HBeAg陽性HBV攜帶者T淋巴細胞亞群狀況研究

王維瓊，張雙喜，何國敏，邱廬山，郭潔儀

（廣東省佛山市順德區中醫院內二科，廣東 佛山 528300）

論 著

HBeAg陽性HBV攜帶者T淋巴細胞亞群狀況研究

王維瓊，張雙喜，何國敏，邱廬山，郭潔儀

（廣東省佛山市順德區中醫院內二科，廣東 佛山 528300）

目的：分析HBeAg陽性HBV攜帶者和正常人外周血T細胞亞群的差異，探討HBV攜帶者的發病機制與宿主細胞免疫功能的關系。方法：收集21例HBeAg陽性HBV攜帶者及22例正常人的外周血，檢測T細胞亞群，分析其差異及臨床意義。結果：HBeAg陽性HBV攜帶者的CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞、CD4+/CD8+比值分別為（1302±132）個/μL、（675±152）個/μL、（578±154）個/μL、（1．5±0．3）；正常人群分別為（1502±395）個/μL、（880±267）個/μL、（609±189）個/μL、（1．4±0．4）。與正常對照組比較，HBeAg陽性HBV攜帶者外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞、CD4+/CD8+比值均減少，差異無統計學意義。結論：HBeAg陽性HBV攜帶者T淋巴細胞免疫功能減退，可能導致乙肝病毒感染后慢性化并且病素高度復制。

HBeAg陽性HBV攜帶者；T淋巴細胞亞群；臨床研究

據世界衛生組織報道，全球約20億人曾感染過慢性乙型肝炎病毒（HBV），我國人口中HBV感染率為6%，乙肝表面抗原陽性率約10%，據估計全國有1.2億人為HBV攜帶者［1］。慢性HBV攜帶者因缺乏對HBV的特異性免疫清除，表現為血清HBsAg、HBeAg陽性，而且高病毒載量復制（≥1.0×l06IU/mL）。我們研究了HBeAg陽性HBV攜帶者與正常人T淋巴細胞亞群的差異，借以了解HBeAg陽性HBV攜帶者的細胞免疫功能狀態，報道如下。

1　臨床資料

21例均為2014年至2016年于我院就診的HBeAg陽性HBV攜帶者，設正常人群對照組22例。兩組年齡、性別基線特征相比較差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。研究獲得倫理委員會批準，受試者均簽署知情同意書。

納入標準：①HBeAg陽性慢性HBV攜帶者，符合《2010年慢性乙型肝炎防治指南》；②HBeAg陽性，HBV-DNA≥1.0×104IU/mL（相當于2000IU/Inl）；③丙氨酸轉移酶（ALT）水平小于等于正常上限（ULN）；④年齡18～65歲；⑤肝功能處于代償期（總膽紅素小于等于34.2mmol/L，凝血酶原國際標準化比值小于等于1.5，白蛋白大于30.0g/L，無食管靜脈曲張出血、肝性腦病史或腹水；⑥符合腎虛證候或體質；⑦簽署知情同意書。

排除標準：①年齡18歲以下或65歲以上；②存在其它肝臟疾??；③有嚴重心、腦、腎、呼吸、血液和內分泌等疾??；④近期內有急、慢性胰腺炎病史；⑤濫用乙醇或非法藥物史；⑥在30天內參加了其他肝炎藥物的臨床試驗；⑦入選前24周內曾接受過干擾素、核苷酸類似物、胸腺肽或其他抗病毒藥物治療；⑧懷孕或哺乳期婦女；⑨不符合納入標準，未按規定用藥，無法判斷療效或資料不全等影響療效和安全性觀察。

2　試驗設計

主要試劑及儀器：SEMIBIO CD細胞檢測玻片，SEMIBIO cytoCounter系列全自動可視化細胞檢測儀。

標本收集及檢測。①標本：全部受檢者用EDTAK2真空采血管早晨空腹采集靜脈血2mL，6h內檢測，嚴禁冷藏。②稀釋血樣：反吸法取20μL靜脈血或手指末梢血加至380μL磷酸鹽緩沖液（1包磷酸鹽緩沖液粉劑加400mL蒸餾）中，充分混勻。③孵育：反吸法取5μL稀釋血，加入玻片方框區域中央；濕盒內加入室溫水，水平放置，孵育40min。④洗染：將玻片放至磷酸鹽緩沖液中旋轉提拉后，放至過氧化酶染色液（1包過氧化酶染色粉加500mL95%乙醇）中浸泡1min，再放至新鮮配制的過氧化氫工作液（1mL3%過氧化氫加400mL蒸餾水）中浸泡4min，再放至75%乙醇中旋轉提拉至無色透明后取出，打開鎖扣，干燥6min后放至復染液（1包復染粉加500mL75%乙醇）中浸泡1min，最后在500mL水中浸泡30s后提拉（大于15片提拉5次，小于15片提拉3次），然后打開鎖扣，放入檢測儀自動計數。

