照2010年版《中國藥典》“金銀花”藥材項下綠原酸的鑒別，結果斑點分離不清晰，陰性有干擾，后經過反復實驗，改變樣品的前處理，薄層板應用聚酰胺薄膜，展開劑調整為甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(1∶15∶1∶1∶2)的上層液；在紫外燈365 nm下檢視，結果斑點分離完全，表明此方法專屬性強，重復性好，且陰性無干擾。

玄參的定性鑒別曾參照2010年版《中國藥典》“玄參”藥材項下哈巴俄苷鑒別，結果斑點分離不清晰，陰性有干擾，后經過反復實驗，改變樣品的前處理，用水飽和正丁醇振搖提取，用氨試液洗滌，再用正丁醇飽和水溶液洗滌，通過D101型大孔吸附樹脂，以正丁醇-冰醋酸-水(7∶1∶2)的上層液為展開劑，結果表明，此方法專屬性強，重復性好。

本品是由生麻黃、連翹、金銀花等10味中藥組成的復方制劑，麻黃作為君藥，其主要化學成分為鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿等，肺炎糖漿樣品中幾乎未檢出鹽酸偽麻黃堿的色譜峰，因此建議暫不測定鹽酸偽麻黃堿的含量，僅測定樣品中鹽酸麻黃堿的含量。將提取方式進行優化，參考《中國藥典》2010年版一部“小兒清肺化痰口服液”含量測定項下的方法，建立了肺炎糖漿的含量測定方法，以鹽酸麻黃堿為對照品，根據含量測定結果，在其平均含量的基礎上再下浮30%，鑒于麻黃的特殊性，其上限將在以后的實驗中進行進一步研究，因此暫訂為本品1 mL含麻黃以鹽酸麻黃堿(C23H23O11)計，下限為不低于7 μg。

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doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2016.04.011

中圖分類號：R284

文獻標志碼：A

文章編號：1004-2407(2016)04-0364-04

(收稿日期：2015-09-13)

Study on the quality standard of Pneumonia Syrup

LIU Jing

(Haimen Hospital of Traditional Chinese Medicine，Haimen 226100，China)

Abstract:ObjectiveIn order to establish a TLC identification method and content determination method for Pneumonia Syrup.Method Fractus forsythiae, Lonicera japonica and Radix scrophulariae were identified by TLC. High performance liquid chromatography was adopted to analyze the content of ephedrine hydrochloride in the medicine. ResultsTLC spots were clear without negative interference.Standards for ephedrine hydrochloride were set up.Conclusion The method is easy, fast， and reliable, and could be used to control the quality of Pneumonia Syrup.

Key words:Pneumonia Syrup; TLC;HPLC