防曬類化妝品中2種帕地馬酯的高效液相色譜檢測及質譜確證

郭項雨，馬 強,孟憲雙，李 燾，李文雅，白 樺

(中國檢驗檢疫科學研究院，北京 100176)

近年來，隨著化妝品行業的不斷發展，防曬化妝品因具有保護人體免受紫外線輻射損傷的功效而廣受消費者的青睞，市場對防曬化妝品的需求也與日俱增。紫外線吸收劑是防曬類化妝品配方中的一種功效添加成分，可以起到防曬功效[1 - 3]。帕地馬酯是一種典型紫外線吸收劑，可分為帕地馬酯A和帕地馬酯O。其中，帕地馬酯A由于其對眼睛、呼吸道和皮膚有刺激作用，我國《化妝品安全技術規范》(2015年版)中明確規定化妝品中不得添加帕地馬酯A[4]；而帕地馬酯O作為一種常見的紫外線吸收劑，廣泛應用于化妝品及其它透光防日曬工業品中。

目前，針對防曬化妝品中紫外線吸收劑的檢測方法主要有薄層色譜法(TLC)[5]、氣相色譜-質譜聯用法(GC-MS)[6,7]、高效液相色譜法(HPLC)[8,9]、液相色譜-質譜聯用法(LC-MS)[10,11]、微乳液電動色譜法(MEKC)[12]、實時直接分析質譜法(DART-MS)[13]等。雖然上述檢測方法涉及了一些種類的紫外線吸收劑，但防曬化妝品中帕地馬酯A和帕地馬酯O的測定方法尚未見報道。本文研究并建立了防曬類化妝品中帕地馬酯的測定方法，對于確?；瘖y品質量安全和消費者健康安全具有積極意義。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 1200型高效液相色譜儀(美國，Agilent公司)；ACQUITY超高效液相色譜儀，Xevo TQ MS三重四極桿質譜儀，MassLynx數據處理系統(美國，Waters公司)；Milli-Q超純水器(美國，Millipore公司)；KQ-600B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；CR 21G型高速冷凍離心機(日本，日立公司)。

帕地馬酯A(CAS：14779-78-3，純度≥97%)購自上海劉氏醫藥科技有限公司，帕地馬酯O(CAS：21245-02-3，純度≥97%)購自美國Sigma公司。準確稱取帕地馬酯A和帕地馬酯O各10 mg，分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，配制成濃度為1.0 mg/mL的標準儲備液。根據需要用甲醇稀釋成適用濃度的混合標準工作溶液。甲醇、乙腈為色譜純試劑(美國Fisher公司)；其他試劑均為分析純。

1.2 樣品前處理

準確稱取0.2 g樣品(膏霜類樣品需加入0.4 g NaCl)于30 mL具塞離心管中，加入20 mL甲醇，超聲輔助提取20 min，以5 000 r/min離心10 min，上清液經0.45 μm微孔濾膜過濾后，供高效液相色譜測定。

1.3 高效液相色譜條件

色譜柱：XTerra MS C18柱(250×4.6 mm,5 μm)；流動相：乙腈-水(90∶10，V/V)，流速：1.0 mL/min；等度洗脫；進樣量：10 μL；柱溫：30 ℃；檢測波長：310 nm。帕地馬酯A和帕地馬酯O混合標準溶液的高效液相色譜圖見圖1。

1.4 液相色譜-串聯質譜確證條件

色譜條件：XBridge C18柱(150× 2.1 mm,3.5 μm)；流動相：乙腈-0.1%甲酸溶液(90∶10，V/V)，等度洗脫；流速：0.3 mL/min；進樣量：5 μL；柱溫：30 ℃。質譜條件：電噴霧離子源；正離子模式；毛細管電壓：3.5 kV；萃取錐孔電壓：3.0 V；離子源溫度：150 ℃；脫溶劑氣溫度：500 ℃；脫溶劑氣流量：1 000 L/h；錐孔氣流量：50 L/h；多反應監測模式(MRM)檢測，質譜分析參數見表1，帕地馬酯A和帕地馬酯O混合標準溶液的總離子流圖見圖2。