外周血T淋巴細胞亞群正常參考范圍：CD3+細胞770～2860/μL，CD4+細胞500～440/μL，CD8+細胞238～1250/μL，CD4+/CD8+比值1.0～2.47。

采用SPSS17.0軟件進行統計學處理，數據用（x±s）表示，正態分布且方差齊的多組均數比較采用方差分析和SNK-q檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

3　結 果

兩組CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞比較見表1。

表1　兩組CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞比較 （±s）

表1　兩組CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞比較 （±s）

注：與正常對照組比較，△P＜0.05。

組別　n　CD3+（個/μL）CD4+（個/μL）CD8+（個/μL） CD4+/CD8+HBV攜帶組 21　1302±132△675±152△　578±154△　1.5±0.3△正常對照組 22　1502±395　880±267　609±189　1.4±0.4

4　討 論

慢性HBV攜帶者對抗病毒治療反應欠佳，源于其自身的免疫耐受。研究表明，乙肝病毒感染后HBV特異性T淋巴細胞亞群（CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值）在對病毒的清除和疾病的轉歸中起著重要的作用［2］。T淋巴細胞表達CD3+分化抗原，再根據細胞表面黏附分子（CD）的不同，分為CD4+、CD8+等T淋巴細胞亞群。CD4+T淋巴細胞通過輔助體液免疫細胞，產生抗體和細胞毒性殺傷作用來清除HBV，其水平下降是HBV感染慢性化的重要原因。CD8+T淋巴細胞是清除HBV的主要效應T細胞，免疫耐受期HBV病毒不斷復制，引起CD8+T淋巴細胞的細胞毒作用隨病毒水平的增高而增強，免疫耐受被打破，進入免疫清除期，降低HBV-DNA復制水平，故免疫耐受期CD8+T淋巴細胞不同亞群的細胞毒作用均低于免疫清除期［3］。

實驗結果顯示，HBV攜帶者的CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細胞、CD4+/CD8+比值均低于正常對照組，提示該人群細胞免疫功能下降，導致感染HBV后乙肝病毒不易清除，疾病呈慢性化發展。提示在對慢性HBV攜帶者抗病毒治療中，應同時考慮調節免疫，增強T淋巴細胞的免疫作用，從而最終清除HBV感染的靶細胞，并徹底消除HBV感染。

［1］ LAVANCHY D ．Hepatitis B virus epidemiology，disease burden，treatment，and current and emerging prevention and control measures［J］．J Viral Hepat，2004，11：97-107．

［2］ 張敏，楊麗莎，彭德珍，等．慢性HBV感染不同免疫狀態及乙肝肝硬化外周血T、B細胞亞群和NK細胞的變化及意義［J］．實用醫學雜志，2014，30 （20）：3233-3236．

［3］ THIMME R，WIELAND S，STEIGER C， et a1．CD8（+）T cells mediate viral clearance and disease pathogenesis during acute hepatitis B virus infection［J］．J Virul，2003，77：68-76．

HBV carrier with HBeAg positive；T-lymphocyte subsets；clinical study

R512.62

B

1004-2814（2016）08-0751-02

2016-04-14

廣東省中醫藥局科研課題（20151153）

［Abstract］Objective：To analysis the difference of T-lymphocyte subsets between the HBV carriers with HBeAg positive and normal persons and to discuss the relationship between the pathogenesis and host cells immune function of HBV carriers. Method： Peripheral blood of 21 cases of HBV carriers with HBeAg positive and 22 cases of normal persons was collected to detect T-lymphocyte subsets and analysis the difference and clinical significance. Result： CD3+， CD4+ and CD8+ T-lymphocyte and the ratio of CD4+/CD8+ of HBV carriers with HBeAg positive was （1302±132）/μL，（675±152）/μL，（578±154）/μL and （1.5±0.3）respectively while that of the normal persons was （1502±395）/μL，（880±267）/μL，（609±189）/μL and （1.4±0.4）respectively. Compared with that of the normal control group， CD3+， CD4+ and CD8+ T-lymphocyte and the ratio of CD4+/CD8+ in peripheral blood of HBV carriers with HBeAg positive decreased， with no statistical significance. Conclusion：T-lymphocyte immunologic decline of HBV carriers with HBeAg positive may be related to active replication of hepatitis B virus after HBV infection.