2 816例婦女宮頸脫落細胞人乳頭瘤病毒的檢測結果分析

楊笑瓊,肖　翔,鐘陽青,張達秀

(廣東省東莞市塘廈醫院檢驗科　523721)

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·臨床研究·

2 816例婦女宮頸脫落細胞人乳頭瘤病毒的檢測結果分析

楊笑瓊,肖翔,鐘陽青,張達秀

(廣東省東莞市塘廈醫院檢驗科523721)

摘要:目的了解東莞地區婦女宮頸脫落細胞人乳頭瘤病毒(HPV)的感染情況和基因型分布特點。方法收集2014年1月至2015年10月該院就診的婦女宮頸脫落細胞，進行HPV基因分型檢測。采用深圳亞能公司生產的核酸提取試劑、聚合酶鏈反應(PCR)試劑和反向斑點雜交(RDB)試劑檢測23種常見的HPV基因型。統計HPV的感染率和基因型分布特點。結果總共檢測2 816例標本，HPV陽性標本數為1 018例，總感染率為36.15%，其中高危型占68.86%(701/1 018)，低危型占31.14%(317/1 018)。高危型以HPV52、58、18 3種亞型為主，分別占13.7%(139/1 018)、7.0%(71/1 018)和4.9%(50/1 018)，低危型以HPV6、16、43 3種亞型為主，分別占11.3%(115/1 018)、10.6%(108/1 018)、9.3%(95/1 018)。<20歲、20～<30歲、30～<40歲、40～<50歲、50～<60歲、>60歲年齡組的HPV感染率分別為24.36%、33.27%、41.96%、38.24%、30.11%、33.62%。HPV單一感染率為68.27%，混合感染率為31.73%。結論東莞地區HPV感染率較高，應加強HPV的篩查。

關鍵詞:人乳頭瘤病毒;基因型;流行病學調查

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。HPV持續感染是引起宮頸癌的必要因素，90%以上的患者有HPV感染[1]。據報道，全球約有2.91億婦女感染HPV，宮頸癌已成為全世界女性常見的惡性腫瘤。不同的HPV基因型具有不同的致病性，一般將其分為高危型和低危型。HPV感染在不同國家、不同地區存在著較大差異。因此，獲得東莞地區的HPV基因型分布特點有助于臨床疾病的篩查和診療。本研究對2 816例婦科門診患者的宮頸脫落細胞HPV感染率進行分析得到東莞地區的流行病學調查數據，為臨床診療提供依據。

1資料與方法

1.1一般資料2014年1月至2015年7月在本院就診的門診或住院患者共2 816例。年齡15～83歲，平均36.4歲。

1.2儀器與試劑DNA快速提取試劑盒； 聚合酶鏈反應(PCR)擴增儀；PCR-反向斑點雜交(PCR-RDB)試劑盒；分子雜交箱。以上試劑設備均由深圳亞能公司提供。

1.3方法

1.3.1宮頸脫落細胞的采集采集使用專用的宮頸脫落細胞采集器，先用窺陰器或陰道張開器暴露宮頸，用棉拭子將陰道及宮頸口過多的分泌物輕輕擦拭干凈，再用試劑盒提供的專用宮頸刷插入子宮頸外口，單方向旋轉4～5周以獲得足量的上皮細胞標本，然后將其放入含專用細胞保存液的試管中，2～8 ℃冰箱保存，每隔3 d檢測1次。

1.3.2DNA提取與擴增 吸取500 μL細胞懸液標本，14 000 r/min離心1 min，棄去上清液，然后按試劑盒的DNA提取步驟抽提DNA。取1 μL DNA抽提液，加入HPV擴增體系，采用擴增儀擴增，95 ℃ 預變性10 min，95 ℃ 變性10 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸45 s，擴增40個循環，最后72 ℃延伸5 min，PCR擴增的產物立即雜交分型或-20 ℃保存備用。

1.3.3分子雜交PCR擴增產物95 ℃ 變性5 min，立即放入冰盒2 min，與1 mL預熱至45 ℃的雜交緩沖液混合，在導流雜交儀上45 ℃孵育10 min后導流雜交，加入封阻液封閉，酶標，沖洗，顯色，在30 min內查看分析結果，每次試驗必須具備反應質控點，雜交顯色質控點，陽性對照點顯色，陰性對照點不顯色，表示同時在控，試驗結果有效。