表1 帕地馬酯A和帕地馬酯O的質譜分析參數

2 結果與討論

2.1 檢測波長的選擇

根據帕地馬酯A和帕地馬酯O的化學結構式，選擇在190～400 nm范圍內分別對2種帕地馬酯標準溶液進行全波長掃描以確定其最大吸收波長。結果表明，帕地馬酯A和帕地馬酯O均在波長310 nm處有最大吸收，因此將檢測波長設定為310 nm。

2.2 色譜柱的優化

實驗分別考察了Eclipse XDB C18柱(250×4.6 mm,5 μm)、XTerra MS C18柱(250×4.6 mm,5 μm)、Promosil C18柱(250×4.6 mm,5 μm)、Symmetry C18柱(250×4.6 mm,5 μm)和Kromasil C18柱(250×4.6 mm,5 μm)對帕地馬酯A和帕地馬酯O的分離效果。結果表明，不同C18色譜柱對帕地馬酯A和帕地馬酯O的分離及色譜峰形影響不大，但采用XTerra MS C18柱(250×4.6 mm,5 μm)時，帕地馬酯A和帕地馬酯O的色譜峰形最佳。

2.3 流動相的優化

分別選擇甲醇∶水(50∶50、80∶20、90∶10)、乙腈∶水(80∶20、90∶10)作為流動相進行等度洗脫，考察其對帕地馬酯A和帕地馬酯O色譜行為的影響。結果表明，選擇乙腈∶水(90∶10)作為流動相時，帕地馬酯A和帕地馬酯O的色譜峰形最好，保留時間較為合理，因此流動相最終選擇為乙腈∶水(90∶10,V/V)。

2.4 柱溫的優化

在溫度25 ℃、30 ℃、35 ℃、40 ℃條件下，考察了色譜柱柱溫對分離效果的影響。結果表明，在不同柱溫下，帕地馬酯峰形無顯著差異，保留時間隨溫度增加逐漸變短。柱溫大于30 ℃時，帕地馬酯A保留時間過短，基質成分易對其造成干擾；而在柱溫30 ℃條件下，帕地馬酯保留時間最為合理，因此柱溫選擇為30 ℃。

2.5 提取溶劑的選擇

以不含帕地馬酯A和帕地馬酯O的化妝品作為空白樣品，向其中加入一定量帕地馬酯混合標準溶液，充分混勻后，靜置過夜。然后按1.3樣品前處理步驟分別進行提取。結果表明，以甲醇和乙腈作為提取溶劑，對帕地馬酯的提取效率無明顯差異?？紤]到乙腈的毒性較大及成本較高，最終確定甲醇為樣品提取溶劑。

2.6 質譜確證

由于化妝品配方中成分較多，基質復雜，而液相色譜-串聯質譜法具有更好的特異性和抗干擾能力，因此進一步開發了帕地馬酯A和帕地馬酯O的液相色譜-串聯質譜確證方法，對疑似陽性樣品加以確證。

2.7 方法的線性范圍、檢出限和定量限

將一系列不同質量濃度的帕地馬酯A和帕地馬酯O混合標準溶液依次進樣，以峰面積對質量濃度進行線性回歸，繪制標準工作曲線。結果見表2。

表2 帕地馬酯A和帕地馬酯O的檢出限、定量限、線性范圍和相關系數

2.8 方法的回收率與精密度

分別稱取經測定不含帕地馬酯A和帕地馬酯O的防曬化妝品作為空白樣品，分別添加低、中、高三個濃度的標準混合溶液，同時帕地馬酯O增加一個限量濃度?；厥章屎途芏冉Y果見表3?？瞻谆瘖y品樣品加標后提取，典型色譜圖如圖3所示。

表3 帕地馬酯A和帕地馬酯O的平均回收率及精密度結果(n=6)

2.9 實際樣品的測定

按照本研究建立的方法對市售、網購等多種途徑獲取的24件防曬化妝品樣品進行了測定，其中膏霜類樣品8件、水劑類樣品8件和散粉類樣品8件。結果表明，所測化妝品樣品中均未檢出帕地馬酯A和帕地馬酯O。

3 結論

本研究建立了同時測定化妝品中帕地馬酯A和帕地馬酯O的高效液相色譜檢測方法及液相色譜-串聯質譜確證方法。該方法準確、快速、靈敏度高，適用于化妝品中帕地馬酯A和帕地馬酯O的測定。