1.3.4結果判斷檢測結果按照說明書規定的判讀方法進行結果判斷。本研究使用的是深圳亞能公司生產的PCR-RDB試劑盒，其可以檢測23中常見HPV基因型，包括18種高危型：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4；5種低危型：HPV6、11、41、42、43。

1.4統計學處理研究數據全部記錄在Excel表格中，采用SPSS17.0統計軟件進行分析，計數資料以率表示，比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1HPV總體感染情況在接受HPV檢查的2 816例患者中，共檢測出1 018例HPV感染者，HPV總感染率為36.15%，其中高危型占68.86%(701/1 018)，低危型占31.14%(317/1 018)。高危型以HPV52、58、18 3種亞型為主，分別占13.7%(139/1 018)、7.0%(71/1 018)和4.9%(50/1 018)，低危型以HPV6、16、43 3種亞型為主，分別占11.3%(115/1 018)、10.6%(108/1 018)、9.3%(95/1 018)。見圖1。

圖1　HPV不同亞型感染率(%)

2.2不同年齡段的感染情況各年齡段的HPV感染率分別為24.36%、33.27%、41.96%、8.24%、30.11%、33.62%。見表1。

表1　各年齡段HPV感染情況表

2.3多重感染情況本實驗檢測的基因型有21種，2 816例受檢者中有單一型HPV基因型感染，有兩種基因型感染，還有多種基因型感染。本次研究得到的1 018例陽性標本中有單一型感染695例，占陽性標本的68.27%；混合感染323例，占陽性標本的31.73%。

3討論

HPV是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒A屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。根據其致病性可將其分為高危型和低危型，研究表明HPV高危型持續感染是引起宮頸癌的必要因數，約有90%以上的宮頸癌患者中存在HPV感染[2]。近年來，宮頸癌已成為全球婦女最常見的惡性腫瘤之一。HPV感染屬于性傳播疾病，性活躍期婦女普遍易感，隨著易感人群的年輕化，HPV感染率持續升高。據統計每年宮頸癌的發病率按照2%～3%的速度增長[3]。

近年來，因為HPV感染得到了大量的研究，研究表明不同地區、人群、篩查方法等原因得到的結果有較大差異。國外研究指出，宮頸癌患者中常見亞型感染依次為HPV16、18、45、31、33、58和52型，而亞洲地區58和52型高于歐美地區常見的31、33和45型[4-6]。我國幅員遼闊，人口眾多，各族人群的生活方式和習慣不同造成我國HPV感染呈現地區多態性。本研究顯示，HPV總感染率為36.15%，其中最長見的亞型為HPV52、6、16、43，與我國其他學者的研究差異較大。

本研究顯示，各個年齡段的HPV感染率都比較高，其中高峰出現在30～<40歲(41.96%)，低谷出現在小于20歲(24.36%)，與其他學者的研究結果之間出現了較大差異，這可能與東莞地區的人口結構有一定的關系，東莞地區有大量的外來務工人員，這些人員中普遍文化程度不高，健康意識淡薄，且經濟基礎不夠扎實，故來醫院檢查的人數較少。在20～<40歲年齡段中的女性普遍性活躍程度比較高，且有了一定的經濟基礎和健康意識，故作檢查的人數和檢出率都比較高；而老年婦女可能是由于處于絕經期，激素水平紊亂、降低、保護性乳酸桿菌的減少及陰道pH 值變化等而使得機體疫功能衰退，HPV易感性增加及清除HPV的能力降低[7-8]。

有文獻顯示，單一型HPV感染可以使宮頸癌的患病風險提高19.9倍，而多重HPV感染則使該風險增加31.8倍，且多重感染對宮頸病變有促進作用[9]。本研究顯示，HPV單一型的感染率為68.27%,多重感染率為31.73%。因此，對HPV多基因型的聯合檢測有利于宮頸癌的早期診斷和治療。

綜上所述，本地區HPV感染率較高達到36.15%，最長見的基因亞型為HPV52、6、16、43。不同年齡段的感染率差異有統計學意義(P<0.05)，且呈現年輕化趨勢。本地區HPV多重感染率較高，達到31.73%。HPV感染潛伏期長短不一，一般為3～6個月，但是也有長達幾年甚至十幾年者。因此，篩查HPV感染是疾病的早期預防和治療的必要手段。

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DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.13.050

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)13-1862-02

(收稿日期：2016-02-23修回日期：2016-05-02)